顾兴华
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市科学技术委员会科研基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 大鼠急性心肌梗死后缺血缺氧心肌早期凋亡信号分子的变化被引量：2
- 2007年
- 目的探索能够应用于临床辨别早期缺血心肌生物学活性的敏感代谢变化指标。方法SD大鼠行冠状动脉前降支结扎术建立心肌缺血模型,分别结扎0(对照组)、5、20、45min。采用luciferin/luciferase法,RT-PCR法和免疫组织化学法分析心肌组织在不同缺血时间段梗死区、梗死边缘区及正常区ATP含量变化,葡萄糖调节蛋白75(grp75)和缺氧诱导因子1α(HIF1α)基因表达变化,以及细胞色素C释放、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)降解的情况。结果大鼠冠状动脉前降支分别结扎5、20、45min时,梗死区及梗死区边缘心ATP含量上升,并于20、45min时明显高于正常水平;grp75及HIF1α基因转录水平未见明显改变。免疫组化结果显示少数细胞细胞色素C的释放出现于冠状动脉前降支结扎5min,而PARP的降解发生较迟,出现于冠状动脉前降支结扎20min。冠状动脉前降支结扎45min时细胞色素C的释放和PARP的降解明显增强免疫反应呈现片状染色。结论大鼠急性心肌缺血后早期梗死区发生细胞凋亡,细胞色素C释放、PARP降解出现较早,可用作为临床辨别缺血心肌生物学活性的早期变化指标。
- 张晖顾兴华徐丹令孙爱军夏蓓莉刘雯王克强左伋葛均波
- 关键词：葡萄糖调节蛋白75缺氧诱导因子1细胞色素C聚腺苷二磷酸核糖聚合酶
- 乙醛脱氢酶2抑制剂大豆甙对缺氧心肌细胞的MAPK信号转导作用被引量：3
- 2009年
- 目的检测乙醛脱氢酶2（ALDH2）对大鼠心肌细胞在缺氧状态下氧自由基（ROS）产生、凋亡发生和信号转导的影响。方法通过缺氧模型比较大鼠心肌细胞缺氧和经大豆甙（daidzin）24h预处理后缺氧的活性变化,用C400测定ROS,用TUNEL试剂盒检测凋亡,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路酶磷酸化的改变用Western blotting的方法检测。每组实验（n）均重复3次以上。结果当心肌细胞ALDH2被特异大豆甙抑制后,更易在缺氧环境下诱导产生ROS和凋亡,且与MAPK有关的磷酸化酶活性均表达增强。结论当ALDH2被抑制后,心肌细胞对缺氧的耐受性下降,这与ROS的产生、凋亡和MAPK信号通路的激活有关,ALDH2对缺氧引起的细胞改变具有保护作用。
- 徐丹令孙爱军王时俊王翔飞贾剑国顾兴华王克强邹云增葛均波
- 关键词：乙醛脱氢酶2缺氧心肌丝裂原活化蛋白激酶BLOTTING
- 转基因内皮细胞的构建及其在复合血管上种植的初步研究
- 2006年
- 目的:为了解决小口径(直径7mm以下)人造血管术后通畅率低下的问题,利用生物-人工复合血管,结合分子生物学手段,将转入血管内皮生长因子(VEGF165)基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)种植于复合血管内腔面,为解决此临床难题提供新的思路和手段。材料方法:构建VEGF165真核表达质粒pCI-neo-VEGF165,获得正确的质粒用于转染HUVEC。从中科院购买HUVEC(代号:ECV-304),用脂质体介导法将pCI-neo-VEGF165转入细胞,经G418筛选后,计数阳性克隆,以比较脂质体和质粒在不同比例情况下转染效率的高低。实验组按质粒和脂质体比例的不同分为4组:1μg/3μl;2μg/6μl;2μg/8μl;3μg/12μl。ELISA检测瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达。再将VEGF165基因瞬时转入HUVEC,利用自己设计的旋转培养装置,将细胞均匀地粘附、种植于复合血管内腔面。复合血管是人工材料(聚酯)和生物材料(成纤维细胞长入,胶原形成)有机结合而成,是将包有聚酯网的硅胶棒埋入绵羊背部皮下组织,3个月后取出,抽去硅胶棒而得到的。结果:脂质体转染效率以2μg/8μl组阳性克隆数最多;ELISA测定瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达量为532·5±43·1pg/ml。使用旋转培养装置的细胞均匀地粘附于复合血管,未使用者细胞积聚于血管腔面下部;转入和未转入VEGF165基因的HUVEC在复合血管内腔面覆盖面积百分比分别为69·9%±3·5%、43·7%±2·5%,有明显改善。结论:转入VEGF后可促进HUVEC在复合血管上生长,旋转培养装置有利于细胞的均匀粘附。
- 顾兴华贾剑国汪洋毛红霞宿燕岗左伋孙爱军张红旗徐丹令邹云增王克强葛均波
- 关键词：血管内皮生长因子人脐静脉内皮细胞转染复合血管
- 重组人Neureguline对快速起搏所致猴心衰心肌收缩能力的影响及其机制研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究重组人N euregu line对快速起搏所致心力衰竭恒河猴心肌收缩能力的影响,并探讨其可能的机理。方法成年雄性恒河猴24只,随机分为假手术组、心力衰竭组及N euregu line治疗组,每组8只。治疗组240次/m in起搏7 d后,起搏状态下连续10 d,每天1次静脉注射重组人N euregu line 3μg/kg,心力衰竭组给予同体积生理盐水。连续给药10 d结束后,测定左心室的最大压力上升速度(LV dp/dtm ax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LV SP)等血流动力学指标。提取左室心肌组织mRNA,采用实时荧光定量PCR的方法分析肌球蛋白重链(-αMyH C)的表达水平。结果心力衰竭组LV dp/dtm ax、LV SP低于假手术组(P<0.05),LVEDP高于假手术组(P<0.05);N euregu line治疗组LV dp/dtm ax高于心力衰竭组(P<0.05),LV SP有上升的趋势(上升了11%),LVEDP有下降的趋势(下降了16%)。心力衰竭组-αMyH C表达水平低于假手术组(P<0.05);治疗组-αMyH C表达水平高于心力衰竭组(P<0.05)。结论重组人N euregu lin可能通过向上调节-αMyH C表达水平这一机制来增强心肌收缩力,从而达到治疗心衰的目的。
- 李江顾兴华段嘉川曾理李尤王莉
- 关键词：NEUREGULIN肌球蛋白重链血流动力学
- 乙醛脱氢酶2抑制剂daidzin对大鼠心肌细胞缺氧损伤作用的机制被引量：4
- 2007年
- 目的检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)被daidzin抑制时对大鼠心肌细胞在缺氧状态下发生凋亡和信号转导的影响,验证乙醛脱氢酶2 (ALDH2)在此过程中所起的作用．方法在确定daidzin的最佳抑制浓度后,运用心肌细胞缺氧模型,比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡和MAPK信号通路的改变。酶活性检测采用乙醛代谢法、ROS的检测用C400测定,凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记的流式细胞仪和TUNEL试剂盒检测,MAPK信号通路酶(ERK1／2、JNK、P38)磷酸化的改变用Western印迹法检测。结果60μmol/Ldaidzin浓度是ALDH2酶活性被抑制而细胞无凋亡发生的最佳工作浓度。在daidzin (60μmol／L)预处理24 h后再经缺氧诱导,比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显:表现为在Hoechest 33324染色中,细胞核溶解和核碎裂(P<0．05),在FACS和TUNEL的检测中,凋亡细胞明显增加(P<0．05),经凋亡后的死亡细胞有增加趋势但差异无统计学意义,同时与MAPK信号通路有关的磷酸化ERK1／2、JNX和P38的酶活性均表达增强。结论daidzin使ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性,其机制是与细胞ROS和凋亡的增加及MAPK信号通路的激活有关。ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡损伤具有保护作用。
- 徐丹令孙爱军付晗王时俊贾剑国顾兴华王克强邹云增葛均波
- 关键词：DAIDZIN心肌细胞缺氧缺氧状态乙醛脱氢酶
- 一种脑代谢研究的有效方法——高分辨率磁共振波谱分析被引量：3
- 2001年
- 介绍了一种脑代谢研究的有效方法 .成年大鼠脑经漏斗法液氮冷冻 ,制备脑组织高氯酸提取物并冷冻干燥 ,所得固体溶于D2 O后用1 H和31 P磁共振波谱 (MRS)检测 .结果表明 :脑高氯酸提取物的磁共振波谱有着极好的分辨率 ,31 PMRS可以分辨出ATP、ADP、磷酸肌酸(PCr)、无机磷以及多种磷酯和糖磷 ;1 HMRS可以分辨出乳酸 (Lac)、N 乙酰天冬氨酸 (NAA)、胆碱 (Cho)、肌酸 (Cr)、GABA、肌醇 (Ino)、琥珀酸 (Suc)以及多种氨基酸 .各波峰积分后得到各种物质的相对含量 ,而这些代谢中间产物的相对含量变化可以反应脑内的代谢状况和脑受损伤情况 .
- 王克强王利民夏薇余亦华顾兴华贾剑国葛均波
- 关键词：代谢
- 急性低氧大鼠脑^(31)P核磁共振波谱研究被引量：2
- 2001年
- 31 P磁共振波谱是目前唯一可以用作在体无损伤的检测细胞水平能量代谢变化的非侵入性技术 ,可测得脑内多种能量代谢产物 .目的 :急性低氧大鼠脑组织的31 PMRS检测 .方法 :(1 ) 2 0只成年SD大鼠分为 4组 :低氧 0min(对照 ) ,5min ,1 0min ,1 5min后 ,迅速液氮冷冻 ;(2 )将脑组织研碎后 ,加入高氯酸 (PCA) ,冷冻干燥 ;(3)将提取物用 0 .5mLD2 O溶解后进行MRS检测 .结果 :(1 )急性低氧早期即引起31 PMRS中PCr和ATP峰降低 ,ADP和Pi峰增高 ,PCr/Pi和ATP/Pi降低 ,而ADP/ATP增高 .可交换磷池 (EPP)中PCr的正常值为 42 .4% ,低氧 5min后降到 2 8.9% ,ATP从 33.8%降到 1 9.2 % ,Pi从 1 7.7%升到 42 .0 % .(2 )急性低氧时31PMRS中脑内磷酯分解代谢产物GPC、GPE含量增加 ,说明低氧早期脑内即有膜磷酯的分解增加 .结论 :31 P磁共振波谱可用于脑低氧性疾病的诊断 ,我们波谱中最敏感的指标是PCr/Pi和ATP/Pi,尤其早期降低更为显著 .
- 顾兴华王利民贾剑国汪洋夏薇余亦华王克强葛均波
- 关键词：急性低氧能量代谢ATPP2
