马颖
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性被引量：1
- 2014年
- 目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P<0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P<0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
- 周洁蔡冉徐悦玥潘英李素芹尚彦红许桂丽袁敬宇马颖张素芬李越希
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞免疫活性
- 重组单纯疱疹病毒Ⅱ型gC蛋白胞外区真核表达载体的构建及其在DG44细胞中的稳定表达
- 目的:构建含人类单纯疱疹病毒膜糖蛋白(gC2)基因的重组真核表达质粒并转染哺乳动物细胞DG44细胞系,为gC2蛋白的纯化及鉴定奠定基础。方法:筛选gC2蛋白胞外抗原富集区并化学合成,通过PCR加入酶切位点EcoR I和N...
- 徐悦玥马颖袁敬宇张素芬尚彦红李素梅李素芹潘英李越希
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
- 2014年
- 目的在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体。方法筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa,分别转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的FnBPA-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以FnBPA-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性。结果经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa构建正确;在相对分子质量约42 000和19 000处,分别可见FnBPA-GST和FnBPA-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的30%和20%,均以可溶性形式表达,纯度均在90%以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清。结论2种标签的融合蛋白均具有较好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了基础。
- 许桂丽蔡冉周洁马颖袁敬宇徐悦玥张素芬尚彦红潘英李素芹李越希
- 关键词：金黄色葡萄球菌多克隆抗体
- 重组单纯疱疹病毒Ⅱ型GC蛋白胞外区真核表达载体的构建及其在DG44细胞中的稳定表达
- 徐悦獺马颖袁敬宇张素芬尚彦红李素梅李素芹潘英李越希
- 肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2015年
- 目的 原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A（pneumococcal surface protein A,PspA）,并制备多克隆抗体。方法 应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对PspA氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区（第33-109个氨基酸）,选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒pGEX-4T-2和pET28a（＋）中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a（＋）-pspa,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。分别纯化带有GST标签和His标签的PspA重组蛋白GST-PspA和His-PspA,以His-PspA作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果 两种重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a（＋）-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-PspA和His-PspA相对分子质量分别〈为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度〈为95%,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1：200 000,且特异性较好。结论 原核表达并纯化了肺炎链球菌PspA融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础。
- 徐悦玥蔡冉马颖尚彦红袁敬宇张素芬李越希
- 关键词：原核细胞基因表达纯化多克隆抗体
- 重组单纯疱疹病毒Ⅱ型gC蛋白胞外区真核表达载体的构建及其在DG44细胞中的稳定表达
- 目的:构建含人类单纯疱疹病毒膜糖蛋白(gC2)基因的重组真核表达质粒并转染哺乳动物细胞DG44细胞系,为gC2蛋白的纯化及鉴定奠定基础。方法:筛选gC2蛋白胞外抗原富集区并化学合成,通过PCR加入酶切位点EcoR I和N...
- 徐悦玥马颖袁敬宇张素芬尚彦红李素梅李素芹潘英李越希
- HSV2多表位候选疫苗的同源模建与CHO细胞中的表达纯化
- 目的:人类单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染可致生殖道疱疹、死胎、宫颈癌,目前没有疫苗。疫苗难以研制的原因是HSV2病毒可以逃避人体的免疫清除,形成潜伏感染。本研究将多种免疫保护性蛋白和免疫逃避相关蛋白的T细胞和B细胞抗原...
- 马颖袁敬宇徐悦玥张素芬尚彦红李越希
