潘英文
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省重点科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析被引量：2
- 2010年
- 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白。方法:通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3′端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki。以含canstatin N端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267bp的canstatin的N端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将pPIC9Ki-CTN-N转化P.pastorisGS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115(pPIC9Ki-CTN-N)。通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白。用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:在pAOX1的调控下,canstatin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论:实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础。
- 潘英文张爱联屈直张添元罗进贤
- 关键词：P.PASTORIS基因表达
- 钙网蛋白-N58在毕赤酵母中的表达及活性分析
- 2008年
- 目的:利用毕赤酵母表达系统表达Calreticulin-N58蛋白。方法:利用重叠延伸PCR方法合成Calreticulin-N58基因,构建成分泌型的重组表达载体pPIC9K-CRT-N58。该重组表达载体经SacⅠ线性化后,电激转化入毕赤酵母GS115,经MD板和不同浓度G418筛选得到多拷贝重组菌株。经甲醇诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:重组质粒pPIC9K-CRT-N58在毕赤酵母中经甲醇诱导能分泌表达CRT-N58蛋白,摇瓶表达量大约为60mg/L,纯化的目的蛋白有显著的血管生成抑制作用。结论:实验成功地在毕赤酵母表达系统中实现了Calreticulin-N58的分泌表达。为Cal-reticulin-N58蛋白的进一步药用研究奠定了基础。
- 周细南苏东晓潘英文张添元张爱联
- 关键词：毕赤酵母分泌表达生物活性
- 用E.coli表达Canstatin-N及其表达条件优化被引量：2
- 2009年
- 以重组质粒pET-CN为模板设计引物CASN1和CASN2,PCR方法扩增约267bp的人血管能抑素N端1～89氨基酸基因片段,用EcoR I和Sal I双酶切将其克隆进pET-22b(+)载体获得重组表达质粒pET-22b(+)-CN,转化E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达Canstatin-N,产物以包涵体形式存在。本文在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导培养时间对目标蛋白表达的影响,结果表明IPTG的最佳诱导浓度为0.1mmol/L;37℃下诱导培养2h时产物表达量最高。纯化获得的融合his6的重组Canstatin-N具有免疫和抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成活性。
- 潘英文张爱联张添元苏东晓屈直罗进贤
- 关键词：大肠杆菌基因表达血管生成
- 一种用于治疗血管瘤的蛋白质
- 本发明涉及一种用于治疗血管瘤的蛋白质，是以人脐带静脉基因组DNA作为模版，设计基因片段特异引物，用反转录PCR方法扩增血管能抑素(canstatin)的N端1～89氨基酸基因片段，并在其序列的C末端加上his纯化标签；然...
- 张爱联罗进贤张添元潘英文
- 文献传递
- Canstatin-N基因在E.coli和P.pastoris中表达及其活性分析
- 本研究克隆了人血管能抑素N端基因，实现在大肠杆菌和酵母中表达。
以重组质粒pET-CN为模板设计引物CASN1N和CASN2，PCR方法扩增约267bp的人血管能抑素N端1～89氨基酸基因片段，用EcoRⅠ和S...
- 潘英文
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 文献传递
- Pichia pastoris表达系统的启动子研究进展被引量：2
- 2008年
- Pichia pastoris是近年迅速发展的一种真核表达宿主,具有高效和适于进行高密度发酵等优点,已广泛应用于生产重组蛋白。启动子是表达系统重要组成部分中表达载体的核心元件,它的特性直接影响着它所调控的外源基因的表达。本文简要介绍了P.pastoris表达系统启动子pAOX1,pFLD1,pGAP,pYPT1和pICL1研究进展。
- 潘英文张爱联张添元罗进贤谭燕华屈直
- 关键词：PICHIAPASTORIS启动子
