史巧芸
- 作品数：17 被引量：37H指数：4
- 供职机构：海南大学农学院更多>>
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- 牛乳头状瘤病毒13型L1基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2015年
- 本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494bp的目的片段,同时用BamHⅠ和HindⅢ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-L1重组质粒,双酶切和测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌中,筛选出最佳IPTG浓度和最佳诱导时间后进行诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,L1基因正确插入到原核表达载体pET28a(+)中;IPTG诱导后含重组质粒pET28a-L1的表达菌成功表达了带His标签的融合蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量为60ku,与预期大小一致,超声破菌后,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白存在于沉淀中;Western blotting验证为带His标签的融合蛋白。本试验为进一步研究BPV13 L1基因的功能及为BPV13有效DNA疫苗的研制奠定基础。
- 赵天靖贾晓晓史巧芸郭莳雨庞峰朱华培徐开莲李亚颖彭冬梅李国华王凤阳
- 关键词：L1克隆原核表达
- 基因Ⅳ型戊型肝炎病毒 ORF3对 HEK293细胞 MAPKs磷酸化的影响被引量：2
- 2014年
- 为了分析戊型肝炎病毒ORF3蛋白对于靶细胞MAPK磷酸化的影响,应用人磷酸化MAPK抗体微阵列比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的磷酸化MAPK表达谱,筛选获得显著上调/下调的磷酸化MAPK。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1的表达水平升高,而p-P38б表达水平降低。结果表明,ORF3蛋白影响了HEK293细胞的p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1、p-P38б等MAPKs的磷酸化水平,为HEV ORF3对于靶细胞磷酸化MAPK表达影响的分子机制研究提供了重要依据。
- 杜丽成鹰史巧芸焦寒伟荣辉张珈宁贾晓晓郭莳雨朱华培赵天靖徐开莲王凤阳
- 关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒MAPK磷酸化
- 羊种布鲁氏菌Wzt基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2014年
- 为进一步研究Wzt蛋白在光滑型脂多糖合成路径中的作用,本试验利用PCR技术,以羊种布鲁氏菌16 M株基因组为模板,扩增出大小为759bp的Wzt基因片段,将其连入pMD20-T载体,测序正确后构建重组质粒pET-28a-Wzt,转化E.coli BL21（DE3）工程菌,IPTG诱导其表达,最后用Western blotting鉴定蛋白。结果显示,扩增出的Wzt基因片段大小为759bp,与GenBank中登录的羊种布鲁氏菌16M株Wzt基因序列（登录号：AF047478.1）同源性为99.87%,证明成功克隆了Wzt基因,同时成功构建了pET-28a-Wzt原核表达载体,并在E.coli BL21（DE3）工程菌中表达了Wzt蛋白,诱导得到的融合蛋白大小约为30ku,位于25～35ku之间,与目的蛋白大小一致,结果表明成功表达了目的基因。
- 庞峰贾晓晓赵天靖朱华培徐开莲郭莳雨史巧芸荣辉周海龙王凤阳
- 关键词：羊种布鲁氏菌克隆原核表达
- 基因Ⅳ型戊型肝炎病毒ORF3对靶细胞脂肪因子表达的影响被引量：2
- 2013年
- 为了探讨戊型肝炎病毒ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制,应用蛋白芯片技术比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的脂肪因子表达谱,筛选获得显著上调/下调的脂肪因子。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,Fas和TIMP-2的表达水平升高,而ACE-2表达水平降低。研究结果为HEV ORF3对于靶细胞重要脂肪因子表达影响的分子机制研究提供了重要依据。
- 杜丽成鹰史巧芸焦寒伟焦寒伟荣辉张珈宁贾晓晓郭莳雨王凤阳
- 关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒靶细胞脂肪因子
- 牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2015年
- 基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48h后,约55.59%的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。
- 庞峰史巧芸朱华培徐开莲赵天靖李亚颖彭冬梅李国华周海龙王凤阳
- 关键词：E5EGFP真核表达
- 布鲁氏菌外膜蛋白2b基因的克隆、原核表达及蛋白生物信息学分析被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在克隆布鲁氏菌外膜蛋白2b(Omp2b)基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。根据布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp2b基因序列设计引物,以布鲁氏菌基因组为模板,通过PCR技术扩增得到Omp2b基因片段,回收纯化后,将此片段连接入pMD20-T质粒,将该重组质粒转化E.coli DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆菌提取质粒后,送公司测序。将该片段亚克隆入pET28a载体,构建pET28a-Omp2b表达载体,转化E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定此蛋白。运用DNAMAN、BioEdit等各种工具软件对Omp2b基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,成功克隆了Omp2b基因,其开放阅读框为1041bp,编码347个氨基酸;构建了pET28a-Omp2b原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中成功表达了Omp2b基因,表达蛋白约38ku;Omp2b蛋白二级结构中α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占20.17%、26.22%、5.76%和47.84%。
- 赵天靖贾晓晓焦寒伟朱华培徐开莲郭莳雨史巧芸荣辉成鹰张珈宁庞峰杜丽王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达生物信息学分析
- 海南原鸡CDC42 cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2012年
- 以海南原鸡外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增海南原鸡细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle42,CDC42)编码区,将扩增产物与pMDTM20T载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行序列特征、同源性、编码蛋白质理化性质及结构预测等生物信息学分析。结果表明,海南原鸡CDC42的CDS序列长度为576bp,编码191个氨基酸;与鸡、人、牛、褐家鼠、斑马鱼的核苷酸序列同源性分别为100%、88.54%、88.19%、86.98%、82.12%;该基因编码的蛋白质相对分子质量约为21259,理论等电点为6.16;编码蛋白为非跨膜蛋白,在其二级结构中,α-螺旋占27.23%,β-折叠占25.65%,无规卷曲占47.12%。
- 张珈宁荣辉杜丽贾晓晓史巧芸郭莳雨吴科榜王学梅王凤阳
- 关键词：CDC42克隆生物信息学分析
- 羊布鲁菌外膜蛋白Bp-26基因的克隆及其原核表达被引量：4
- 2013年
- 应用PCR扩增羊布鲁菌M5-90株基因组DNA,得到大小为753bp的Bp-26基因,将其克隆入pMD20-T载体上,测序正确后,构建重组质粒pET-28a-Bp-26,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导其表达,用Western blot鉴定蛋白。结果表明,成功构建了pET-28a-Bp-26原核表达载体,并在E.coli BL21中表达Bp-26基因,为开展羊布鲁菌Bp-26目的蛋白的抗原性分析和功能研究奠定了基础。
- 史巧芸荣辉郭莳雨贾晓晓张珈宁朱华培杜丽成鹰焦寒伟王凤阳
- 关键词：克隆原核表达
- 羊种布鲁氏菌Omp10基因的克隆及原核表达被引量：8
- 2014年
- 根据GenBank公布的羊布鲁氏菌(B.melitensis)M5-90株外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)基因序列,设计1对引物,以其全基因组为模板,采用PCR技术对其进行扩增,得到381bp的目的片段,连接入pMD20-T载体,转化E.coli DH5α感受态细胞;测序正确后,构建pET-28a-Omp10原核表达质粒,再将该质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白His-Omp10,用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。结果表明,成功构建了含Omp10基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了Omp10基因,诱导得到的融合蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明Omp10得到成功表达。该试验为布鲁氏菌病的进一步研究奠定基础。
- 徐开莲朱华培赵天靖贾晓晓郭莳雨庞峰焦寒伟成鹰杜丽史巧芸荣辉张珈宁王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌原核表达克隆
- 布鲁氏菌外膜蛋白16基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2013年
- 为了成功克隆外膜蛋白16(outer membrane proteins 16,Omp16)基因并对其进行原核表达,试验根据GenBank中羊布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp16基因序列(登录号:JF918760.1)设计1对引物,从布鲁氏菌基因组中扩增出大小约为507bp的目的基因片段,凝胶回收纯化目的片段,连接入pMD20-T质粒,转化E.coli DH5α并测序,测序正确后再亚克隆入pET-28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-Omp16,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,最后用Western blotting分析方法鉴定诱导得到的蛋白。结果表明,成功构建了pET-Omp16原核表达载体,并在E.coli BL21中表达了Omp16基因,诱导得到的蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明成功表达了目的基因。
- 贾晓晓焦寒伟郭莳雨史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽成鹰王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达
