王恩丽
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
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- 猪沙波病毒CH430株p70基因克隆与生物信息学分析
- 2014年
- 利用RT-PCR方法从猪沙波病毒CH430株中克隆出非结构蛋白p70基因并测序,结果显示,p70基因全长1 995 nt,编码665个氨基酸,经同源性比对及遗传进化树分析表明,CH430株为基因Ⅲ型沙波病毒毒株。生物信息学分析显示该蛋白理论等电点(pI)为5.96,理论分子质量为72 876.6 u;其序列上共发现25个磷酸化位点,分别为Ser(6)、Thr(13)、Tyr(6),而蛋白的磷酸化与信号传导有关,预测该蛋白为一重要的信号传导分子;无信号肽和跨膜区;该蛋白含有胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶和RdRp功能域;胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶功能域核心结构为1个由7个β折叠形成柱状结构和1个由1个α螺旋和7个β折叠扭曲平行形成1个不完全的桶状结构共同组成,RdRp功能域核心结构为1个具有3个子结构域空间结构,该结构与右手掌在形态上非常相似,而3个子结构域也被认为是手指、手掌和拇指。
- 刘伟王恩丽柳纪省杨彬兰喜
- 关键词：克隆生物信息学分析
- 合作猪SLA-DQB基因第3外显子多态性分析被引量：1
- 2014年
- 以合作猪为试验材料,采用PCR-SSCP检测442只合作猪SLA-DQB基因第3外显子的多态性,克隆测序群体内变异产生的各等位基因序列,构建系统发育树以明确合作猪SLA-DQB基因等位基因之间的遗传关系.结果表明:合作猪SLA-DQB基因第3外显子中表现了7个基因型,其中有4个新等位基因,分别命名为B、C、D、E,序列分析中发现了11个核苷酸多态位点,这些多态位点主要由点突变形成,其中转换9个(占81.82%),颠换2个(占18.18%).表明合作猪SLA-DQB基因第3外显子具有丰富的遗传多态性,群体中可能蕴藏着更多的抗性遗传资源.
- 姜力飞马小军李富强罗秀刚时帅锋王恩丽
- 关键词：合作猪PCR-SSCP多态性
- 合作猪干扰素γ基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2013年
- 运用RT-PCR和PCR技术克隆基因,应用DNAStar对获得的cDNA及推测的氨基酸序列进行分析。从合作猪脾脏组织中克隆IFN-γcDNA ORF全长501 bp,共编码166个氨基酸,N端具有由23个氨基酸组成的信号肽,该蛋白预测的分子质量为19.418 5 kDa,等电点为9.54,合作猪IFN-γ核苷酸序列上共发现9个磷酸化位点,分别为Ser(7)、Thr(1)、Tyr(1);2个N-糖基化位点,分别在第39位和第106位Asn处。序列比较结果表明,合作猪IFN-γ基因序列与藏猪、印度猪种、内江猪、牛、狗的同源性较高,与人类和鸡的同源性较低。对于小分子蛋白质和多肽,有义突变和无义突变对于同源性及系统进化的分析影响较大,应结合核苷酸和氨基酸2个层面综合分析,并且IFN-γ和高原低氧作用于机体产生的NO,能有效地抑制寄生虫病的发生。
- 李富强张小丽马小军罗秀刚岳燕姜力飞王恩丽时帅峰
- 关键词：合作猪IFN-Γ克隆
- 猪嵴病毒441株3D基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中登录的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR技术及3'RACE法扩增猪嵴病毒441株(swKoV CH441株)3D基因。成功扩增了swKoV CH441株的3D基因,3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)及Poly(A),扩增的基因片段长度分别为1 064、1 046和592 bp,包括3A、3B、3C、3D基因序列,3'UTR序列和一个至少含有29个Poly(A)的尾巴。序列分析结果表明,swKoV CH441株3D基因全长1 407 bp,编码468个氨基酸,分子质量约为53 369.29 D,理论等电点为6.12;3'UTR位于终止密码子TGA之后,长166 bp;swKoV CH441株与其他猪嵴病毒3D基因核苷酸序列相似性在92.2%-93.4%,氨基酸一致性为97.9%-99.4%。遗传进化分析表明,swKoV CH441株与国内株亲缘关系较近,与匈牙利株亲缘关系较远。
- 王恩丽兰喜刘伟杨彬柳纪省马小军
- 关键词：RT-PCR基因序列分析
- 猪嵴病毒CH441株和猪博卡病毒CH437株全基因组克隆及序列分析
- 腹泻可导致猪的发病死亡，直接或间接给养猪业造成巨大的经济损失，病毒是引起腹泻的病原体之一。近年来，新发病原在猪群中被不断检测到，猪嵴病毒（Porcinekobuvirus，PKoV），猪博卡病毒（Porcine boca...
- 王恩丽
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 猪源札幌病毒衣壳蛋白的原核表达及免疫原性检测
- 2014年
- 为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp,编码545个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,目的条带大小为63ku,与预期结果相符。重组菌在37℃、IPTG终浓度为0.8mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。将纯化的VP1重组蛋白免疫家兔,得到了超免疫血清。Western-blot分析表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。上述试验结果为深入研究VP1蛋白的功能和研制ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
- 杨勃兰喜杨彬柳纪省单兴娜刘伟王恩丽张韵马小军
- 关键词：衣壳蛋白原核表达
