张陶然
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二甲双胍通过下调IL-6抑制卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞活性的研究被引量：13
- 2016年
- 目的：探讨二甲双胍对卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞（CAF）活性的影响,以及可能的调控机制。方法：RT-PCR法检测二甲双胍作用于SKOV3细胞系及原代CAF后炎症因子（IL-6、OPN、IL-1b、COX-2、Cyr61）mRNA水平变化;将MRC5于SKOV3-CM（condition medium）培养7-10天得到活化的MRC5即MRC5-CAF,原代CAF及MRC5-CAF经免疫荧光鉴定α-SMA表达;Western blot检测上述炎症因子蛋白水平。在TCGA数据库557例卵巢癌中验证炎症因子与CAF属性相关基因的相关性。免疫荧光验证活化的MRC5中二甲双胍对α-SMA及IL-6表达的影响。在MRC5-CAF细胞系中进一步验证了二甲双胍或IL-6对CAF属性相关基因的影响。增殖实验和Transwell实验比较二甲双胍或IL-6对MRC5-CAF促进SKOV3增殖及迁移能力的影响。胶原回缩试验比较二甲双胍或IL-6对MRC5-CAF收缩细胞外基质ECM的影响。结果：二甲双胍下调CAF中炎症因子尤其是IL-6,同时下调CAF中α-SMA水平。TCGA数据库中IL-6 mRna与CAF属性相关基因（FAP、PDGFRB、FN1、COLL6A6）呈显著正相关（P〈0.0001）;二甲双胍、IL-6共刺激组较IL-6组,STAT3通路和α-SMA下调;二甲双胍能逆转IL-6对卵巢癌CAF促肿瘤增殖转移及收缩胶原的能力。结论：卵巢癌中IL-6可能参与维持了间质CAF细胞活性和间质属性,二甲双胍可能通过下调CAF中IL-6/P-STAT3通路从而抑制卵巢癌CAF对肿瘤细胞的支持作用。
- 徐森杨宗元靳平张陶然高庆蕾
- 关键词：肿瘤相关成纤维细胞二甲双胍
- 整合素β_1阳性卵巢癌细胞具干细胞样属性和间质属性分析被引量：2
- 2014年
- 目的:检测和分选人卵巢癌细胞系SKOV3及原代卵巢癌细胞中整合素β1(ITGβ1)阳性细胞,鉴定其是否具有肿瘤干细胞生物学特性。方法:从临床卵巢癌患者腹水中成功分离卵巢癌细胞后,采用流式细胞技术检测SKOV3及原代卵巢癌细胞中ITGβ1和干细胞标志CD133的阳性率;流式分选得到ITGβ1(+)和ITGβ1(-)两群细胞后,采用qRT-PCR比较卵巢癌干细胞相关基因(CD44、CD133、ALDH1、OCT)及上皮间质化(EMT)分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)表达情况,采用悬浮成球试验观察两者干细胞潜能。最后通过免疫缺陷小鼠体内的有限稀释成瘤试验对比ITGβ1(+)/ITGβ1(-)细胞的成瘤能力、自我更新和自我分化能力。结果:SKOV3细胞中可检测到少量的CD133(+)细胞,其比率为(0.91±0.12)%,腹水原代细胞中CD133(+)比率为(2.38±0.34)%;ITGβ1检测SKOV3中ITGβ1(+)比率为(1.95±0.24)%,原代卵巢癌细胞中含量为(3.78±0.28)%;流式分选得到的ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞表达更高的干细胞基因(CD133、CD44、ALDH1、OCT4)(P<0.05)、更低的上皮标志E-cadherin(P<0.05)和更高的间质标志(N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)(P<0.05);悬浮成球试验结果显示:SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞成球数量明显增多,球体体积也明显大于ITGβ1(-)细胞(P<0.05);体内成瘤试验结果显示:在SKOV3细胞系或原代卵巢癌细胞中102个ITGβ1(+)细胞即可成瘤,成瘤比率分别为1/5和2/5,成瘤时间分别为64天和54天;而至少需要104个ITGβ1(-)细胞SKOV3细胞系才有成瘤现象,至少需要103个ITGβ(-)细胞原代卵巢癌细胞才有成瘤现象,成瘤比率均为1/5,成瘤时间分别为78天和68天;ITGβ1(+)细胞的成瘤能力至少为ITGβ1(-)细胞的100倍。结论:卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞高表达间质属性和干细胞基因,具备自我分化、自我更新和体内成瘤能力,ITGβ1(+)表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞的新方�
- 周晓水杨宗元张陶然魏晓刘毅龚成王常玉
- 关键词：卵巢癌肿瘤干细胞整合素上皮间质转化
- 内质网功能状态对卵巢癌细胞顺铂敏感度的影响被引量：4
- 2015年
- 目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)功能状态对卵巢癌细胞顺铂(DDP)敏感度的影响。方法卵巢癌细胞系SKOV3接受40μmol/L DDP处理24 h后,q RT-PCR检测ERS相关基因改变;同时内质网示踪染料(ER-tracker)观察内质网形态变化;分别用ERS稳定剂牛磺熊去氧胆酸钠(tauroursodeoxycholate,TUDCA)或ERS诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)预处理SKOV3,再接受DDP处理,应用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP是否表达;从临床卵巢癌患者腹水中分离与培养原代卵巢癌细胞后,采用流式细胞术比较TUDCA及TG预处理对原代卵巢癌细胞DDP敏感度影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白PARP和Caspase-3的变化。结果顺铂处理卵巢癌细胞系SKOV3后能够引起明显的ERS,ERS相关蛋白明显上调,内质网形态呈现颗粒化;TUDCA可以显著下调DDP引起的杀伤作用(P<0.05),显著降低GRP78和CHOP蛋白水平;TG可以显著上调DDP引起的杀伤作用(P<0.05)、GRP78和CHOP蛋白水平;在卵巢癌腹水原代细胞中TUDCA亦可显著抑制DDP引起的杀伤作用(P<0.05),TG亦可显著上调DDP引起的杀伤作用(P<0.05)。结论改变ERS的功能状态能够影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。
- 周晓水张陶然刘毅杨宗元王常玉
- 关键词：卵巢癌内质网应激顺铂毒胡萝卜素
- 肿瘤相关成纤维细胞促进卵巢癌腹水肿瘤细胞侵袭能力被引量：2
- 2016年
- 目的检测卵巢癌患者腹水中肿瘤相关成纤维细胞(CAF)含量,并探讨其对卵巢癌肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法从20例卵巢癌腹水中分离细胞后,流式检测其中α-SMA细胞阳性率并分为高低两群。在TCGA数据库557例卵巢癌标本数据库中验证α-SMA与上皮间质转化(EMT)相关的转录因子(SNAI1、TWIST1、ZEB1)的相关性;在mRNA和蛋白水平比较以上两群中肿瘤细胞上皮间质转化程度;磁珠分选成纤维细胞贴壁后α-SMA免疫荧光观察其形态;Western Blot验证SKOV3细胞系与人胚肺成纤维细胞系MRC5体外悬浮共培养后EMT程度的改变,Transwell和系膜清除试验验证在悬浮共培养状态下MRC5对SKOV3侵袭能力的影响。结果卵巢癌腹水中α-SMA阳性细胞占腹水细胞(34.40±18.67)%;TCGA数据库中α-SMA与上皮间质转化相关的转录因子显著正相关(r值分别为0.347 0、0.526 2和0.700 2,P<0.01);实时定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot验证α-SMA-H组中肿瘤细胞EMT程度较α-SMA-L组更高;腹水中成纤维细胞贴壁免疫荧光成高表达α-SMA的间质样细胞形态;体外悬浮共培养后,MRC5促进SKOV3的EMT和系膜清除能力。结论卵巢癌腹水中存在CAF并可以促进卵巢癌腹水中肿瘤细胞EMT和侵袭能力。
- 徐森杨宗元靳平张陶然高庆蕾
- 关键词：卵巢癌腹水Α-SMA上皮间质转化
- Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中调控DNA损伤修复相关基因被引量：3
- 2016年
- 目的:检测Dicer1在卵巢癌间质肿瘤相关成纤维细胞中的表达情况,探讨其对DNA双键断裂损伤(DSB)修复相关基因的影响。方法:应用基因集合富集分析(GSEA)方法分析卵巢癌间质和正常卵巢间质基因表达公共数据库GSE40595,探索Dicer1对DSB修复相关通路及关键基因的调控作用,并筛选出相关差异基因。应用重组人转化生长因子β1(h TGFβ1)细胞因子诱导成纤维细胞系MRC5细胞活化成为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs),即MRC5-CAFs。以靶向Dicer1基因的siRNA转染MRC5-CAFs,下调其Dicer1表达水平。qRT-PCR、Western blot法分别检测Dicer1及分析所得相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX、BRCA1、ATR、RAD51 mRNA水平及Dicer1和DSB损伤修复关键基因γ-H2AX(磷酸化H2AX)、RAD51蛋白水平。荧光共聚焦检测细胞核蛋白γ-H2AX表达;采用CCK8试验检测细胞活性。结果:GSEA分析结果显示,Dicer1表达水平与DSB(NES=1.7942109,FDRq=0.0067545176)及DNA损伤修复(NES=2.4433048,FDRq=0)显著正相关,进一步通过相关分析筛选出在上述通路中与Dicer1表达正相关的显著基因集。沉默MRC5-CAFs细胞中Dicer1表达后,DSB相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX及损伤修复相关基因BRCA1、ATR、RAD51均较对照组显著下降,与GSEA分析结果一致。荧光共聚焦显微镜检测到沉默Dicer1 MRC5-CAFs细胞内聚集较少的DSB。CCK8试验结果显示,MRC5-CAFs细胞在20μmol/L顺铂作用下,Dicer1-si组不同时间梯度的细胞活性率均低于NC-si组。结论:Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中正向调控DNA损伤修复相关基因,抑制Dicer1表达后其对顺铂敏感性显著增加。
- 靳平杨宗元徐森张陶然高庆蕾
- 关键词：卵巢癌成纤维细胞顺铂
