用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染法对爪哇三七(Gynura aurantioca, D. C.)进行生化分析,发现在健康爪哇三七细胞质中有一种闭环RNA(Cytoplasmic small circular RNA,简称cscRNA),它的电泳行为与柑桔裂皮病类病毒(CitruS Exocortis Viroid,简称CEV)相似,而点杂交结果显示它的一级结构与类病毒RNA的中心保守区核酸序列没有同源性。进一步分析细胞不同组分的RNA,发现cscRNA仅存在于细胞质中,并与季节的变化有密切关系。在CEV感染的爪哇三七细胞中,可测出CEV-RNA和cscRNA两种闭环RNA分子,但细胞核内仅能检出CEV-RNA一种分子,它与类病毒的中心保守区有明显的同源性。检测CEV感染时,可用细胞核RNA进行测定,以排除细胞质小分子闭环RNA的干扰。
用0.3M的甘氨酸缓冲液（含0.1M的MgCl2,pH7.4）对泡桐丛枝病病树的新鲜或冰冻组织进行抽提,用蜗牛酶处理,并差速离心,获得泡桐丛枝病类菌原体;然后用蛋白酶E处理,苯酚和氯仿抽提,酒精沉淀,可有效地制备得泡桐丛枝病类菌原体总核酸。所得总核酸在0.6％的琼脂糖凝胶电泳时呈现出大分子和小分子两种电泳带。DNase I RNase A及专一性降解单链核酸的S.酶等分析结果表明,大分子带为DNA,小分子带为RNA,且DNA具有双链性质,RNA具有单链性质。将上述总核酸用RNase A消化,苯酚和氯仿抽提,乙醇沉淀,可获得单一的泡桐丛枝病类菌原体DNA。电泳测得其DNA分子量约为1.5×107道尔顿。目前国内外均未见泡桐丛枝病类菌原体核酸报导。
