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结核分枝杆菌泛酸激酶的克隆表达及酶学性质被引量：4: 2006年; 目的:获得具有生物学活性的结核分枝杆菌(Mtb)重组泛酸激酶蛋白.方法:以结核分枝杆菌模式菌株H37Rv基因组为模板,扩增泛酸激酶基因CoaA(Rv1092c),克隆入原核表达载体pET28a中,重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达.在优化后的诱导条件(20℃,10h,0.5mmol/LIPTG)下,收集细菌进行超声破碎,低温高速离心,得到的上清液经镍离子螯合型亲和层析柱纯化重组蛋白.高效液相色谱及质谱鉴定重组蛋白.采用酶联法测定重组蛋白的酶学性质.结果:得到了高表达、高纯度的重组结核分枝杆菌的泛酸激酶,酶催化过程中对泛酸的kcat和Km值分别为273.81kat/L,35.27μmol/L;对ATP的kcat和Km值分别为169.10kat/L,94.43μmol/L.重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得Mr约为39168.在5mmol/LTris-HCl缓冲液,pH值7.5,25℃条件下,重组CoaA的二级结构中有39.3%α螺旋,13.7%β折叠,14.3%β转角,32.5%无规则卷曲.结论:成功克隆表达结核分枝杆菌泛酸激酶,酶学性质和二级结构鉴定表明重组泛酸激酶折叠正确,且具有生物学活性,为基于该酶筛选新型抗结核药物奠定了基础.; 张鹭王庆忠徐颖陈嘉臻路福平王洪海; 关键词：结核分支杆菌基因表达

一种结核杆菌重组卡介苗: 本发明属医药技术领域，具体为一种新型的结核杆菌重组卡介苗。该重组卡介苗为rBCG－Ag85B－Mpt64<Sub>190－198</Sub>－Mtb8.4。其制备过程包括构建重组基因rBCG－Ag85B－Mpt64<Su...; 王洪海郄亚卿王九玲祝秉东徐颖王庆忠陈嘉臻; 文献传递

重组Ag85B－Rv3425卡介苗: 本发明涉及基因工程领域和结核疫苗领域。近十几年来由于结核耐药株增多和结核分枝杆菌与HIV的共感染，导致结核病发病率增高，成为继HIV之后人类的第二大杀手。目前全球广泛使用的唯一的结核病疫苗是BCG。本发明将结核分枝杆菌最...; 王洪海王九玲张红梅郄亚卿祝秉东徐颖王庆忠; 文献传递

Ag85B,ESAT－6的嵌合疫苗: 本发明涉及基因工程领域和结核疫苗领域。近十几年来由于结核耐药株增多和结核分枝杆菌与HIV的共感染，导致结核病发病率增高，成为继HIV之后人类的第二大杀手。目前全球广泛使用的唯一的结核病疫苗是BCG。本发明提供了一种新型A...; 王洪海徐颖王宝林王庆忠陈嘉臻祝秉东王九玲郄亚卿; 文献传递

重组Ag85B－Rv3425卡介苗: 本发明涉及基因工程领域和结核疫苗领域。近十几年来由于结核耐药株增多和结核分枝杆菌与HIV的共感染，导致结核病发病率增高，成为继HIV之后人类的第二大杀手。目前全球广泛使用的唯一的结核病疫苗是BCG。本发明将结核分枝杆菌最...; 王洪海王九玲张红梅郄亚卿祝秉东徐颖王庆忠; 文献传递

结核分枝杆菌利福平耐药相关基因突变检测及Rv2629基因191A/C突变功能初步研究: 结核病是人类世界古老的细菌性传染病。目前，全世界60亿人口中，近1/3(约18亿)感染结核分枝杆菌。根据WHO统计，每年新发病人达800～1000万，每年因结核病死亡者达200余万，98％的结核病死亡发生在发展中国家。作...; 王庆忠; 关键词：结核病耐药菌株结核分枝杆菌

一种筛选结核杆菌耐药蛋白的方法: 本发明属于分子生物学筛选新型抗结核药靶、疫苗抗原和检测靶标领域，具体的说，本发明提供了一种筛选结核杆菌耐利福平药物的蛋白的方法：首先，培养耐药菌株；其次，分别分离耐药菌株和敏感菌株中的蛋白；再次，将耐药菌株和敏感菌株中的...; 王洪海王庆忠张鹭乐军张旻徐颖祝秉东王九龄郄亚卿; 文献传递

一种重组卡介苗及其制备方法: 本发明涉及基因工程领域和结核疫苗领域。近十几年来由于结核耐药株增多和HIV/AIDS的蔓延，结核病发病率增高，成为继HIV之后人类的第二大杀手。目前全球广泛使用的唯一的结核病疫苗是BCG。本发明将结核分枝杆菌ag85b、...; 王洪海徐颖王宝林祝秉东王庆忠郄亚卿王九龄; 文献传递

重组Ag85B卡介苗: 本发明涉及基因工程领域和结核疫苗领域。近十几年来由于结核耐药株增多和HIV/AIDS的蔓延，结核病发病率增高，成为继HIV之后人类的第二大杀手。目前全球广泛使用的唯一的结核病疫苗是BCG。本发明将结核分枝杆菌最重要的保护...; 王洪海祝秉东郄亚卿王庆忠王九玲徐颖; 文献传递

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王庆忠