罗依惠
- 作品数：17 被引量：51H指数：4
- 供职机构：浙江大学医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“优秀青年教师资助计划”中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 腹膜透析对腹腔巨噬细胞产生NO及腹膜形态结构变化的实验研究
- 1999年
- 应用模拟连续不卧床腹膜透析（ Ｃ Ａ Ｐ Ｄ）小鼠以研究两种腹膜透析液 Ｂｉｅｆｆｅ 和 Ｂｒａｕｎ 对腹腔巨噬细胞（ Ｍ）产生一氧化氮（ Ｎ Ｏ）的影响及腹膜形态学改变⒚结果 Ｂｉｅｆｆｅ 组 Ｎ Ｏ 产量明显高于对照组； Ｂｒａｕｎ 组 Ｎ Ｏ 产量在给药 １０ ｄ 至停药 １０ ｄ 也明显高于对照组；两给药组均伴不同程度腹膜间皮细胞脱落、腹膜增厚等改变，表明两种腹膜透析液连续给药可提高腹腔巨噬细胞的 Ｎ Ｏ 产量，这可能与长期 Ｃ Ａ Ｐ Ｄ
- 杨泽然李继承张凯苏焕兴宓开鸿罗依惠高志刚郑一波
- 关键词：腹膜透析液巨噬细胞一氧化氮腹膜
- 问号钩端螺旋体过氧化物还原酶AhpC在氧化应激中的功能研究被引量：2
- 2018年
- 目的确定问号钩端螺旋体（简称钩体）赖株AhpC蛋白的过氧化物还原酶活性及其在问号钩体感染宿主细胞过程中是否具有抵抗氧化应激的功能。
方法构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株ahpC基因原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rAhpC，检测其酶学活性和保护DNA不被氧化的功能。用定点突变方法验证AhpC的过氧化半胱氨酸和还原性半胱氨酸。经不同浓度的Conoidin A抑制问号钩体过氧化物还原酶活性后，比较抑制前后构体内的活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）水平和钩体存活率的变化。结果所构建的原核表达系统能有效表达rAhpC。rAhpC具有过氧化物还原酶的活性，其催化反应依赖于硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶系统。AhpC分子中含有的两个半胱氨酸对维持酶的活性起着至关重要的作用，其中Cys47是AhpC的过氧化半胱氨酸，而Cys167是还原性半胱氨酸。AhpC能够保护质粒DNA免遭过氧化氢的氧化损伤。经不同浓度的Conoidin A抑制问号钩体的过氧化物还原酶的活性后，钩体在巨噬细胞内的存活率明显下降，并且呈现出剂量依赖的效应，表明钩体存活率的降低与钩体的过氧化物还原酶活性丧失从而无法有效降解构体内活性氧水平有着密切的关系。结论问号钩体的AhpC具有过氧化物还原酶的活性，能抵抗宿主细胞引起的氧化损伤，与钩体在巨噬细胞内的存活有关。
- 罗依惠吴亦斐Jean-Pierre Munyampundu
- 关键词：问号钩端螺旋体氧化应激存活
- 空肠弯曲菌fliG基因敲除突变株动力、体外趋化和小鼠定植能力的改变
- 2009年
- 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是人类细菌性胃肠炎的病原体。趋化是细菌向合适的寄生部位定向运动,也是空肠弯曲菌在宿主空肠黏膜表面实现定植的关键起始步骤,该趋化运动由趋化相关二元信号系统(che-TCS)以MCPs→Ches→Flis/Mots方式调控。FliG是Fli蛋白家族成员,一些病原菌的FliG被证明是鞭毛马达蛋白,也是细菌鞭毛马达中开关复合体的必需组分,但空肠弯曲菌FliG在细菌趋化中的作用未明。本研究中,我们根据同源重组原理,构建空肠弯曲菌NCTC11168株fliG基因敲除(fliG-)突变株,然后对fliG-突变株的动力、趋化和定植能力进行测定。动力实验和体外趋化实验结果证实,fliG-突变株在半固体琼脂平板上的菌落直径、在硬琼脂平板上对0.2mol/L脱氧胆酸钠(SDC)的趋化聚集环直径均明显小于野生株(P<0.05)。与野生株比较,黏附于BALB/c-ByJ小鼠空肠黏膜表面以及空肠内容物中的fliG-突变株数量也明显减少(P<0.05)。实验结果表明,fliG是空肠弯曲菌鞭毛动力以及细菌感染时向空肠黏膜趋化运动的必需基因。
- 全胜夏肖萍赵欣罗依惠严杰
- 关键词：空肠弯曲菌基因敲除趋化定植
- Hp定植趋化相关TCS调控机制及其致病意义的研究
- 王贤军吴盛海徐丽慧毛亚非王欣莹罗依惠董晓勤
- 2010年12月，杭州市卫生局组织专家对杭州市第一人民医院王贤军等承担的浙江省医药卫生科技计划项目“Hp定植趋化相关TCS调控机制及其致病意义的研究”(项目编号：2007B171)进行了通讯验收，验收组审阅了相关的技术文...
- 关键词：
- 关键词：幽门螺杆菌分子生物学
- 幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测被引量：3
- 2005年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用PCR检测109株HpcagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2148bp的cagA基因片段(cagA1)。构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Westernblot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性。建立ELISA,检测109株HpCagA表达和相应患者血清中CagA抗体。分析CagA+Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系。结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性。与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%。所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%。rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体。92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1%患者(96/109)血清CagA抗体阳性。消化性溃疡标本中CagA+Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05)。
- 王媛罗依惠严杰
- 关键词：CAGA基因
- rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定被引量：9
- 2005年
- 目的 :构建 lt B/ ct B- omp L1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性 ,检测问号钩端螺旋体 (简称钩体 )野生株 omp L 1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lt B- omp L 1/ 1和 ct B- omp L 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE、Westernblot和 GM1- ELISA分别检测目的重组蛋白 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L 1/ 1表达量、免疫反应性及与 GM1结合的活性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 omp L1基因及其表达情况。采用 ELISA检测 2 2 8例钩体患者血清 omp L1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lt B- omp L1/ 1和 ct B- omp L1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性 ,分别为 99.7%～ 99.9%和 99.5 %～ 10 0 %。r LTB- r Omp L1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1表达产量均约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1均分别能与r Omp L 1/ 1兔抗血清和牛 GM1结合。 89.7%问号钩体野生株含有 omp L1基因 ,87.6 %问号钩体野生株分别与r Omp L 1/ 1和 r Omp L1/ 2兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4～ 1∶ 2 5 6的 MAT阳性结果。 86 .8%和 88.6 %的患?
- 阮萍严杰毛亚飞李淑萍罗依惠李立伟
- 关键词：钩端螺旋体LTB基因
- 问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用被引量：11
- 2005年
- 目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE检测目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1表达情况。采用 Western blot鉴定 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1的免疫原性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因及其表达情况。采用 EL ISA检测 2 2 8例钩体患者血清 lip L32和 lip L4 1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 99.9%和99.8%。目的重组蛋白 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1表达产量约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。r L ip L32 /1和 r Lip L4 1/ 1兔抗血清均能与 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1结合。 97.9%和 87.6 %问号钩体野生株分别有 lip L32和 li-p L4 1基因。95 .9%和 84 .5 %问号钩体野生株分别与 r Lip L32 s和 r Lip L4 1s兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4～ 1∶ 12 8的MAT阳性结果。分别有 94 .7%～ 97.4 %和 78.
- 罗冬娇严杰毛亚飞李淑萍罗依惠李立伟
- 关键词：钩端螺旋体序列同源性序列同源性
- 问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性被引量：4
- 2005年
- 目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 )的融合基因 lip L32 / 1- omp L1/ 1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性。方法 :采用连接引物 PCR构建融合基因 lip L32 / 1- omp L1/ 1,克隆测序后构建 lip L32 / 1- omp L1/ 1的毕赤酵母真核表达系统 p PIC9K- lip L32 / 1- omp L1/ 1- P.pastoris GS115。用 MM和 MD平板分离 His+ Mut+型菌落 ,YPD平板筛选出 G4 18高抗性的 His+ Mut+ 转化子。以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子 His+ Mut+ 克隆裂解产物为模板 ,5 'AOX1和 3'AOX1为引物 ,用 PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体 DNA中的目的融合基因。在 BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r Omp L1/ 1表达。采用硫酸铵沉淀 ,Ni- NTA亲和层析提纯培养物上清液中的 r L ip L 32 / 1- r Omp L1/ 1。采用 SDS- PAGE和 Western blot分别检测 r L ip L 32 / 1- r Omp L 1/ 1的产量及其免疫反应性。结果 :获得的 lip L32 / 1- omp L1/ 1融合基因约为 1794 bp。其核苷酸和氨基酸序列与原始lip L32 / 1和 omp L1/ 1基因型比较 ,相似性分别高达 99.94 %和 10 0 %。所构建的真核表达系统可分泌 r Lip L32 / 1-r Omp L1/ 1,SDS- PAGE后位于预期位置处 ,产量约占上清总蛋白的 4 0 %。r Lip L32 /
- 严杰钊守凤毛亚飞阮萍罗依惠李淑萍李立伟
- 关键词：问号序列同源性真核表达
- 不同毒力钩端螺旋体属特异性外膜蛋白抗原的分析被引量：1
- 2004年
- 目的 了解不同毒力钩端螺旋体株有无属特异性外膜蛋白抗原。方法 TR/ patocⅠ钩体属特异性抗原免疫家兔获得抗血清 ,以显微镜凝集试验检测TR/patocⅠ属特异性抗原抗血清对我国 15群 17型问号钩体和 2群 2型双曲钩体的凝集情况。采用Auran介绍的方法制备问号钩体黄疸出血群赖型 5 6 6 0 1株、波摩那群波摩那型 5 6 6 0 8株和双曲钩体三宝垄群Patoc型patocⅠ株的外膜蛋白 ,用SDS -PAGE及Westernblot分析不同毒力钩体外膜蛋白的电泳特征及与TR/ patocⅠ属特异性抗血清的反应性。结果 钩体TR/ patocI属特异性抗血清能与上述各株钩体发生凝集反应 ,其效价为 1∶2 5 6～ 1∶5 12。三种不同毒力钩体外膜蛋白有相似的SDS -PAGE图谱 ,其主要蛋白组分的分子量约为 6 0kDa ,Westernblot结果证实在约31kDa处有一共同的能与TR/patocI属特异性抗血清发生反应的阳性条带。结论 钩体细胞表面具有属特异性抗原 ,分子量31KDa外膜蛋白可能是属特异性抗原之一。
- 罗依惠严杰
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白抗原
- Hp定植趋化相关TCS调控机制及其致病意义的研究
- 王贤军吴盛海徐丽慧毛亚非王欣莹罗依惠董晓勤
- 本课题来源于浙江省医药卫生科技计划项目（2007B175）和杭州市医药研究近年国外文献报道定植性趋化是幽门螺杆菌引起感染的必要条件，Che蛋白家族二元信号传导系统（TCS）与其趋化定植密切相关，但胃粘膜细胞分泌的趋化信号...
- 关键词：
- 关键词：幽门螺杆菌HELICOBACTERPYLORITCS
