申莉莉
- 作品数：87 被引量：271H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
- 发文基金：中国烟草总公司科技项目云南省烟草专卖局(公司)科技项目四川省烟草专卖局(公司)科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程理学医药卫生更多>>
- 一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析被引量：16
- 2015年
- 【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD600值变化测定其对温度、p H、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1,噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1—2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目(Caudovirales),肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为ds DNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10—100 k D,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围(31—317 kb);生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏
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- 关键词：青枯雷尔氏菌噬菌体生物学特性
- 一株烟草普通花叶病毒生防蒙氏假单胞菌菌株
- 本发明公开了一株烟草普通花叶病毒生防蒙氏假单胞菌菌株(Pseudomonas monteilii)，菌株代号为4A1，该菌株于2011年9月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC ...
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- 解淀粉芽孢杆菌By33产活性蛋白抑制TMV体内复制作用研究
- 以解淀粉芽孢杆菌By33分泌蛋白为试验对象,在Nc89上接种TMV6h后,接种叶片悬浮于活性蛋白不同稀释浓度及无菌水中48h后,取出做摩擦接种三生烟试验和ELISA检测病毒含量试验。结果表明:活性蛋白稀释10倍、25倍、...
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- 关键词：解淀粉芽孢杆菌活性蛋白酶联免疫病毒复制
- 文献传递
- 黏质沙雷氏菌次生代谢物对TMV的抑制机理被引量：11
- 2014年
- 【目的】分离、纯化和鉴定黏质沙雷氏菌2A2次生代谢物中具有抑制TMV侵染力的活性成分,明确其对TMV的抑制机理。【方法】通过病毒生物学测定,确定黏质沙雷氏菌2A2菌株对TMV的抑制效率。为明确黏质沙雷氏菌2A2发酵液次生代谢物中抑制TMV侵染力的活性成分,通过TLC和硅胶柱层析对其发酵液进行了分离纯化,获得主要的次生代谢物,通过局部枯斑法测定各代谢物的生物学活性,筛选可显著抑制TMV侵染活性的物质,经NMR分析,确定其成分结构,进而确定物质组分。为进一步揭示代谢物对TMV的抑制机理,利用透射电子显微镜探索代谢物对TMV粒体形态的影响,TMV粒体与代谢物甲醇溶液混合30 min后,于透射电子显微镜下观察TMV粒体形态。同时,用代谢物甲醇溶液喷施处理寄主下部3片叶,共设5个处理:处理Ⅰ,喷施代谢物24 h后,接种TMV;处理Ⅱ,代谢物与等体积TMV汁液混合30 min后,接种叶片;处理Ⅲ,先接种TMV,24 h后喷施代谢物;处理Ⅳ,宁南霉素(50μL·mL-1)与等体积TMV汁液混合30 min后,接种下部叶3片做阳性对照;处理Ⅴ,无菌水与等体积TMV汁液混合30 min后,接种下部叶3片做空白对照。分别在次生代谢物诱导和TMV侵染后1、3、5、7、9 d,取未经任何处理的上部叶,TRIZOL法快速提取总RNA并反转录cDNA,利用real-time RT-PCR分析样品PR基因和TMV的RNA相对表达量,进而明确代谢物处理寄主对寄主PR基因表达的影响和对TMV在寄主体内复制增殖的抑制作用。【结果】黏质沙雷氏菌2A2菌株对TMV具有显著的抑制作用。对其发酵液进行分离纯化,获得3种主要代谢物,通过局部枯斑法测定,编号为BJH-2的代谢物可显著抑制TMV的侵染活性,经NMR分析,确定了该代谢物为灵菌红素(prodigiosin)。透射电子显微镜结果显示灵菌红素可显著破坏TMV粒体,使TMV典型的杆状病毒粒体降解断裂成排列紊乱的短杆状。real-time RT-PCR结果表明,
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- 关键词：灵菌红素黏质沙雷氏菌烟草花叶病毒拮抗作用
- 一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌菌株
- 本发明公开了一株烟草普通花叶病毒生防恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)菌株，菌株代号为A3，该菌株于2011年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.52...
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- 裂解性噬菌体对烟草青枯雷尔氏菌的控制及对土壤微生物种群多的影响
- 由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的烟草青枯病是烟草上主要的病害之一,裂解性噬菌体(Ralstonia phagy)∈RS-1分自中国农业科学院烟草研究所即墨试验农场烟草青枯病病圃土壤...
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- 关键词：烟草青枯雷尔氏菌噬菌体
- 一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌菌株
- 本发明公开了一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌(Alcaligenes？faecalis)菌株，菌株代号为L1，该菌株于2014年10月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC？...
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- 文献传递
- 一种线虫综合治理的微生物菌肥
- 本发明涉及一种线虫综合治理的微生物菌肥，包括：发酵基质、第一微生物菌种、第二微生物菌种，基层；所述基层包括相互交织的经线与纬线，所述经线与所述纬线为若干根纱线并合后加捻形成，所述经线与所述纬线交织处形成合围空间；所述发酵...
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- 文献传递
- 贵州烟草上一株PVY坏死株系全序列测定与分析被引量：7
- 2011年
- 2007年从贵州省贵定烟区采集一株呈典型马铃薯Y病毒坏死株系(Potato virus Y vein necrosis strain,PVYN)的烟草病毒病样,经PVY鉴别寄主枸杞(Lycium barbarum L.)单斑分离纯化后,于枯斑三生烟(Samsun NN)株上保存,得到PVY分离物Guiding-3。以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计了3对PVY特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR及序列测定,发现所测得的PVY分离物Guiding-3全长基因组序列(NCBI登录号为HM590405)包括9 699个碱基,整条序列仅包含一个由9 186个碱基组成的开放读码框(ORF),编码一条包含3 061个氨基酸的多聚蛋白。利用MEGA软件对所测得的PVY全序列与GenBank中已有的PVY全序列进行系统进化分析,发现Guiding-3分离物的序列与PVYN、PVYNTN、PVYN:O、PVYO、PVYNNP株系的一致性分别为98%、97%、94%、92%、85%,在已有的PVY株系中,Guiding-3分离物与PVYN株系具有较高的进化亲缘关系。另外,还对PVY的分子变异进行了初步讨论。
- 张帅杨金广王凤龙钱玉梅申莉莉王永
- 关键词：烟草马铃薯Y病毒全序列分析
- 一株烟草普通花叶病毒生防蒙氏假单胞菌菌株
- 本发明公开了一株烟草普通花叶病毒生防蒙氏假单胞菌菌株(Pseudomonas monteilii)，菌株代号为4A1，该菌株于2011年9月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC ...
- 王凤龙钱玉梅杨金广申莉莉翟熙伦陈德鑫孙惠青王新伟战徊旭
- 文献传递
