张晓东
- 作品数：13 被引量：5H指数：1
- 供职机构：吉林大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 新城疫病毒3′及5′末端非编码区序列的反向遗传研究
- 2014年
- 以新城疫病毒(NDV)LaSota株感染性克隆PCI-La为平台进行反向遗传操作,并利用PCR技术将其3′端和5′端非编码区分别替换为鹅源NDV NA-1株3′端和5′端非编码区,以及3′端和5′端非编码区同时替换,通过生物学软件DNAStar对替换后的序列进行比对分析,所替换的序列未出现基因突变现象,证明非编码区替换成功,从而分别获得3株突变全长感染性克隆pCI-rL-NL、pCI-rL-NT、pCI-rL-NL-NT;将所获得的这3株突变感染性克隆分别与辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L共转染BSR细胞,进行重组病毒的拯救。结果显示,pCI-rL-NL、pCI-rL-NT两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,其HA效价为24,23,HI试验及间接免疫荧光试验结果均为阳性,并且通过电镜观察到具有典型副黏病毒科特征的、有囊膜的NDV颗粒。本试验成功构建了2株NDV LaSota突变株的反向遗传操作系统,为后期进行重组NDV致病性的研究奠定基础,也为进一步研究筛选新型分子标记疫苗、病毒活载体疫苗和抗病毒药物提供了可能。
- 李想高超李芹王建忠杨闽楠王泽张晓东丁壮
- 关键词：NDV拯救
- 鹅副黏病毒病NP、L基因RNA的体外转录合成及其靶脱氧核酶的初步筛选
- 目的：为探讨脱氧核酶在抑制GPMV复制研究，利用体外转录方法制备鹅副黏病毒病NP、L基因RNA并用该RNA对其所设计靶脱氧核酶进行初步筛选。方法：通过RT-PCR方法获得目的基因NP、L，同时针对NP、L基因保守区上游设...
- 母连志宋德武丁壮刘慧张晓东
- 关键词：鹅副黏病毒体外转录基因筛选
- CEF中Raf-1激酶抑制蛋白过表达载体的构建及表达
- 根据NCBI递交的RKIP基因全长基因序列，扩增并将其克隆至pEGFP-N1真核表达载体上，转染原代CEF细胞，检测其表达，为研究其功能的奠定基础。研究表明，RKIP是前列腺癌的转移抑制基因，RKIP具有促进细胞迁移的作...
- 杨建新郭玉培丁壮张晓东
- 关键词：免疫功能
- NME2基因的克隆及真核表达载体的构建
- 目的：构建核苷二磷酸激酶的真核表达载体，拟研究NDPK表达对NA-1株NDV复制增殖的影响。结论：NDPK一种管家酶，首要功能是通过催化二磷酸核苷和三磷酸核苷之间的磷酸基转移反应。有研究表明，NDPK能够参与跨膜信息传递...
- 郭育培杨建新丁壮张晓东党源王泽
- 关键词：新城疫病毒宿主蛋白核苷二磷酸激酶真核表达载体蛋白家禽疾病
- 感染新城疫病毒NA-1株后鸡血清蛋白质组变化的研究
- 本文的目的是从蛋白质组学角度研究正常鸡和感染NA-1株副粘病毒鸡血清中蛋白质组发生的变化，从而寻找候选血清标记。利用双向电泳技术比较分析NA-1株鹅副粘病毒感染和未感染鸡血清蛋白质组，鉴定了包括急性期蛋白、免疫相关蛋白等...
- 邓效禹张晓东丁壮党源王泽郭育培杨建新
- 关键词：鹅源副粘病毒致病机制血清标记
- 稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系的构建及鉴定被引量：3
- 2011年
- 设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系。构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为下一步建立有效的鹅源副黏病毒病毒反向遗传操作平台奠定了基础。
- 母连志孙玉章丛彦龙李少丽张晓东王广美王晓莉丁壮
- 关键词：克隆病毒拯救
- 鹅源新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞差异蛋白研究
- 目的：揭示CEF细胞对NDV感染的反应机制。方法：用2-DE对感染和未感染NDV的CEF细胞样品进行了差异蛋白质组学分析。结果：在病毒感染后24h共有20个蛋白点的表达水平发生了至少3倍的上调或下调表达变化。在这些差异表...
- 党源张晓东丁壮王泽邓效禹郭玉培杨建新
- 关键词：鸡胚成纤维细胞差异蛋白
- Raf激酶抑制蛋白对新城疫病毒增殖的影响
- 为了探讨Raf激酶抑制蛋白在NDV复制与增殖过程中所发挥的作用，本研究建立了稳定表达RKIP的Vero细胞株，采用实时荧光定量PCR方法和病毒感染滴度(TCID50)测定方法，检测感染NDV后不同时间段细胞培养上清的病毒...
- 杨建新郭育培王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：新城疫病毒细胞增殖实时荧光定量检测
- 文献传递
- 稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响
- 2012年
- 为了研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对新城疫病毒(NDV)复制的影响,从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增RKIP基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR、双酶切和测序鉴定,采用Fu-GENE HD法将阳性质粒转染Vero细胞,经G418筛选,有限稀释法获取单克隆细胞株,Western-blotting检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明:成功构建鸡RKIP真核表达质粒;转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP;感染初期,NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。
- 杨建新郭育培张学东王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：新城疫病毒
- NP基因缺失鹅副粘病毒NA-1株全长cDNA感染性分子克隆的构建
- 鉴于目前主要存在15192nt和15186nt两种长度的新城疫病毒(NDV)基因组，同时15192nt基因组中多出的6nt都集中于NP基因5'非编码区，本研究特为探究这6nt对NDV毒力是否存在重要影响。鹅副粘病毒NA-...
- 刘佳旭张晓东丁壮杨建新郭玉培
- 关键词：鹅副粘病毒
