原剑
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 供职机构：北京正旦国际科技有限责任公司更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项北京市留学人员科技活动择优资助项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生理学生物学更多>>
- 大鼠脉络丛组织中锰毒性差异蛋白的筛选、鉴定和GO分析被引量：5
- 2011年
- 目的应用光镜、透射电镜及差异蛋白质组学技术探讨锰对构成血-脑脊液屏障的脑脉络丛组织(choroidplexus,CP)的病理损伤作用及其差异表达蛋白,并对这些差异蛋白按其gene ontology(GO)注释进行细胞学组分、分子功能与生物学过程的分类分析。方法采用雄性SD大鼠(1.5月龄)进行腹腔注射无水氯化锰(6 mg Mn/kg B.W)建立3个病程(30、90 d及90 d后无处理观察30 d)的锰中毒动物模型,分离其双侧侧脑室CP后,应用光镜与透射电镜观察锰所引起的CP病理形态学改变,同时应用蛋白质组学技术筛检出锰毒性相关的差异表达蛋白。结果病理形态学观察发现锰可引起CP上皮细胞发生不规则萎缩变小,微绒毛结构紊乱、缩短,胞浆内出现空泡,核质凝聚,线粒体结构破坏,细胞之间的紧密连接出现部分断裂或消失等,并且这些改变随病程发展表现为加重的趋势;2D-PAGE结合nano-LC-MS/MS的方法鉴定到了32个锰病程相关的差异蛋白质,其中有27个上调蛋白,5个下调蛋白。GO分类分析后发现差异表达蛋白主要分布在线粒体、膜表面以及细胞质内,以结合、催化活性以及转运功能为主,参与代谢与转运等生物学过程。结论锰可引起CP的细胞及亚细胞结构发生病理性损伤并表现为一定的时效性,即便停止锰染毒上述损伤仍然进行性加重;同时,还可造成CP中特定功能蛋白质随病程进展发生上调或下调的变化,这些改变很可能是锰引起BCB结构损伤和功能失调的分子基础,其功能蛋白质组学的研究值得进一步深入开展。
- 敬海明杨帆刘建中高文晖张拓赵超英马玲郑珊聂燕敏杜宏举张馨月原剑潘晨松蒲海李静魏开华李国君
- 关键词：脉络丛血-脑脊液屏障锰差异表达蛋白
- MALDI-TOF生物质谱成像技术的进展被引量：6
- 2010年
- 随着MALDI-TOF等生物质谱仪器性能的提升和应用领域的扩大,基于MALDI的质谱成像技术已成为研究肿瘤标志物、药物代谢、脂类分布等方面的有力手段。最新样品前处理方法以及自动化基质喷涂等技术的发展,大大提高了质谱成像技术的灵敏度和分辨率。利用原位酶切技术直接鉴定组织切片上的蛋白质和多肽是IMS当前的热点和关键。体内药物代谢物分布、脂类物质分布以及植物组织的质谱成像等研究逐渐成为新的应用热点。本文较系统地介绍了生物组织质谱成像技术的研究进展。
- 杨帆原剑郑俊杰魏开华
- 关键词：福尔马林三维重建
- 多肽抗体检测原发性肝癌血清标志物ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2012年
- 血清多肽是癌症诊断信息的重要来源,建立、优化了检测多肽标志物的直接ELISA法,并应用于肝癌血清中的多肽标志物的检测。制备及纯化针对多肽标志物Pep5的单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,用其建立检测相应抗原的直接ELISA法。方法线性范围为1.5-20 ng/mL,检测限为1.24 ng/mL;标准品批内及批间CV分别小于3.66%及4.89%,血清样本批内及批间CV分别小于11.69%及18.18%;线性范围内(9、12和15 ng/mL)的回收率分别为98.98%,99.61%和101.58%。应用该方法共检测160例正常血清、104例肝硬化及156例肝癌患者血清,正常组与肝硬化组及肝癌组间差异显著(P<0.001),Pep5诊断肝癌的敏感性和特异性分别为80.8%和96.2%。同时检测94例HCC血清中的AFP和Pep5,AFP检出率为63.8%,Pep5检出率为90.4%,AFP联合Pep5检测时,能将HCC的检出率提高至94.7%。
- 周晓明傅海媛黄亚娟侯利平孙云波原剑杨保安郑俊杰甄蓓肖汉族貌盼勇魏开华
- 关键词：多肽抗体ELISA肝癌
- 多肽抗体免疫富集-质谱法检测肝癌患者血清多肽标志物被引量：12
- 2011年
- 血清多肽是癌症诊断信息的重要来源。近年来针对其复杂多样、丰度低、易降解的特点,多种多肽组技术得到快速发展。建立并优化了检测多肽标志物的免疫质谱方法,用于检测血清中的肿瘤多肽标志物。方法的线性范围为1～40pmol;检出限为0.5pmol;对5pmol合成肽5标准品平行检测3次的相对标准偏差(RSD)为9.5%。采用本方法检测出浓度为35.2nmol/L的血清多肽标志物。本方法适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。
- 原剑孙云波周晓明杨帆杨保安郑俊杰甄蓓貌盼勇李楠白洁林利忠徐淑芳肖汉族魏开华
- 关键词：多肽抗体质谱肿瘤
- 溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用
- 2014年
- 获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000U/mg,日内、日间相对标准偏差均小于5％;优选Lowry法并精确测定蛋白含量为（1.0±0.1）mg/mL.改进后的方法稳定性得到明显提高,且操作简便、结果可靠,已被3家研究单位、企业验证并接受.建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值.
- 宋纯艳张拓侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华
- 关键词：比浊法
- 免疫质谱检测肝癌患者血清多肽标志物的方法与应用研究
- 在蛋白质组学研究的很长时间内,天然多肽被视为体内代谢的生物垃圾。最近几年很多研究者发现,多肽作为蛋白代谢产物,反映了体内生物代谢过程。多肽组是疾病标志物的重要的宝库,对于肿瘤的早期预警、早期诊断具有重要的研究意义。肝癌作...
- 原剑
- 关键词：肝癌血清
- 文献传递
- MALDI-TOF/TOF和LC-MS/MS液质联用分析大鼠脑脉络丛的多肽组被引量：5
- 2010年
- 脉络丛(choroid plexus,CP)位于血液与脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)之间,不仅是CSF的重要来源,而且是构成血液-脑脊液屏障(blood-cerebrospinal fluid barrier,BCB)的组织基础.CP参与脑组织中一些血源性多肽的输送以及自身多肽合成的生理过程,在维持脑微环境动态平衡和调节中枢神经系统的正常功能方面起到非常重要的作用.本研究分别运用MALDI-TOF/TOF和LC-MS/MS液质联用系统分析了成年SD大鼠血液-脑脊液屏障(即脉络丛组织)中的多肽组.共鉴定到163个多肽(P<0.001),这些多肽为69种蛋白质的降解肽段,其中ATP合酶(ATP synthase),细胞色素c(cytochrome c),血红蛋白(hemoglobin),NADH-辅酶Q氧化还原酶(NADH-ubiquinone oxidoreductase),β珠蛋白(beta-globin)这5种蛋白质的肽段数占总肽段数的50%以上,并且部分多肽序列相似度高,类似其前体蛋白的逐步降解片段,而这些前体蛋白质的分子量多数在10kD至20kD之间.上述研究结果为SD大鼠脉络丛组织的生理功能研究及组织多肽组学的研究方法提供了有价值的科学资料.
- 杨帆敬海明张拓原剑赵超英马玲甄蓓李国君魏开华
- 关键词：生物质谱脉络丛
- 免疫质谱法检测肝癌血清多肽标志物被引量：4
- 2012年
- 建立免疫亲和富集分离与质谱分析相结合的免疫质谱法用于血清多肽标志物pep5的检测。多克隆抗体与蛋白A琼脂糖颗粒偶联用于捕获pep5,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测标志物。本方法的线性范围为1～48 nmol/L,检出限0.2 nmol/L;回收率为93.0%～103.1%,相对标准偏差(RSD)为6.4%～11.8%;反复冻融3次pep5,检测结果稳定;检测临床肝癌/正常血清样本灵敏度为78.0%、特异度为90%。该方法方便、快速、准确,适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。
- 傅海媛原剑周晓明孙云波黄亚娟侯利平宋纯艳杨保安甄蓓高蓉貌盼勇林利忠徐淑芳肖汉族魏开华
- 关键词：多肽抗体质谱
