王雯雯
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Npu DnaE内含肽构建及其对293T细胞高效反式剪接活性分析
- 2013年
- 目的构建Npu DnaE内含肽,探讨Npu DnaE内含肽是否在293T细胞中具备高效反式剪接活性。方法制备融合基因Vn-NDn-myc和NDc-Vc,插入pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体,构建质粒。转染293T细胞,荧光显微镜下观察目的蛋白Venus是否形成。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术进一步印证。结果构建的质粒经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T后可见共转染细胞组出现明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明高量目的蛋白Venus形成。结论成功构建Npu DnaE内含肽,其能在293T细胞中发挥反式剪接的生物学功能,并具有高效的剪接效率及功能目的蛋白形成率。
- 张矫崔文静马祥敏王雯雯王欣
- 关键词：NPU内含肽蛋白质反式剪接
- 含串联多拷贝DNA序列的质粒载体的构建被引量：2
- 2013年
- 目的探索简便快速的构建含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体的方法。方法通过PCR的方法获得不同拷贝数的DNA序列的片段,以与载体同源重组的方式将PCR片段与载体重组,得到重组质粒。最后经BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定来确定所构建质粒中插入重复DNA序列的拷贝数。结果经酶切鉴定分析,所得质粒分别可以切出不同大小的片段,而且片段大小与所插入的重复DNA序列拷贝数是相对应的。结论成功构建了含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体,为向质粒载体中插入多拷贝DNA序列提供了简便实用的新方法。
- 崔文静张矫马祥敏王雯雯王欣
- 关键词：质粒聚合酶链反应
- 双启动子shRNA干扰的协同效应
- 2013年
- 目的构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应。方法通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1。设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照。分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照。将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞。比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况。结果成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体。实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强。结论含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应。
- 崔文静张矫马祥敏王雯雯王欣
- 关键词：双启动子RNA干扰
- 荧光蛋白Venus载体构建及在哺乳动物细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建黄色荧光蛋白Venus重组载体,并观察其在哺乳动物细胞中表达情况。方法将Venus克隆至限制性内切酶处理的pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,转染293T细胞,荧光显微镜下观察结果。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术印证荧光蛋白Venus表达情况。结果重组载体经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T细胞后可见明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明荧光蛋白Venus高量表达。结论成功构建了Venus重组载体,荧光蛋白Venus在哺乳动物细胞中高表达,此为分子与细胞生物学提供了一种重要的研究工具。
- 张矫崔文静马祥敏王雯雯王欣
- 关键词：转染
