魏来
- 作品数：14 被引量：72H指数：5
- 供职机构：北京医科大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金会项目美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建T载体快速克隆丙型肝炎病毒5′端非编码区扩增产物被引量：1
- 1997年
- 为探讨自行构建Ｔ载体的简便方法，克隆丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５′端非编码区（５′ＮＣＲ）扩增产物，并为制备ＨＣＶ检测探针作准备。以ＳｍａⅠ消化质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋），酶切产物纯化后在仅含有脱氧腺苷酸的聚合酶链反应（ＰＣＲ）缓冲液中７０℃作用２小时，构建成Ｔ载体。根据ＰＣＲ扩增产物３′端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷酸原理，将扩增产物直接克隆入Ｔ载体。同时以ＳｍａⅠ消化的质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）与ＰＣＲ产物平端连接作为对照。限制性酶切长度多肽性分析，ＰＣＲ及ＤＮＡ序列测定等均证实克隆构建成功。ＡＴ克隆的连接效率约为平端连接的４２倍。以上结果表明，构建Ｔ载体经济、简便。ＡＴ克隆快速、有效。所构建的克隆可用作ＰＣＲ实验对照模板或制备探针。
- 魏来陶其敏
- 关键词：T载体克隆丙型肝炎病毒
- 中国人庚型肝炎病毒部分基因的克隆及序列分析被引量：5
- 1996年
- 目的：分析中国人血清中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ或ＧＢＶ－Ｃ）ＮＳ３区部分基因序列。方法：从个体供血者及肝硬化患者血清中，通过逆转录合成ｃＤＮＡ，设计特异性引物进行多聚酶链式聚合反应，将产物克隆于载体上，采用双脱氧核苷酸链终止法进行双向测序。结果：分离出的５株ＮＧＶ毒株的ＮＳ３区部分核苷酸序列之间同源性从８５％到９８％，与国外已发表的ＨＧＶ序列比较，同源性在７９％～９１％。推测的其编码氨基酸序列，５株之间１００％一致，与国外已报告的ＨＧＶ比较，同源性为９４．９％～１００％。结论：从中国人血清中分离出５株ＨＧＶ序列，其ＮＳ３区部分核苷酸存在着一定的变异性，但其编码的氨基酸非常保守。
- 陈红松王宇魏来王凤水陈志刘玉兰
- 关键词：庚型肝炎病毒基因克隆氨基酸序列
- 用PCR分析HCV－RNA NS5部分序列变异
- 1996年
- 用ＰＣＲ分析ＨＣＶ－ＲＮＡＮＳ５部分序列变异魏来，王宇，陈红松，陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ的序列分析是验证ＨＣＶ基因分型，确定新的型与亚型的基础￣［１］．经典的序列分析方法需经繁琐的分子...
- 魏来王宇陈红松陶其敏
- 关键词：丙型肝炎病毒RNA聚合酶链反应
- 丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应被引量：12
- 1996年
- 目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。
- 杜绍财魏来陶其敏冯百芳朱凌刘金祥
- 关键词：丙型肝炎病毒聚合酶链反应RNA
- 庚型肝炎病毒非结构基因(NS)5区部分序列的一级结构及其变异被引量：7
- 1997年
- 测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。
- 常锦红魏来陶其敏
- 关键词：庚型肝炎病毒基因NS5区
- 肝癌病人血清中庚型肝炎病毒非结构基因(NS)5区cDNA的序列分析被引量：5
- 1996年
- 通过逆转录-套式-聚合酶链反应,从2例肝癌患者血清中扩增出长994bp的庚型肝炎病毒(HGV)cDNA序列,聚合酶链反应(PCR)产物纯化后以双脱氧末端终止法从双向直接测定其序列。结果,所分离的2株HGV NS5区994bp核苷酸与国外已发表的3株HGV序列比较,同源性为87.21%～93.67%;2株间的同源性为93.92%。根据所测得的cDNA序列推导出其编码的313氨基酸序列,在氨基酸水平上本文报告的2株与国外发表的3株序列相比,同源性在94.25%～97.44%之间,2株之间为96.49%。在此区内发现有16个保守的脯氨酸残基及8个保守的半胱氨酸残基。结论:首次从肝癌患者血清中分离出2株HGV,其NS5区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守,与非肝癌患者血清中分离的HGV相比,变异不大。
- 魏来常锦红陶其敏
- 关键词：庚型肝炎病毒病毒基因病毒学
- 丙型肝炎病毒聚合酶链反应直接序列分析方法的建立及应用(英文)
- 1997年
- 目的探讨快速完成丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ（ＨＣＶｃＤＮＡ）序列分析的方法．方法将聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增与核酸序列分析技术相结合，以ＰＣＲ产物为测序模板，以ｒ３２ＰＡＴＰ标记ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ｔａｑＤＮＡ聚合酶直接测序．结果以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收ＰＣＲ产物制备测序模板可获得最佳测序效果．在需要测定大量标本时，为进一步简化操作步骤，可降低套式ＰＣＲ中第一次扩增反应的ｄＮＴＰ与引物浓度，以第一次ＰＣＲ扩增产物为模板，也可得到较好的测序结果。ＰＥＧ沉淀回收法不能去除非特异性ＰＣＲ产物，对ＰＣＲ直接测序有一定影响．采用此方法首次在一株ＨＣＶＮＳ５ｂ区发现一个新的缺失突变．结论ＰＣＲ直接序列分析是一种简便，快速，经济有效的核酸序列分析方法，适用于丙型肝炎病毒基因组的分析研究．
- 魏来王宇陈红松陶其敏
- 关键词：聚合酶链反应突变
- 慢性非甲-戊型肝炎患者血清中庚型肝炎病毒核酸的检测及部分核苷酸序列分析被引量：4
- 1997年
- 目的了解庚型肝炎病毒(HGV)在慢性非甲-戊型肝炎发病中的作用,并测定其非结构基因5(NS5)区部分核苷酸序列。方法以逆转录-套式-聚合酶链反应法检测 HGV RNA,并对阳性者血清中扩增出的994bp 长的 cDNA直接测序。结果 35例慢性非甲-戊型肝炎患者中1例血清 HGV RNA 阳性(2.9%)。该患者 HGV NS_5区部分核苷酸序列与美国株 PNF2161及 R10291的同源性分别为87.95%及89.23%。与西非株的同源性为93.50%。结论 HGV 为慢性非甲-戊型肝炎的病原之一,但可能不是主要病原。在北京所分离的一株 HGVNS_5区核苷酸序列与西非株较接近。
- 常锦红魏来杜绍财王豪孙焱陶其敏
- 关键词：庚型肝炎病毒聚合酶链反应核酸
- 逆转录套式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒被引量：7
- 1997年
- 目的建立敏感、特异的逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，以检测中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染。方法根据中国人感染ＨＧＶ者ＮＳ５区部分核苷酸序列分析结果，设计套式ＰＣＲ引物，用于ＨＧＶＲＮＡ的检测，并与用国外报道引物所作的一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检测结果进行比较。结果共检测标本１３３份。以国外报道引物作一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检出率分别为８．３％和１１．３％，作者建立的套式ＰＣＲ检出率为１８．０％，对部分ＰＣＲ产物进行序列分析证实为ＨＧＶ特异性基因。结论建立的方法可在中国人群中显著提高ＨＧＶＲＮＡ检出率。
- 常锦红魏来陶其敏杜绍财王豪孙焱
- 关键词：庚型肝炎病毒聚合酶链反应核苷酸序列
- 丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系被引量：4
- 1997年
- 以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。
- 魏来杜绍财王豪孙焱陶其敏冯百芳
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒变异干扰素丙型肝炎
