石松
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 双拷贝人α型心钠素基因的组建及大肠杆菌分泌型克隆与表达
- 1992年
- 将单拷贝人α心钠素基因3′端用Ban Ⅱ酶解除去包括终止密码在内的36个碱基对,代之以人工合成的含Glu-Lys-Phe-Glu连接片段与另一单拷贝人α心钠素基因的5′端串连成编码60肽的双拷贝心钠素基因,克隆于大肠杆菌分泌型表达载体pIN-Ⅲ-OmpA_2质粒中,表达生成60肽的双拷贝人α型心钠素衍生物,在信号肽的作用下分泌至胞膜间质并自动切割为60肽的外源基因产物。分子量约8K的表达产物用分子筛或超滤膜分离后再经HPLC纯化,表达产物具有明显的心钠素放免活性和舒张血管活性。
- 周春燕崔瑛琦张丽霞马康涛王建平曾桂超张迺蘅汤健石松王启松
- 关键词：重组DNA分泌型表达
- 人α—心钠素基因的串联
- 1990年
- 将α-心钠素（α-hANF）基因克隆到PUC18载体上,经菌落原位杂交筛选鉴定出有α-hANF基因的克隆株。用BamⅡ和BamH Ⅰ消化并分离纯化得到含5′端部分α-hANF基因及PUC18载体的F1片段。用DNA合成仪合成3′端部分α-hANF基因的F2接头,在基因3′端加入谷氨酸的密码子GAA,作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位置,并去掉基因3′端的终止信号TGA,将原BamH Ⅰ接头改为EcoR Ⅰ接头。最后,将F1和F2片段与α-hANF基因酶促连接后进行转化,通过双酶切筛选出含有双拷贝α-hANF基因的转化子,并用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。
- 石松张晓东张福徽闵永洁王启松
- 关键词：心钠素基因
- 全文增补中
