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朱函坪: 作品数：139 被引量：200H指数：7; 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学一般工业技术更多>>

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SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究被引量：3: 2003年; 从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm-T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因。为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a-SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达。产物经SDS-PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45％左右。Western-blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应。间接ELISA免疫检测,抗原滴度达1:12500。表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源。; 朱函坪陆群英卢亦愚姚苹苹徐芳葛琼翁景清严菊英龚黎明施雯赵芝雅朱智勇; 关键词：SARS病毒核蛋白基因克隆严重急性呼吸综合征

分组交换电子信箱信息网络在卫生防疫中的应用: 1998年; 分组交换电子信箱信息网络在卫生防疫中的应用浙江省卫生防疫站（杭州３１０００９）朱函坪李莉随着卫生防疫事业的迅速发展，信息交流日益繁多，对信息的准确性、及时性提出越来越高的要求。以往使用点对点的传输方式，常规文件需要定时、定点传送，非例行性文件需要双方...; 朱函坪李莉; 关键词：卫生防疫电子信箱

H5N1人用禽流感疫苗的免疫原性研究: 目的为了确定人用禽流感疫苗的效力试验,建立测定 H5N1禽流感毒种免疫原性的方法。方法用禽流感病毒 R1203株制造的人用疫苗,不同剂量免疫家兔,检查血清中的血凝抑制抗体和中和抗体;进行人、禽流感病毒交叉血凝抑制试验,人...; 朱智勇丁晓航朱函坪李岩金陈学奎沈吉友张涛何培江姚苹苹徐芳翁景清谢荣辉赵芝雅龚华岳郭志军苏波孙淑滨梁伟峰

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化被引量：3: 2000年; 目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ病毒抗原的方法，比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果；比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时，过滤液中仍有部分病毒抗原检出，经１０万相对分子质量滤膜过滤后，过滤液中检测不到病毒抗原；用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时，经波长２８０ｎｍ检测到３个吸收峰，其中仅在第１峰中检测到病毒抗原，收集第１峰，几乎回收全部病毒抗原，去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫苗的规模化生产。; 朱智勇翁景清李岩金陆群英李敏红姚苹苹朱函坪唐汉英傅桂明赵芝雅刘合宾; 关键词：HFRS 灭活疫苗肾综合征出血热

肠道病毒71型诱导沙鼠肌肉细胞凋亡及其机理研究被引量：2: 2017年; 目的研究肠道病毒71型(EV71)杀伤沙鼠原代肌肉细胞的作用机理,为EV71的感染机制研究提供依据。方法采用胰酶/胶原酶消化法分离培养沙鼠原代肌肉细胞,滴加EV71感染细胞,采用CCK-8法检测感染细胞存活率,Hoechst 33258染色法检测感染细胞核变化,Annexin V/PI双染法检测感染细胞的细胞膜变化,蛋白免疫印迹试验检测感染细胞的PARP-1、Caspase-3、Bcl-2家族蛋白等凋亡因子和NF-κB通路相关蛋白表达量的变化。结果构建体外沙鼠原代肌肉细胞模型,使其感染EV71后,肌肉细胞出现皱缩、变圆、漂浮等形态学变化,且感染复数(MOI)越大,病变程度越明显,细胞存活率越低(rs=-0.964,P=0.005);细胞内染色质发生浓缩,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,伴随凋亡小体出现,细胞凋亡与MOI呈正相关(rs=1.000,P<0.001);凋亡标志蛋白PARP-1与凋亡执行蛋白Caspase-3被剪切激活;抑凋亡蛋白Bcl-xl与Bcl-2的表达量随着MOI的增大而减少;p65蛋白表达水平降低,磷酸化水平升高,NF-κB通路被激活。结论 EV71病毒可以诱导沙鼠原代肌肉细胞发生凋亡。; 周彬孙一晟姚苹苹徐芳杨章女卢杭景朱函坪钱捷; 关键词：EV71 细胞凋亡

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种的筛选: 肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。我国占全球发病总数的 90％,病死率约为3％-10％,波及全国30个省市和自治区。在各种预防HFRS的措施中,疫苗是一种最特异和最有效的预防手段。迄今为止...; 姚苹苹徐芳朱函坪翁景清陆群英谢荣辉朱智勇; 关键词：汉坦病毒病毒滴度疫苗生产; 文献传递

一种柯萨奇病毒A10型cDNA感染性克隆的构建方法: 本发明提供一种CVA10中国临床分离株感染性克隆及其构建方法，大大简化了CVA10病毒的反向遗传学操作步骤，为今后CVA10病毒及其他肠道病毒反向遗传学技术的广泛应用提供了更简便的平台，并设计了7对引物对病毒全基因组进行...; 姚苹苹陈晨朱函坪孙一晟徐芳卢杭景

肾综合征出血热的4周龄长爪沙鼠模型被引量：7: 2005年; 目的　肾综合征出血热长爪沙鼠模型的建立。方法　 4周龄左右的长爪沙鼠 ,脑内接种肾综合征出血热 (HFRS)病毒 ,在 - 1、+1、+2、+4天注射环磷酰胺 30mg/kg体重 (第 0天感染病毒 )。结果　沙鼠由隐性感染变为急性致死性感染 ,病死率为 93%。在病死动物的脑、肺、肝、脾和肾等器官中 ,均检查到HFRS病毒抗原。结论　 4周龄长爪沙鼠模型可用于本病的研究。; 姚苹苹徐芳朱函坪陆群英翁景清朱智勇; 关键词：肾综合征出血热病毒长爪沙鼠动物模型环磷酰胺

SARS荧光免疫诊断技术研究被引量：1: 2004年; 目的　应用基因工程技术 ,在昆虫细胞中表达SARS核蛋白基因 ,产生无感染性的核蛋白抗原 ,利用此蛋白制备抗原片 ,用于检测血清中SARS特异性抗体。方法　从非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA ,通过RT PCR方法扩增出SARS核蛋白基因片段 ,将核蛋白基因插入杆状病毒 ,构建重组昆虫杆状病毒 ,转染昆虫细胞 ,收获细胞 ,经丙酮固定 ,制成SARS抗原片 ,建立了SARS荧光免疫方法 (IFA)。结果　用此抗原片检测多份血清 ,仅与SARS病人血清起反应 ,而与正常人及其它发热病人血清不起反应。结论　利用该方法制备抗原片 ,不需要P3实验室 ,操作简便 ,为诊断与研究SARS提供了方便而安全的方法。; 朱函坪卢亦愚陆群英姚苹苹严菊英徐芳翁景清李敏红葛琼龚黎明施雯赵芝雅朱智勇; 关键词：SARS 荧光免疫法基因工程核蛋白基因抗原