张万江
- 作品数：10 被引量：50H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪表皮生长因子间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2008年
- 为建立酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测猪血清或尿液中猪表皮生长因子(porcinee pidermal growth factor,pEGF)的含量,以pEGF为包被原,人表皮生长因子(hu-mane pidermal growth factor,hEGF)为竞争抗原,两者与一定量的抗pEGF多抗反应。结果表明,理想的包被抗原浓度为0.625μg/mL,抗pEGF工作浓度为1∶64000,酶标二抗工作浓度为1∶20000,可检测的最适范围为0.4ng/mL^32ng/mL,最低检测限为1ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.50%和5.22%。得到回归方程y=-34.53x+76.06(R2=0.993)和标准曲线,从而建立了快速定量测定pEGF含量的酶联免疫吸附试验方法。
- 张万江王秀梅杨桂香
- 关键词：猪表皮生长因子多克隆抗体间接竞争ELISA
- 防止耐药性产生的合理用药被引量：2
- 2007年
- 邱电王秀梅张万江杨利军
- 关键词：细菌耐药性合理用药病毒性疾病畜禽养殖业药物残留
- 猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定
- 【研究目的】猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能,从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此非常有必要开发猪表皮生长因子。【方法】用人工合成的pEGF基因为模板...
- 杨桂香汪洋吴波浪张万江黄伟华彭险峰
- 关键词：猪表皮生长因子毕赤酵母分泌表达生物活性
- 文献传递
- 猪表皮生长因子间接竞争ELISA检测方法的建立
- 猪表皮生长因子(porcine epidermal growth factor，pEGF)是一种含有53个氨基酸残基的单链多肽生长因子，与人、牛、鼠等动物的表皮生长因子相似，可刺激多种细胞的增殖，主要是内皮和表皮细胞的分...
- 张万江
- 关键词：猪表皮生长因子多克隆抗体单克隆抗体ELISA检测
- 文献传递
- 猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：9
- 2007年
- 【目的】猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能,从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此开发猪表皮生长因子具有重要意义。【方法】用人工合成的pEGF基因为模板,用PCR扩增获得pEGF-6His片段,将其克隆到载体pPIC9构建重组质粒pPIC9-pEGF并电转化毕赤酵母。用斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子即基因工程菌,用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,纯化产物用抗His-tag的单克隆抗体进行蛋白质免疫印迹、氨基端测序鉴定、体外生物活性检测。【结果】斑点杂交法筛选中信号越强的转化子,甲醇诱导表达的目的蛋白含量越高。免疫印迹中可以观察到印迹条带。氨基端氨基酸测序发现纯化的表达产物含有2条肽链,其N-端15个氨基酸的序列分别与天然的pEGF以及Glu-Ala-pEGF的序列相同。体外生物活性检测结果表明,纯化的表达产物对BALB/c3T3细胞具有显著的增殖作用。【结论】本研究获得了能高效表达具有生物学活性的重组猪表皮生长因子的基因工程菌。
- 汪洋杨桂香吴波浪张万江黄伟华彭险峰
- 关键词：猪表皮生长因子毕赤酵母分泌表达生物活性
- 猪表皮生长因子真核表达产物的体外活性试验被引量：2
- 2008年
- 为建立一种快速检测猪表皮生长因子(pEGF)活性的方法,用本实验室构建的pEGF酵母表达载体进行摇瓶培养,通过鉴定为所需要的目的蛋白,用pEGF为添加物培养Balbc/3T3细胞,以pEGF浓度为横坐标,吸光度为纵坐标建立曲线。结果表明,理想的接种细胞的个数为5 000个/孔,细胞计数试剂盒(CCK-8)孵育的最佳时间为1.5 h,pEGF和人表皮生长因子(hEGF)标准品,在1 ng/mL^100 ng/mL范围内对细胞的增值作用相当,表明pEGF和hEGF有相同的生物学活性。建立了用CCK-8快速测定pEGF活性的方法。
- 张万江王秀梅吴波浪杨桂香
- 关键词：猪表皮生长因子生物活性
- 猪源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及抗菌药耐药性的调查被引量：33
- 2010年
- 【目的】探讨猪大肠杆菌病分离的E.coli的优势血清型与毒力基因和耐药性的相关性。【方法】采用玻片凝集法测定了猪大肠杆菌病有关的血清型分布,PCR方法调查7种毒力相关基因,用微量稀释法测定了所有菌株对18种抗菌药的敏感性。【结果】超过一半的菌株含有astA,Stx2e和eaeA基因,且毒力基因组合Stx2e+astA和Stx2e+eaeA较为流行。定型菌株53株,分别属于15个不同的血清型,其中O8和O64为主要流行的血清型。O8型菌株中,所有均携带astA基因,多数耐四环素、环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑,但对安普霉素,阿米卡星和多黏菌素E敏感;而O64型菌株中,多数携带astA和Stx2e基因,所有对环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑耐药,但对多黏菌素E和卡那霉素敏感。【结论】O8和O64为主要流行的血清型,两种血清型菌株拥有相似的毒力基因谱和耐药表型,但有不同的敏感表型。
- 王秀梅蒋红霞廖晓萍张万江朱恒乾张悦刘雅红
- 关键词：血清型毒力基因耐药性大肠杆菌
- 鸡源致病性大肠杆菌药物敏感性调查被引量：1
- 2010年
- 从广东省内中、大规模鸡场的病死鸡中分离细菌,选取经生化鉴定确定为大肠杆菌的93株为试验菌株。采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药的药物敏感性。结果显示:80%以上的菌株对头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星敏感;55%～71%的菌株分别对左氧氟沙星、头孢曲松、庆大霉素和链霉素敏感。然而,多数菌株对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星和磺胺甲噁唑的敏感率较低,在0～28%之间。上述结果表明,治疗大肠杆菌引起的鸡群感染时,可优先选择敏感率高的药物,如头孢噻呋、安普霉素和阿米卡星,不用敏感率较低的药物,如四环素环、丙沙星、恩诺沙星和磺胺甲噁唑。
- 王秀梅张万江廖晓萍赖代鑫何爱贞刘雅红
- 关键词：致病性大肠杆菌磺胺甲噁唑鸡源分离菌株头孢噻呋阿米卡星
- 鸭源致病性大肠杆菌的耐药性调查被引量：1
- 2010年
- 鸭大肠杆菌病是指由致病性大肠杆菌引起鸭全身或局部感染的一种细菌性传染病，在临床上有大肠杆菌性败血症、腹膜炎、生殖道感染、呼吸道感染、脐炎和蜂窝组织炎等病型。本病目前呈世界性分布，国内各地的鸭群普遍存在感染并常有发病。
- 王秀梅廖晓萍张万江赖代鑫何爱贞刘雅红
- 关键词：致病性大肠杆菌鸭源耐药性细菌性传染病鸭大肠杆菌病大肠杆菌性
- 猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定
- [研究目的]猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能,从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此非常有必要开发猪表皮生长因子。[方法]用人工合成的pEGF 基因为模...
- 杨桂香汪洋吴波浪张万江黄伟华彭险峰
- 关键词：猪表皮生长因子毕赤酵母分泌表达生物活性
- 文献传递
