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侵染蛋白介导生产重组杆状病毒粒子方法: 本发明公开了侵染蛋白介导生产重组杆状病毒粒子方法，其按下列步骤进行：(1)构建DAP营养缺陷型菌株E.coli ΔASD DH10B；(2)将Bacmid和转座辅助质粒以及表达侵染蛋白助手质粒电转化进E.coli ΔAS...; 姚伦广张祥满孙京臣张二辉阚云超刘宗才; 文献传递

零背景构建重组杆状病毒的方法: 本发明是一种零背景构建重组杆状病毒的方法。具体步骤为：(1)构建以R6Kγ作为复制子的供体质粒，并按常规方法引入外源基因；(2)封闭DH10Bac宿主菌基因组上的attTn7受体位点，获得DH10BacΔTn7；(3)常...; 张二辉姚伦广孙京臣刘宗才张红玲; 文献传递

一种简便高效构建重组杆状病毒的方法: 本发明是一种简便高效构建重组杆状病毒的方法。主要步骤如下：(1)构建含双启动子，能定向快速克隆PCR产物的供体质粒；(2)将I－SceI表达盒引入到E.coliDH10B的基因组中，同时将2个I－SceI位点和一个抗性基...; 姚伦广刘宗才阚云超张祥满刘飞张二辉; 文献传递

BmNPV-家蚕幼虫多基因表达系统构建方法: 本发明涉及一种BmNPV-家蚕幼虫多基因表达系统构建方法，按下列步骤顺序完成：(1)将阿拉伯糖启动子pBAD控制的I-SceI表达盒重组到E.coliDH10B的基因组中获得新的受体菌I-SceI DH10B；(2)结合...; 姚伦广张二辉孙京臣阚云超刘宗才刘飞; 文献传递

BmNPV－家蚕幼虫多基因表达系统构建方法: 本发明涉及一种BmNPV－家蚕幼虫多基因表达系统构建方法，按下列步骤顺序完成：(1)将阿拉伯糖启动子(pBAD)控制的I－SceI表达盒重组到E.coli DH10B的基因组中获得新的受体菌I－SceI DH10B；(2...; 姚伦广张二辉孙京臣阚云超刘宗才刘飞; 文献传递

构建重组杆状病毒的方法: 本发明是一种零背景构建重组杆状病毒的方法。具体步骤为：(1)构建以R6Kγ作为复制子的供体质粒，并按常规方法引入外源基因；(2)封闭DH10Bac宿主菌基因组上的attTn7受体位点，获得DH10BacΔTn7；(3)常...; 张二辉姚伦广孙京臣刘宗才张红玲; 文献传递

零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统被引量：2: 2009年; 【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)Bac-to-Bac系统,为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM,同时封闭BmNPV-Bacmid(Bm Bacmid)宿主菌(Escherichia coli BmDH10 Bac)的Tn7转座受体位点attTn7,获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10 Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coliBmDH10Bac中复制,封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组,显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点,能使转座效率提高近4倍,使用条件复制型转座载体pRADM时,转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7时,转座阳性率为100%。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序,缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7,获得重组BmBacmid转染BmN细胞,红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10 Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。; 姚伦广张红玲冯娟张二辉文祯中

侵染蛋白介导生产重组杆状病毒粒子方法: 本发明公开了侵染蛋白介导生产重组杆状病毒粒子方法，其按下列步骤进行：(1)构建DAP营养缺陷型菌株E.coli ΔASD DH10B；(2)将杆状病毒Bacmid和转座辅助质粒以及表达侵染蛋白助手质粒PGB2Ωinv电转...; 姚伦广张祥满孙京臣张二辉阚云超刘宗才; 文献传递

家蚕杆状病毒多基因表达系统制备活性蛋白研究: 姚伦广阚云超刘宗才刘飞张二辉焦铸锦唐青海; 我国养蚕历史悠久，南阳乃丝绸之路源头，在国家"东桑西移"工程中，河南南阳就有2个桑蚕基地。南阳具有丰富的家蚕资源，利用现代基因工程技术开发高附加值产品对南阳和我省蚕桑业良性发展具有重要意义。除吐丝结茧外，家蚕还是一种非常...; 关键词：; 关键词：养蚕多基因表达

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张二辉