甘艺
- 作品数：9 被引量：5H指数：1
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 微流路精子分离器优选技术对精子质量的影响被引量：3
- 2014年
- 为了体外受精分离出优质活力精子,筛选出有效的优质精子的分离方法。采集小鼠附睾中精液,稀释后利用微流路精子分离器(MFSS)分离精子,检测及分析分离后的精液质量。结果表明:精液样本通过MFSS分离前后,精子活力由43.12%提高到87.18%(P<0.05);直线速度由161.20μm/s提高到248.24μm/s(P<0.05)。与上游法相比,经微流路精子分离器优选精子后,精子质量得到较大的改善。
- 李雁冰李井春贺显晶孙蕊甘艺舟桥弘晃
- 关键词：精子质量小鼠
- 籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。
- 张虹亮计红耿仁德薛琳琳杨焕民王建发司鸿飞王慧甘艺
- 关键词：RNA干扰颗粒细胞籽鹅
- 雌激素β受体在比格犬发情周期中变化情况的相关研究
- <正>为揭示雌性比格犬下丘脑-垂体-性腺轴中ERβ基因在发情期与间情期的的表达差异情况,进而研究ERβ基因在比格犬发情期与间情期发挥的生物学功能。本实验分别从6只发情期比格犬和6只间情期比格犬体内提取下丘脑、垂体、卵巢和...
- 钟睿甘艺赵彦斌刘冰孙兆增朱宇旌栾新红胡仲明张勇
- 文献传递
- 比格犬ERβ剪切异构体蛋白定位及其RNAi慢病毒载体的构建及筛选
- 比格犬广泛应用于国家二类以上新药研发，但比格犬在繁殖方面出现了不发情、发情不孕、休情期长、窝产仔数减少等现象，为了探讨该犬繁殖性能降低的机理，本研究对ERβ剪切异构体的蛋白定位及其生物学功能进行研究。通过构建ERβ剪切异...
- 甘艺
- 关键词：RNA干涉慢病毒蛋白定位
- 文献传递
- 比格犬ERβ_(1293)基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位被引量：1
- 2014年
- 目的观察比格犬Myc标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。
- 甘艺钟睿任秀梅赵彦斌胡仲明刘冰陈旖孙兆增曾林杨焕民
- 关键词：比格犬蛋白定位
- 荧光定量RCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异
- 2014年
- 目的对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上,因此分别取处于发情期和间情期的比格犬,提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA,反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。
- 钟睿甘艺任秀梅许琴赵彦斌刘冰孙兆增朱宇旌栾新红胡仲明张勇曾林
- 关键词：发情期间情期比格犬
- 比格犬ERβ剪切异构体ERβ419沉默表达载体的构建及筛选
- 2014年
- 目的构建最有效的慢病毒介导RNAi干扰序列,未来将应用于比格犬ERβ419的未知生物学功能的探索。方法模拟比格犬ERβ419靶细胞筛选针对目的基因mRNA设计的最佳干扰序列实验,通过qRT-PCR和Western Blot技术筛选最佳沉默表达载体序列。结果qRT-PCR结果显示,ERβ419-shRNA1(P<0.01)和ERβ419-shRNA3(P<0.01)的差异表达极显著,Western Blot结果与qRT-PCR结果一致,ERβ419-shRNA3的干扰效果最佳。结论 ERβ419-shRNA3最有效地抑制了目的基因的表达,未来将应用于探索比格犬ERβ419未知生物学功能对比格犬生殖系统影响的研究,并进而预防和治疗比格犬繁殖机能障碍性疾病。
- 甘艺赵彦斌陈福军孙兆增胡仲明刘冰杨焕民曾林
- 关键词：基因沉默
- 比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选被引量：1
- 2014年
- 目的筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。
- 钟睿甘艺赵彦斌刘冰孙兆增朱宇旌栾新红胡仲明张勇曾林
- 关键词：比格犬细胞
- 荧光定量PCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异
- <正>本试验目的是对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机理提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,...
- 钟睿甘艺陈福军任秀梅许琴赵彦斌刘冰孙兆增朱宇旌栾新红胡仲明张勇曾林
- 文献传递
