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组蛋白脱乙酰化酶GST-HDAC1融合蛋白载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2011年; 目的构建GST-HDAC1融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HDAC1为模板进行PCR,通过EcoR1单酶切位点将HDAC1插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并转化E.coli DH5α,通过利用载体上的BamH1酶切位点和HDAC1上Nde1酶切位点来筛选阳性重组子,DNA序列测定正确后,转入化E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果酶切后获得940bp片段为正向;如获得500bp片段为反向。重组质粒测序后与GenBank进行同源性比对证明导入片段为HDAC1,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并用SDS-PAGE方法证实了GST-HDAC1融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了HDAC1原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化HDAC1蛋白及与其它蛋白的关系奠定了基础。; 王桂玲陈薇王孝会姜佩佳; 关键词：原核表达

人肿瘤抑素Tumstatin基因慢病毒表达载体的构建及其蛋白表达: 2008年; 目的构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用。方法采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum,通过酶切、测序验证Tumstatin基因后,将pGC-FU-Tum质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tumstatin基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-Tum,并转染人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Wstern blot检测目的蛋白Tumstatin的表达。结果pGC-FU-Tum中携有正确的Tumstatin基因;pGC-FU-Tum共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒GC-FU-Tum;目的基因Tumstatin能被重组慢病毒高效地转导入HUVEC,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,Western blot能检测到Tumstatin蛋白在靶细胞中的表达。结论成功构建了携带Tumstatin基因的重组慢病毒载体;其蛋白表达与EGFP一致。。; 焦伊胜王永来王桂玲; 关键词：肿瘤抑素慢病毒载体基因

牛肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及组织表达被引量：4: 2003年; NADP(H) dependent retinol dehydrogenase/reductase (NRDR) was an important retinoic acid synthase, which was first purified from rabbit liver in 1997. In order to study the function of the NRDR gene,the full length cDNA of bovine NRDR was cloned. According to the conserved sequences of human, mouse and rabbit NRDR cDNA, a pair of primers was designed to amplify a 294 bp DNA fragment of bovine liver NRDR, and then the full length of NRDR cDNA (AF487454) was cloned by using 3′ RACE and 5′ RACE. All the cloned NRDR proteins consist of 260 amino acid residues and showed high identity among them. The tri peptide of human, mouse and rabbit NRDR C end was SRL and that of bovine NRDR C end was SHL, but both were considered to be peroxisomal target signal 1 (PTS1). RT PCR demonstrated that NRDR gene was expressed in liver, heart, lung, kidney, stomach and intestine, and was not found in pancreas, muscle, artery and skin. The full length bovine NRDR cDNA has been successfully cloned and the sequence was analyzed. It provided a reliable foundation to investigate the biological function of this protein.; 王桂玲黄东阳刘戈飞杜晶; 关键词：克隆 CDNA

bFGF促进人大肠癌LoVo细胞增殖的信号转导机制被引量：2: 2007年; 目的:通过改变碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于LoVo细胞的时间,检测PKB活性和CyclinA的表达情况,进一步研究bFGF通过PI3-K/PKB通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法:MTT法分析bFGF对LoVo细胞增殖程度的影响;(γ-32P)ATP掺入法检测大肠癌LoVo细胞株中PKB的活性;RT-PCR法检测大肠癌LoVo细胞株中CyclinA的表达;Westernblot法检测bFGF作用LoVo细胞后CyclinA的表达.结果:bFGF以不同时间作用于LoVo细胞时,通过(γ-32P)ATP掺入法检测发现其可提高细胞PKB活性,PI3-K的抑制剂LY294002预处理后再施加bFGF,可显著降低PKB的活性,两者相比差异显著[704.32±12.35pmol/(mg·min)vs1352.79±19.85pmol/(mg·min),P<0.05].bFGF刺激LoVo细胞时CyclinA蛋白和CyclinAmRNA表达均高于其他各施加因素组,而PI3-K的抑制剂LY294002组的CyclinA蛋白和CyclinAmRNA明显降低.结论:bFGF刺激大肠LoVo细胞后可通过依赖PI3-K/PKB途径调节CyclinA的转录活性,促进其表达,进而促进细胞增殖.; 周颖王桂玲; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子蛋白激酶B CYCLIN 大肠癌

应用共焦激光扫描显微镜研究细胞内FLNa与PAK1相互作用: 2004年; 梁彬周颖王桂玲刘芙蓉李家滨张福会李丰; 关键词：细胞观察 MCF-7乳腺癌细胞

NRDRiso酶cDNA的序列测定及生物信息学分析被引量：4: 2004年; 通过鉴定分析人肝组织中辅酶II依赖性视黄醇脱氢酶不同剪接体全长cDNA核苷酸序列与氨基酸序列的结构特征 ,为今后进一步研究体内维甲酸的代谢情况奠定基础。根据人、小鼠NRDR编码区的一致性序列 ,设计一对引物 ,应用RT PCR方法从人肝组织中得到一条 377bp的新的cDNA片段。采用RACE法得到了NRDR新亚型cDNA ,并以生物信息学软件分析其生物学特征。测序得知该cDNA长为 1 0 0 3bp ,以NADP dependentretinoldehydroge nase reductaseshortisoform(NRDRiso)登录GenBank。其读码框为 5 2 5bp ,拟编码 1; 杜晶刘戈飞王桂玲徐晓琳王博朱莉; 关键词：选择性剪接生物信息学

诱导体外培养的骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化被引量：2: 2005年; 选用Wistar大鼠分离骨髓间充质干细胞作体外培养及鉴定其表达抗原CD44、CDw90;采用10μmol/L5-氮胞苷诱导第1代的骨髓间充质干细胞,于诱导后2、4周进行免疫细胞化学反应检测α-横纹肌肌动蛋白、肌钙蛋白T。证实体外培养的第1代骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷诱导可分化为心肌样细胞,为指导体外诱导的心肌细胞应用于临床提供一定的理论依据和技术手段。; 王勃王桂玲白小涓宋今丹; 关键词：骨髓间充质干细胞心肌样细胞体外培养细胞移植

从动物组织提取高质量总RNA方法的改进被引量：24: 2003年; RNA提取技术是分子生物学研究中的重要实验技术。介绍一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA 的改进的方法,该法实用性强、重复性好。提取的RNA无DNA等污染物,其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要。利用改进后的方法提取牛组织的总RNA,研究了NRDR基因在牛组织中的表达分布。; 王桂玲刘戈飞黄东阳; 关键词：RNA提取动物组织分子生物学纯度

参与维甲酸合成代谢的视黄醇脱氢酶基因克隆和表达分析: 自然产生的视黄酸类对于体内的各种生理过程起着重要的作用。如胚胎发育、繁殖、免疫系统及视觉的维持等,特别是全反式维甲酸对于一些肿瘤有良好防癌、抗癌的作用。现有关维甲酸的研究多限于它的功能及作用机制方面。对于其体内的合成过程...; 王桂玲黄东阳; 关键词：维甲酸基因克隆和表达合成代谢醇脱氢酶; 文献传递

凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒载体的构建与鉴定被引量：1: 2008年; 目的构建并鉴定凋亡蛋白抑制因子Livin基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,以便进一步研究Livin的功能。方法针对已经筛选确定的Livin基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pGCL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pLV-shLivin慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLV-shLivin,pHelper1.0和pHelper2.03种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建Livin shRNA的慢病毒载体LV-shLivin。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为3×108TU/ML。结论成功构建Livin基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究Livin功能奠定基础。; 焦伊胜王永来张淑兰王桂玲; 关键词：细胞凋亡 LIVIN 慢病毒载体

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