高运东
- 作品数：154 被引量：542H指数：12
- 供职机构：山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：山东省农业重大应用技术创新课题山东省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立被引量：12
- 2009年
- 利用CsCl密度梯度离心纯化的牛轮状病毒作为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。用牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌制备的对照包被抗原与牛轮状病毒阴性和阳性血清反应,其结果均无交叉反应,说明该方法具有良好的特异性,可用于牛轮状病毒抗体的检测。
- 曹竹婷杨少华杨宏军高运东王长法简子健仲跻峰
- 关键词：牛轮状病毒间接ELISA正交实验
- 鲁西黄牛α干扰素基因的克隆及表达被引量：7
- 2007年
- 提取黄牛血液基因组DNA,PCR扩增α干扰素基因,重组到pET32a+表达载体中。测序结果表明,扩增片段含有498bp的ORF,可编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。构建原核表达载体pET32a+/BoIFN-α,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为40ku,表达量占菌体总蛋白的26.7%。结果从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,构建原核表达质粒,并实现了高效表达,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
- 张永红王长法杨少华高运东李爱芹王洪梅李景鹏仲跻峰
- 关键词：黄牛克隆
- 奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建
- 2009年
- 根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序,结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。该基因与原核表达载体pET32a+相连,转入BL21(DE3)感受态细胞。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/csgC。
- 王林锋杨宏军杨少华王长法高运东钟跻峰葛利江
- 关键词：大肠杆菌
- 通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法
- 本发明公开了一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法，是将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的打靶载体转染牛体细胞，通过同源重组获得替换整合素β6亚基基因的核供体细胞，将核供体...
- 何洪彬王洪梅武建明刘晓陈莉莉高运东仲跻峰
- 半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立
- 根据牛轮状病毒的VP7基因设计了一对可以检测牛轮状病毒G6血清型的引物,成功地检测了牛轮状病毒G6血清型..对扩增出来的G6血清型特异性片段的序列分析结果表明与NCDV株的同源性为94.2﹪.结果表明该实验方法准确快捷,...
- 栾婧婧高运东仲跻峰赵宏坤
- 关键词：牛轮状病毒RT-PCR检测VP7基因
- 口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立
- 2010年
- 【目的】构建口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1,并建立稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。【方法】采用RT-PCR技术从口蹄疫病毒材料中扩增出VP1基因,并将其连入慢病毒载体FG9中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,转染BHK-21细胞,96h后经流式细胞分选筛选GFP阳性细胞,细胞增殖后经WB检测VP1基因的表达。【结果】VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1测序正确,转染BHK-21细胞经流式细胞仪筛选的GFP阳性细胞后可稳定表达VP1基因。【结论】VP1基因重组慢病毒载体构建成功并获得了稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。
- 代文君王洪梅刘晓高运东于力王立群仲跻峰何洪彬
- 关键词：口蹄疫病毒VP1稳定细胞系
- 利用半套式PCR扩增16S rRNA基因检测牛和猪附红细胞体被引量：11
- 2006年
- 根据GenBank收录的猪和牛附红细胞体16SrRNA基因序列设计1对通用引物,在其上游引物内侧又设计1条分别针对猪和牛附红细胞体的特异性引物。以这4条引物对出现附红细胞体病典型症状及疑似症状的猪和牛的血样DNA进行半套式-PCR扩增。结果显示,该反应阳性率为58.3%,低于临床解剖和镜检结果。对该基因的序列测定结果进行分析,表明不同动物附红细胞体的16SrRNA基因同源性在80%以上。从该基因来看,附红细胞体与立克次氏体没有同源性,而与肺炎支原体和穿透支原体亲缘关系较近。
- 刘文强胡敬东梁成彪栾婧婧赵宏坤高运东仲跻峰
- 关键词：附红细胞体RRNA
- 中药黄芪多糖的免疫佐剂作用被引量：55
- 2006年
- 分别将黄芪多糖提取物、白油-吐温、氢氧化铝作为佐剂制备金黄色葡萄球菌灭活苗混合免疫家兔和奶牛,观察家兔免疫前后血清抗体滴度变化以及攻毒后白细胞数目变化和淋巴细胞百分比变化。对奶牛免疫后测其血清抗体和乳汁中体细胞数变化,结果注射疫苗后乳汁中体细胞数都有所下降,黄芪多糖组较其它组下降较快,幅度较大。黄芪多糖和抗原混合物免疫动物后未见不良反应,且抗原免疫血清抗体比氢氧化铝和白油-吐温佐剂组的抗体滴度增加快,幅度显著增高且抗体维持一个较高水平,而攻毒后家兔白细胞数和淋巴细胞数也较氢氧化铝和白油-吐温佐剂组增加较多。因此黄芪多糖是一种有效的佐剂。
- 林树乾张燕杨少华马广强高运东李国升赵宏坤仲跻蜂
- 关键词：黄芪多糖佐剂奶牛金黄色葡萄球菌
- 牛黑素皮质素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究被引量：16
- 2007年
- 牛MC1R基因不仅与毛色有关,而且与牛乳中乳蛋白的含量有关。利用PCR-RFLP和DNA测序技术分析了中国荷斯坦黑白花牛,中国荷斯坦红白花牛,鲁西黄牛和渤海黑牛共4个品种的MC1R基因。共检测出3种等位基因(ED,E+,e)。中国荷斯坦黑白花牛主要是ED和E+等位基因(ED=0.12、E+=0.80);渤海黑牛也主要是ED和E+等位基因(ED=0.52、E+=0.47);中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛大多为e等位基因(e=0.95)。中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛还存在E+/e基因型。由此推测ED和E+等位基因导致黑色素合成。另外发现牛MC1R基因编码区725处存在一重要的SNP(单核苷酸多态性)。
- 甘海云李建斌王洪梅高运东刘文浩李景鹏仲跻峰
- 关键词：MC1R基因
- 奶牛子宫内膜炎致病菌的16S rRNA序列鉴定被引量：11
- 2009年
- 【目的】对奶牛产后子宫内膜炎致病菌进行16S rRNA序列鉴定。【方法】从产后子宫内膜炎患牛子宫分泌物中分离致病菌,通过细菌培养、纯化、分离、革兰氏染色和生化试验进行初步鉴定。选取代表性菌株11株,利用细菌通用引物,通过PCR方法,对其16S rRNA基因的核苷酸序列进行扩增,将扩增产物与pMD19-T载体连接构建克隆载体,经PCR和双酶切鉴定正确后测序,测序结果与GenBank中已注册菌株的16S rRNA基因序列进行比对。【结果】共分离到致病菌株60株,有代表性的11株细菌归类为:SD01为琼氏不动杆菌,SD02为粪肠球菌,SD03为金黄色葡萄球菌,SD04为中间葡萄球菌,SD05为溶血葡萄球菌,SD06为鲁菲不动杆菌,SD07为无乳链球菌,SD08为芽孢杆菌,SD09为枯草芽孢杆菌,SD10为大肠杆菌,SD11为假单胞杆菌。【结论】通过国际公认的16S rRNA序列鉴定技术,准确鉴定出引起奶牛子宫内膜炎的致病菌种类,为临床治疗该病提供了理论依据。
- 张洪波杨宏军何洪彬杨少华王长法高运东仲跻峰葛利江
- 关键词：奶牛子宫内膜炎RRNA
