代维
- 作品数：22 被引量：53H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 分泌型卷曲相关蛋白4在常染色体显性遗传性多囊肾病中的表达及诱发凋亡的作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察分泌型卷曲相关蛋白4（sFRP4）在常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）中的表达情况及其在ADPKD中诱发凋亡的作用。方法（1）血清：收集12例健康人和20例ADPKD患者的血清标本，ELISA法检测血清中sFRP4的水平。（2）组织：收集肾癌根治性切除术后癌旁正常肾组织以及ADPKD患者肾组织，免疫组化法观察sFRP4在肾组织中的表达情况；实时定量PCR法检测肾组织中sFRP4mRNA及Caspase-3 mRNA水平；TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。（3）细胞：HEK-293T细胞被分为3组：空白对照组、对照质粒PcDNA6转染组和Flag-sFRP4．PcDNA6质粒转染组，Western印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase．3表达水平，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果（1）ELISA检测结果显示，ADPKD患者血清sFRP4水平显著高于健康人（P〈0．05）。（2）免疫组化结果显示，sFRP4在ADPKD患者的肾小管上皮细胞胞质中表达明显增加。（3）实时定量PCR结果显示，ADPKD患者肾组织sFRP4mRNA和Caspase-3 mRNA表达水平显著高于正常肾组织（均P〈0．05）。（4）TUNEL检测结果显示，ADPKD患者肾小管上皮细胞凋亡较正常肾组织明显增加。（5）与对照组相比，过表达sFRP4的HEK-293T细胞中Caspase-3蛋白水平显著上调（P〈0．05），细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。结论sFRP4在ADPKD患者血液及肾组织中均明显升高，ADPKD中存在肾小管上皮细胞的异常凋亡，过表达sFRP4可以诱导HEK-293T细胞凋亡，推测sFRP4升高与ADPKD肾组织的异常凋亡增加有关。
- 杜宇裴广畅覃海澳吕永曼李月强代维李俊华何凡刘颜颜徐钢高红宇
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
- Tat蛋白转导结构域介导HSV1-TK导入肝癌细胞及其效应
- 2006年
- 目的：探讨HIV-1编码的反式激活蛋白Tat与HSV1-TK融合表达对肝癌细胞的杀伤效果。方法：合成编码HIV-Tat47-57（Tat 11）的2条寡核苷酸单链，两端分别引入BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两个酶切位点，退火形成寡核苷酸双链，15％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳判断退火效果；以r-pAs16Dr为模板，通过PCR扩增HSV1-TK基因，定向克隆至原核表达载体pET-32中。将含pET-32c-Tat 11-TK的BL21菌通过IPTG诱导表达，表达产物用Ni^（2＋）螯合柱亲和纯化，免疫组化分析重组蛋白Tat 11-TK的膜结合特性，蛋白印迹技术分析该融合蛋白的穿膜能力，检测和分析TK／GCV、Tat 11-TK／GCV对肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。结果：表达产物SDS-PAGE在相对分子质量60700左右显示条带，符合Tat 11-TK与表达标签融合蛋白的理论值，并证明以包涵体的形式表达；通过Ni^（2＋）螯合柱亲和纯化获得的Tat 11-TK重组融合蛋白，经免疫组化证实能结合到肝癌细胞表面，蛋白印迹结果说明Tat 11-TK能有效穿过细胞膜进入HepG2细胞内，同时应用低浓度前药更昔洛韦（GCV，150 μmol／L）能有效抑制HepG2细胞生长。结论：Tat 11-TK在原核系统获得高效表达，具有较强的穿膜能力和前药酶活性。
- 曹利民王炜煜赵晓蓉叶庆雷萍刘静代维朱荫昌司进沈关心
- 关键词：HIV-1TATHSV1-TK蛋白转导肝癌基因治疗
- 抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
- 2009年
- 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
- 代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR
- 内质网滞留型抗TfR胞内抗体的构建、表达及其对肿瘤细胞生长的抑制
- 目的:铁是细胞生长增殖及机能活动所必需的微量元素之一,而肿瘤细胞主要是通过高表达转铁蛋白受体(TfR)来摄取铁。铁剥夺可以抑制肿瘤细胞生长及促进肿瘤细胞凋亡,本研究拟通过胞内抗体技术探讨内质网滞留型抗转铁蛋白受体单链抗体...
- 彭吉林吴砂赵晓平王敏李文涵沈昕代维雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体胞内抗体肿瘤细胞
- 文献传递
- 非大量蛋白尿狼疮肾炎患者肾脏病理严重程度的危险因素分析
- 2019年
- 目的研究影响非大量蛋白尿(24h蛋白尿<3. 5 g)狼疮肾炎(LN)患者肾脏病理严重程度的危险因素以及预后情况。方法纳入2004年1月1日至2018年3月31日于华中科技大学同济医学院附属同济医院行肾脏穿刺活检确诊为LN并且起始24h蛋白尿<3. 5 g的患者作为研究对象,记录患者肾活检时相关临床信息,并行规律随访。对所有患者肾活检时的病理切片进行重新阅片,采用统一标准进行评分,根据患者肾脏病理严重程度分为病理轻组和病理重组。采用Log-rank检验比较两组的缓解率差异。采用Logistic回归方程分析影响非大量蛋白尿LN患者肾脏病理严重程度的危险因素。结果共纳入95例非大量蛋白尿LN患者,以女性为主,平均年龄(32. 4±1. 1)岁,其中有随访者共79人。肾脏病理轻组43例,肾脏病理重组52例,病理轻组患者血红蛋白、血清IgA水平均高于病理重组(P <0. 05),而血氯水平显著低于病理重组(P <0. 05)。随访结果显示,病理轻组患者的远期(大于6个月)累积完全缓解率大于病理重组(P <0. 05)。多因素Logistic回归结果提示,年龄(OR=1. 219,95%CI:1. 043～1. 425,P <0. 05)、SLEDAI-2K评分(OR=1. 202,95%CI:1. 025～1. 411,P <0. 05)、起始蛋白尿定量(OR=3. 793,95%CI:1. 058～13. 595,P <0. 05)、血清IgA水平(OR=0. 222,95%CI:0. 063～0. 781,P <0. 05)是肾脏病理重的独立危险因素。结论老龄、高SLEDAI-2K评分、高起始蛋白尿定量和低血清IgA水平可能与非大量蛋白尿LN患者的肾脏病理较重相关。
- 刘婷婷杨毅代维李月强韩敏何晓峰葛树旺徐钢
- 关键词：狼疮肾炎肾脏病理血清IGA
- 具有抗幽门螺旋杆菌和抑制炎症因子的双功能多肽及其应用
- 本发明公开一种具有抗幽门螺旋杆菌和抑制炎症因子的双功能多肽及其应用，该多肽的分子量为5147.10，理论等电点为10.53，其为碱性阳离子肽；该多肽可通过常规的多肽固相合成技术制备，最后通过反向半制备高效液相色谱纯化得到...
- 喻研田德安陈广沈秉正张超代维朱杉
- 文献传递
- 肾小球囊肿病合并ANCA相关性血管炎肾损害1例被引量：2
- 2014年
- 肾小球囊肿病（glomerulocystic kidney disease,GCKD）是一种罕见的肾囊肿性疾病.1941年,Roos[1]等在1名患有佝偻病、肾功能衰竭的婴儿身上首次发现肾小球病变,并将其归属于肾囊肿性疾病.大约20年后,Bialestock[2]用显微切割技术在婴儿身上进一步界定了肾小球囊肿与肾发育不良有关.1976年,Taxy和Filmer[3]首次将其定义为“肾小球囊肿病”.肾小球囊肿病主要见于新生儿和儿童,并多伴有遗传疾病和先天畸形,偶尔也发生于成人.检索有关文献,目前国内仅有2例关于成人GCKD的报道.GCKD的形态学特征为不同程度的鲍曼囊扩张,同时伴有肾小球血管丛萎缩或退化,本例不仅符合GCKD的典型病理特征,而且合并有新月体形成,结合患者的病史、临床表现、病理检查,诊断为肾小球囊肿病合并ANCA相关性血管炎肾损害.
- 胡庭阳马祖福韩敏代维李月强吕永曼
- 关键词：肾小球病变ANCA囊肿病肾损害血管炎
- 具有抗幽门螺旋杆菌和抑制炎症因子的双功能多肽及其应用
- 本发明公开一种具有抗幽门螺旋杆菌和抑制炎症因子的双功能多肽及其应用，该多肽的分子量为5147.10，理论等电点为10.53，其为碱性阳离子肽；该多肽可通过常规的多肽固相合成技术制备，最后通过反向半制备高效液相色谱纯化得到...
- 喻研田德安陈广沈秉正张超代维朱杉
- 去唾液酸糖蛋白受体单链抗体靶向蜂毒肽的体外抑瘤效应研究被引量：1
- 2006年
- 目的探讨抗去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)单链抗体C1与蜂毒肽(Melittin)重组蛋白C1M靶向抑制肝癌细胞的效果。方法将含C1M/pGC的XL1-Blue转化菌通过IPTG诱导表达。表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫组织化学技术分析重组蛋白C1M的抗原结合能力,四氮唑盐(MTT)法检测C1M对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用。结果原核表达质粒C1M/pGC在XL1-Blue中获得有效表达;表达产物以可溶性形式存在;纯化的C1M相对分子量为29.4×103;免疫组化结果表明C1M能有效识别去唾液酸糖蛋白受体,与HepG2(C1M)共培养3d,细胞生长抑制率达92.0%。结论在大肠埃希菌中成功表达C1M,位于C端的Melittin蜂毒肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,为体内研究Melittin的靶向抗肝癌效果奠定了基础。
- 曹利民赵晓蓉叶庆雷萍吴砂代维朱慧芬朱荫昌司进沈关心
- 关键词：蜂毒肽重组免疫毒素单链抗体
- 肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Westernblot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致,且表达产物同亲本scFv比较,与肝癌细胞特异结合活性增强。结论BsFv构建成功,BsFv较scFv具有明显优势,为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄宇余冰邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心
- 关键词：单链抗体肝癌细胞双价抗体
