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何礼洋: 作品数：16 被引量：78H指数：4; 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金河南省杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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肺炎克雷伯菌研究进展: 近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状.着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施.; 贾艳孙长江韩文瑜何礼洋杨洋; 关键词：肺炎克雷伯菌; 文献传递

鸡致病性肺炎克雷伯菌Ⅲ菌毛结构基因A(mrkA)的克隆和序列测定: 根据NCBI的mrkA菌毛结构基因DNA序列,在其菌毛蛋白序列设计了两条引物,经PCR扩增从10株临床分离株基因组DNA中得到5个大小在543 bp左右的阳性产物,经纯化、连接、转化、筛选及核序列测定与分析,确认所克隆的...; 杨洋韩文瑜雷连成贾艳何礼洋; 关键词：基因序列; 文献传递

猪源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定被引量：8: 2007年; 从9只病死猪肺、肝脏中分离到4株革兰氏阴性杆菌,并对分离菌株进行形态学、培养特性、生化特性和分子生物学的鉴定,确定分离的菌株为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。根据GeneBank上肺炎克雷伯菌16S rRNA可变区序列设计1对引物,4株细菌基因组DNA均可扩增到1段大小为127 bp特异性片段,经测序与已知肺炎克雷伯菌相应序列的同源性为100%,鉴定4株细菌均为猪源肺炎克雷伯菌。动物毒性试验证明其对小鼠有较强的致病性。; 贾艳雷连成何礼洋杨洋韩俊友韩文瑜; 关键词：肺炎克雷伯菌 RRNA

肺炎克雷伯菌研究进展被引量：50: 2006年; 近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状。着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施。; 贾艳孙长江韩文瑜何礼洋杨洋; 关键词：肺炎克雷伯菌

鸡肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛A基因序列测定和分析被引量：3: 2007年; 根据GenBank中肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因A(mrkA)GI:149187的序列设计一对引物,以5株鸡致病性肺炎克雷伯菌临床分离株的基因组DNA为模板,PCR分别扩增出了543 bp的Ⅲ型菌毛结构基因(mrkA),经纯化、连接、转化、筛选得到含阳性质粒的菌株,将酶切鉴定正确的阳性质粒菌株进行DNA测序并分析。结果表明所扩增的片段为鸡肺炎克雷伯菌mrkA基因,其开放阅读框架为543 bp,编码181个氨基酸。; 杨洋雷连成韩文瑜贾艳何礼洋

肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛PCR检测方法的建立被引量：8: 2008年; 以肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛主要结构亚单位基因为靶序列,设计合成了1对可扩增长609 bp目的片段的引物,建立检测肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因的PCR方法。特异性试验表明,本室保存的表达Ⅲ型菌毛的鸡源肺炎克雷伯菌临床分离株Kpn7扩增出609 bp的特征性片段,而大肠埃希菌、副伤寒沙门菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌扩增产物均未检出;敏感性试验表明,PCR方法检测该菌基因组DNA的灵敏度为16.8 ng/L,检测该菌菌液的灵敏度为3.7×102CFU/mL。用此方法对10份临床疑似病例分离物进行检测,结果有5株阳性。表明此方法特异性和敏感性都很高,可用于临床Ⅲ型菌毛肺炎克雷伯菌病的辅助诊断和流行病学调查。; 何礼洋雷连成贾艳杨洋韩文瑜; 关键词：肺炎克雷伯菌 PCR

鸡源肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛单克隆抗体的制备及鉴定: 本文首先利用肺炎克雷伯菌Ⅰ型菌毛甘露糖敏感血凝特性和Ⅲ型菌毛甘露糖抵抗血凝特性对5株临床分离鸡源肺炎克雷伯菌的菌毛类型进行初步鉴定;随后利用PCR扩增肺炎克雷伯菌Ⅰ型和Ⅲ型菌毛主要结构亚单位基因(fimA/mrkA)的方...; 何礼洋; 关键词：肺炎克雷伯菌单克隆抗体; 文献传递

鸡源肺炎克雷伯菌菌毛的分型被引量：3: 2007年; 目的对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛类型的鉴定。方法首先利用传统的D-甘露糖血凝特性(MSHA/MRHA)试验对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛分型,同时以该菌Ⅰ型和Ⅲ型菌毛的主要结构亚单位(fimA/mrkA)基因序列为靶序列,分别设计一对引物,利用PCR扩增的方法对该5株菌进行菌毛分型。结果MSHA/MRHA方法鉴定其中的4株菌具有Ⅲ型菌毛,另外1株无法鉴别,而PCR方法鉴定5株菌均具有Ⅲ型菌毛。结论该5株鸡源肺炎克雷伯菌均具有Ⅲ型菌毛。MSHA/MRHA具有方便、快速的特点,但不敏感;PCR则具有快速、敏感、准确的优点。研究结果对于肺炎克雷伯菌的流行病学调查及该菌的临床诊断具有指导意义。; 何礼洋韩文瑜贾艳雷连成杨洋; 关键词：肺炎克雷伯菌菌毛

人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立: 2008年; 目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。; 席俊张改平张利娜张红乔松林苗现伟何礼洋张乃生; 关键词：COS7细胞免疫荧光检测

原核表达、稀释复性的人FcγRⅡa恢复IgG的结合功能: 2008年; 目的探讨原核表达稀释复性的可溶性人FcγRⅡa（shuFcγRⅡa）的胞外区蛋白在体外与配体的结合活性。方法应用PCR技术从重组质粒pc3huRⅡ中扩增huFcγRⅡa的胞外区基因，将其克隆于原核表达载体pET-28a中。所构建的重组质粒经PCR和酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，制备融合蛋白包涵体。并采用多次洗涤法分离和纯化包涵体，用稀释法对纯化后的目的蛋白进行复性，ELISA和流式细胞术测定重组shuRⅡ在体外与配体的结合活性。结果扩增到了huFcγRⅡa的胞外区基因，所构建的pETshuRⅡ重组质粒经PCR和酶切鉴定与设计序列一致。转化B121（DE3）后，IPTG诱导目的蛋白表达率约为30％。SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量（Mr）约为24．8×10^3，与理论预期值一致。破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达，经多次洗涤后蛋白纯度大于90％。ELISA法测得重组shuRⅡ与人IgG在体外有良好的结合活性，流式细胞术测得重组shuRⅡ对配体与受体结合有抑制作用。结论本复性方法可得到和天然蛋白类似生物学活性的目的蛋白。; 席俊张改平张利娜苗现伟乔松林张红何礼洋游雷鸣郑彦君; 关键词：原核表达复性