杨丽君
- 作品数：15 被引量：39H指数：4
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 致唐氏综合征胎儿大脑皮质发育异常的HC21基因的筛查和鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的通过比较唐氏综合征(DS)和正常胎儿大脑皮质中的基因差别表达模式,初步筛选出与 DS 大脑皮质发育异常、乃至与智力低下发生密切相关的人类21号染色体基因(HC21),为搭建21三体(T21)智力低下发生的分子网络奠定基础。方法利用 Affymetrix U133A 基因芯片分析HC21基因在20周 DS 和正常胎儿大脑皮质中的差别表达模式,利用半定量 RT-PCR 和反向 Northern印迹杂交对筛选出的 HC21基因进行鉴定。结果 Affymetrix U133A 芯片含有127个已知的 HC21基因,其中在两类大脑皮质中均不表达的有56个。在两类组织中均表达的71个 HC21基因中,表达上调1.4倍以上的 HC21基因有27个,表达下调1.5倍以上的有两个。对99个 HC21基因所进行的半定量 RT-PCR 和/或反向 Northern 印迹杂交分析也得到了一致的结果。结论在 DS 和正常胎儿脑组织中差别表达的 HC21基因可能就是造成 DS 脑组织结构和功能发育异常的根本原因,也是引发智力低下的重要的候选基因,对这些基因分子作用通路的深入研究是全面揭示 DS 胎儿大脑皮质发育异常乃至智力低下发生分子机制的基础。
- 郁卫东梁蓉杨丽君尚美沈浣关菁郭静竹
- 关键词：唐氏综合征染色体异常染色体
- 细胞周期抑制性基因ANA在唐氏综合征患者脑组织过量表达被引量：1
- 2005年
- 目的分析唐氏综合征(Down syndrome,DS)胎儿脑组织21号染色体(Chr21)基因的表达,探讨DS脑病变的分子机制。方法采用优化的半定量RT-PCR法,以B2M为内参,检测了7个Chr21基因在DS胎儿及同龄对照胎儿大脑皮层及小脑组织中的表达。结果Chr21基因DYRK1A,SYNJ1,PCP4(purkinje cell protein4gene),C21orf5,C21orf2和C21orf106的表达在DS胎儿大脑皮层及小脑组织较正常对照均没有明显改变。ANA(abundantin neuroepithelium area)基因表达在DS胎儿小脑无明显改变,但在DS胎儿大脑皮层的表达显著升高。结论细胞周期抑制性基因ANA的过表达可能与DS患者脑组织神经元细胞密度低有关。
- 何湘君张旗马丽萍杨丽君沈浣郭静竹
- 关键词：唐氏综合征逆转录聚合酶链反应
- 小鼠单个植入前胚胎SSH方法的可行性被引量：1
- 2004年
- 为建立一种能够一次性分离任意两个植入前胚胎之间全部的差别表达的基因的方法 ,在已有的单胚胎操作技术的基础之上 ,对单个植入前胚胎抑制性消减杂交 (singlepreimplantationembryosuppressionsubtractivehybridization ,SPE SSH)方法进行了初步的探索 ,分离到OM2和MⅡ d 2的基因片段 ,经GenBank和文献检索发现 ,这两个基因具有在MⅡ期和 2细胞期特异性表达的特点 .利用cDNA阵列所进行的鉴定也获得了同样的结果 ,而且所使用的材料极少 ,说明SPE SSH是一种强有力的分离和识别早期发育相关基因片段的实验技术 .若与单个卵裂球分离技术相结合 。
- 郁卫东梁蓉杨丽君郭静竹
- 关键词：小鼠CDNA阵列抑制性消减杂交植入前胚胎细胞期早期发育
- CBS在小鼠卵泡发育过程中的表达模式及其功能初探
- 2006年
- 目的:研究调节同型半胱氨酸水平的关键酶——胱硫醚β合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)在卵母细胞和卵泡发生过程中的动态表达模式及潜在的生物学作用。方法:以体外培养的卵泡以及去除卵泡中卵母细胞后培养的颗粒细胞为载体系统,利用半定量RT-PCR的方法,研究不同时期卵泡以及颗粒细胞中CBS的动态表达模式。结果:在各级卵泡的颗粒细胞中均有高水平的CBS表达,用完整卵泡进行的表达研究表明,各级卵泡中也都有CBS高水平的表达,同时期的颗粒细胞与完整卵泡相比,前者具有更高水平的CBS表达;而不同发育阶段的卵母细胞中均未见CBS表达。结论:CBS在卵泡和卵母细胞的生长、发育和成熟过程中起着重要的作用,其中CBS在卵泡和卵细胞中不同的表达模式提示CBS对卵母细胞发育的影响可能是通过卵泡细胞与卵母细胞的相互作用而实现的。
- 梁蓉郁卫东杜军保杨丽君尚美杨京京徐健郭静竹
- 关键词：卵泡卵母细胞
- 受体相互作用蛋白140敲低对小鼠小胶质瘤细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨受体相互作用蛋白（RIP）140基因敲低对小鼠小胶质瘤细胞（BV-2）增殖的影响。方法用脂质体转染方法将RIP140-短发夹RNA（shRNA）质粒导入BV-2细胞，用嘌呤霉素筛选稳定表达RIP140-shRNA的细胞系，用实时定量PCR和Western印迹法检测RIP140敲低的效果，用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测RIP140敲低对细胞增殖的影响。结果成功构建稳定表达RIP140-shRNA的BV-2-71674和BV-2-71080；与BV-2细胞相比，BV-2-71674和BV-2-71080细胞中RIP140的表达无论mRNA水平还是蛋白质水平均明显低，下调率（mRNA）分别为73％和75％（均P〈0．01）；MTT法检测显示，BV-2细胞在24、48、72、96h 4个时间点增殖率分别为3．03±0．01、7．36±0．08、14．15±0．25、23．35±0．09，BV-2-71674细胞则分别为2．15±0．03、6．43±0．08、11．77±0．31、18．47±0．04，BV-2-71080细胞分别为1．77±0．03、4．74±0．25、10．03±0．02、17．66±0．21；BV-2-71674和BV-2-71080细胞增殖率均明显低于BV-2细胞，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论RIP140敲低可以抑制BV-2细胞的增殖。
- 晁爽郁卫东杜军保曾超美梁蓉杨丽君陈敏霞赵贺华郭静竹
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖
- 人类21号染色体转录调节相关基因作为早期分子诊断标记物的可行性研究被引量：2
- 2005年
- 目的分析与转录调节相关的人类21号染色体(HC21)基因在小鼠植入前胚胎发育过程中的表达模式,初步阐明这些基因与早期胚胎发育的关系,发现这些基因作为分子诊断标记物的可行性。方法应用植入前胚胎的GlobalRT-PCR方法,对BACH1、RUNX1、SIM-2、ERG、KIAA0136、GCFC、SON、PKNOX1、HSF2BP和NRIP1小鼠同源基因在植入前发育阶段的表达模式进行研究。结果RUNX1、ERG和SON在整个植入前发育过程中都未见表达。其他基因的表达呈现出阶段特异性表达的特点:BACH1几乎在整个发育过程中都有表达,但是存在着胚胎个体之间的差异,不适于作为分子标记物;SIM-2只在1和2细胞期表达;Kiaa0136在2、4细胞期以外的各个阶段均表达;除了1-和2-细胞期,GCFC在其它阶段普遍表达;PKNOX1只在1、8细胞以及桑椹期表达;而HSF2BP和NRIP1的表达仅见于成熟的卵母细胞和1细胞期胚胎。结论与转录相关的小鼠HC21同源基因大部分参与了早期胚胎发育的转录调节,这些基因的阶段特异性表达说明他们参与了早期胚胎发育的不同转录调节环节,对这些基因的深入研究是认识唐氏综合症发生的分子机制和发现早期分子诊断标记的基础。
- 郁卫东梁蓉杨丽君关菁李国华郭静竹
- 关键词：21号染色体转录调节分子诊断相关基因胚胎发育过程植入前胚胎
- 受体相互作用相关蛋白140在正常小鼠脑发育过程中的表达被引量：4
- 2007年
- 目的了解受体相互作用相关蛋白(RIP)140在正常小鼠脑发育时期的表达情况。方法应用免疫组化方法研究 RIP140在脑组织中的定位,并应用实时定量 PCR 和 Western 印迹研究RIP140在正常小鼠不同发育时期的动态表达模式。结果免疫组化结果显示 RIP140在正常小鼠脑发育过程中始终存在表达,且在大脑皮质、海马、丘脑等部位有明确的表达。实时定量 PCR 结果显示RIP140 mRNA 在正常小鼠脑不同发育时期的表达呈现动态变化模式,Western 印迹结果示 RIP140蛋白在小鼠脑不同发育时期的表达也呈现动态变化模式,且与 mRNA 的表达具有正相关性(r_s=0.767,P=0.016<双侧>)。结论 RIP140参与了正常小鼠脑发育和脑功能的行使。
- 张晓蕊曾超美杜军保梁蓉杨丽君郁卫东郭静竹
- 关键词：唐氏综合征聚合酶链反应
- 叶酸代谢相关酶基因多态性与唐氏综合征发生易感性的关系被引量：20
- 2006年
- 目的:探讨参与叶酸代谢的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C667T和甲硫氨酸合成还原酶(MTRR)基因A66G基因多态性与中国汉族母亲生育唐氏综合征(Downsyndrome,DS)患儿易感性的关系。方法:生育过DS患儿的母亲30例,对照母亲70例,MTHFR、MTRR基因C667T及A66G基因座多态性采用聚合酶链反应———限制性片段长度多态性的方法检测。结果:携带MTHFR以及MTRR突变基因型的母亲并不增加孕DS的可能性,两个基因的联合作用分析也表明同时携带MTRR突变位点和MTHFR任一突变位点并不增加孕DS的可能性。MTHFR和MTRR突变基因型的分布在病例组和对照组间差异没有显著性(P>0.05)。结论:在本研究的人群中,MTRR基因A66G基因座多态性以及MTHFR基因C667T基因座多态性并不增加母亲孕DS的危险性,MTHFR以及MTRR基因突变位点并不是母亲生育DS患儿的危险因素。
- 梁蓉郁卫东杜军保杨丽君尚美宋眆王林郭静竹
- 关键词：唐氏综合征亚甲基四氢叶酸还原酶叶酸
- SSH法分离早期发育相关基因片段被引量：5
- 2005年
- 目的 :分离和鉴定与小鼠合子基因组激活 (ZGA)以及母源调控向胚胎调控 (MZT)过渡事件相关的基因片段 ,为进一步认识ZGA和MZT发生的分子机制奠定基础。方法 :利用单个植入前胚胎抑制性消减杂交 (SPE SSH)的方法 ,对单个小鼠MⅡ卵母细胞和 2 细胞期胚胎进行双向消减杂交 ;利用cDNAarray对获得的基因片段作进一步的鉴定。结果 :从构建的消减杂交库中随机挑取得 31个克隆 ,经cDNAarray鉴定发现其中有 5个MⅡ期特异表达的基因片段和 9个 2 细胞期特异表达的基因片段 ,Genbank检索发现其中 1 0个片段是首次报道在植入前发育阶段表达。结论 :这些基因片段具有明显的期特异性表达的特点 ,可能在ZGA、MZT和胚胎植入前发育过程中起着重要的作用。
- 郁卫东梁蓉杨丽君郭静竹
- 关键词：基因片段消减杂交相关基因植入前胚胎细胞期特异表达早期发育
- TIMP-1基因缄默削弱SH-SY5Y细胞的增殖潜能并诱导其凋亡增强
- 2008年
- 前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征(Down’s syndrome,DS)胎儿脑组织内表达下调.为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制,本研究以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为模型,观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响.应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株;应用RT-PCR、real-time PCR和Western印迹对干扰效率进行鉴定:与SH-SY5Y细胞相比,无论在mRNA水平还是蛋白水平,SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调(下调率接近100%).结果显示,已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型.在此基础上,通过MTT检测发现,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢;流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加.这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应,提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程.
- 陈敏霞郁卫东梁蓉杨丽君晁爽赵贺华郭静竹
- 关键词：TIMP-1基因沉默增殖凋亡SH-SY5Y细胞
