黄青云
- 作品数：44 被引量：178H指数：10
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡IL-18基因的克隆与序列测定被引量：22
- 2003年
- 根据Genbank发表的鸡IL-18基因序列,设计一对引物,提取鸡脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增和扩增产物的克隆、测序,获得了中国江西土鸡IL-18基因片段,其大小为597bp,与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18的基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。
- 温纳相黄青云陈金顶曹素芳
- 关键词：CDNA克隆白细胞介素-18
- 禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究被引量：19
- 2006年
- 将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H(OmpmH)的重组菌pGEX-ompmH／ BL21大量培养,在最佳诱导条件下诱导表达,表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化,得到Ompm H基因的原核表达产物,将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗,用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡,首免后每周采血检测抗体,二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1 进行攻击。结果显示,OmpmH具有良好的免疫原性,能诱导鸡体产生特异性抗体,可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击,免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。
- 曹素芳黄青云
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗
- 禽大肠杆菌O2、O78菌株外膜蛋白C基因扩增及序列分析
- 根据Genebank中人源大肠杆菌K-12外膜蛋白C基因(ompC)的核苷酸序列设计引物,从禽大肠杆菌O<,2>、O<,78>株及它们的融合双价弱毒菌株O<,2>、O<,78>(Nor<'r>Chl<'r>)中分别扩增得...
- 曹素芳黄青云张煜坤温纳相陈红英
- 关键词：禽大肠杆菌基因扩增
- 文献传递
- 禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因与鸡IL-18基因真核共表达载体的构建及表达被引量：5
- 2006年
- 根据鸡IL-18和真核质粒pcDNA 3的序列,设计1对特异性引物,以重组质粒pcDNA 3/IL-18为模板,扩增出具有完整真核表达结构的CM V-cIL-18-BGHpA片段。将此片段非定向插入重组表达质粒pcDNA 3/om pH中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证实成功构建了共表达禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因和鸡IL-18基因的重组表达质粒。将共表达质粒转染Cos7细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及W estern b lotting检测,证明了外膜蛋白H基因及鸡IL-18基因均获得了瞬时表达,为研究禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H的免疫原性和鸡IL-18在基因疫苗中的免疫调节作用奠定了基础。
- 曹素芳黄青云韩先干邓宪方
- 关键词：鸡IL-18WESTERNBLOTTING
- H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建
- 2008年
- 【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。
- 陈红英黄青云崔保安李新生赵丽管倩
- 关键词：H9亚型禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒基因工程疫苗
- 禽大肠杆菌耐药标记弱毒菌株O_2(Nor^r,Chl^s)和O_(78)(Chl^r,Nor^s)的培育被引量：17
- 1997年
- 选择最常见的禽致病性大肠杆菌Ｏ２和Ｏ７８菌株，分别以常用的抗菌药物氟哌酸和氯霉素诱导，培育成遗传性稳定的耐药标记弱毒菌株Ｏ２（Ｎｏｒｒ，Ｃｈｌｓ）和Ｏ７８（Ｃｈｌｒ，Ｎｏｒｓ）。
- 黄青云陈金顶任涛罗贤忠欧守杼
- 关键词：大肠杆菌耐药菌株弱毒菌株
- 禽大肠杆菌O_2、O_(78)菌株外膜蛋白A基因扩增及序列分析被引量：5
- 2004年
- 根据Genbank中大肠杆菌K 12外膜蛋白A基因的核苷酸序列设计引物,从禽大肠杆菌O2、O78及它们的融合株O2,78(ChlrNorr)中分别扩增得到外膜蛋白A基因(ompA),进行序列测定及分析发现3个菌株的ompA均由2276nt组成,核苷酸序列完全相同,只有一个大的开放性阅读框(ORF),长1041bp,编码由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A(pro OmpA),前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成,相对分子质量为37000.其氨基酸序列也完全相同.从基因水平上证明了禽大肠杆菌O2和O78菌株存在相同的外膜蛋白A抗原.
- 曹素芳黄青云温纳相陈红英
- 关键词：大肠杆菌O2O78菌株外膜蛋白
- 禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因克隆及序列分析被引量：3
- 2006年
- 根据已发表的外膜蛋白基因核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽巴氏杆菌5:AC48-1株的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框架(ORF),编码352个氨基酸,前20个氨基酸组成信号肽。与已知的15个血清型及疫苗株CU的ompH的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,核苷酸同源性在51.5%～98.7%之间,氨基酸同源性在39.3%～98.7%之间。氨基酸多序列比较显示,血清型特异性抗原表位位于60～80位和200～220位氨基酸处。
- 曹素芳黄青云韩先干陈红英邓宪方
- 关键词：禽巴氏杆菌外膜蛋白同源性
- 鸡IL-18基因的克隆与序列测定
- IL—18在抗微生物感染和肿瘤免疫治疗等方面具有广阔的应用前景,在医学上迅速成为研究热点,但在兽医学方面国外仅见极少关于鸡IL—18的研究报告,国内则尚未见到有关报告。为了研究鸡IL—18的基因表达、生物学活性及其应用,...
- 温纳相黄青云陈金顶曹素芳
- 文献传递
- 鹅IL-18基因的克隆和原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 参考GenBank中鸡、火鸡和鸭IL-18基因序列,设计了1对特异引物,以提取的鹅脾细胞总RNA为模板,应用RT-PCR扩增、克隆鹅IL-18基因中间的333bp序列。序列分析结果表明,其与鸭IL-18基因对应序列相似性最高,达99%。参考鸭IL-18全基因序列设计上、下游引物各3条,以梯度PCR探索扩增、克隆鹅IL-18全基因。以上述策略成功扩增、克隆了3个广东地方杂交品种鹅的IL-18基因。序列分析表明,这3个杂交品种鹅的IL-18基因序列一致,长642bp,含一个603bp的ORF,编码200个氨基酸,分子质量为23.2ku。ORFN端的30个氨基酸为前导序列,其余170个氨基酸为功能蛋白序列。在GenBank中注册了第一条鹅的IL-18基因序列,登录号为EF159728。随后,构建了鹅IL-18基因ORF的重组原核表达质粒pET-GIL-18,经诱导表达、纯化获得重组鹅IL-18融合蛋白,并以其制备了兔抗重组鹅IL-18多克隆抗体。
- 郑海华韩先干尹会方周蕾柯艳坤黄青云
- 关键词：IL-18基因克隆原核表达多克隆抗体
