王雪蕾
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：大连大学更多>>
- 发文基金：大连市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用的研究进展被引量：4
- 2014年
- 丝氨酸蛋白酶抑制因子在不同的生命活动调节中均具有重要意义,可调节凝血(血栓形成和血栓溶解)、血管再生、神经生长、激素转运、血压、补体和炎症。不同的丝氨酸蛋白酶抑制因子与对应的不同恶性肿瘤的进展和缓解有一定关联,使之在肿瘤治疗和诊断中具有一定意义。开展对丝氨酸蛋白酶抑制因子介导抗肿瘤活性的疗效和机制的进一步研究,有望发展成为肿瘤治疗的新方法。
- 王雪蕾伦永志
- 关键词：恶性肿瘤色素上皮细胞衍生因子
- 一种丝氨酸蛋白酶抑制因子重组多肽及其制备方法和应用
- 本发明提供一种丝氨酸蛋白酶抑制因子重组多肽及其制备方法和应用，属于基因工程及其制备领域。本发明通过构建人源丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor原核表达载体，优化重组多肽表达，改善重组多肽纯化，鉴定重组多肽活性，其重组多...
- 伦永志王雪蕾冯洁
- 文献传递
- 重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定
- 2013年
- Hespintor是应用抑制消减杂交技术(SSH)从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白,序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serine proteinase inhibitor,Serpin)家族中的一个分泌型新成员,具有与食管癌相关基因2(Esophageal cancer related gene 2,ECRG2)高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能,必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将Hespintor Kazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+),转化至Rosetta(DE3)表达宿主菌中。经0.25 mmol/L IPTG,30℃诱导5 h获得了分子量约为42 kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达,Western blotting证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达,利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明,纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性,提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。
- 冯洁伦永志李越武会娟李宝明魏玲张小莉王雪蕾迟庆
- 关键词：原核表达
- 人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的基因克隆与序列分析被引量：2
- 2013年
- 目的:克隆得到人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因,并应用生物信息学方法进行序列分析。方法:提取HepG2细胞总RNA,RT-PCR扩增Hespintor基因片段,连接至pMD 20-T克隆载体中,转化JM109宿主菌,蓝白斑法筛选阳性克隆菌落,菌落PCR及测序鉴定。利用在线工具软件对Hespintor进行信号肽预测、亚细胞定位、结构域、三级结构、基因染色体定位及组织分布表达分析。结果:人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因全长285bp,共编码94aa,其中1-23aa编码信号肽,符合亚细胞定位于细胞外的预测;53-93aa编码一个典型的Kazal结构域。Hespintor基因的染色体定位于5号染色体短臂3区3带1亚带(5q33.1);正常组织中仅在睾丸有表达,而肿瘤组织中仅在生殖细胞瘤有表达。结论:Hespintor是一个在机体中静止表达的Ka-zal型丝氨酸蛋白酶抑制因子家族的分泌型新成员。
- 伦永志冯洁李欣悦王雪蕾
- 关键词：逆转录PCR基因克隆生物信息学
