董家新
- 作品数：21 被引量：82H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CD_（34）抗原基因在痘苗病毒系统中的表达
- 1995年
- 从ｐＵＣ１８－３４重组质粒双酶切分离得到编码人ＣＤ＿（３４）抗原的全长ｃＤＮＡ片段，将此基因插入痘苗病毒载体ＳｍａＩ位点，构建了重组质粒ＮＳＡ１１７５－３４。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，将质粒ｐＪＳＡ１１７５－３４导入已被野生痘苗病毒感染的ＴＫ￣－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人ＣＤ＿（３４）抗原基因的重组痘苗病毒。经活细胞免疫荧光（ＩＦＡ）和碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）检测表明，重组痘苗病毒能够特异地表达人ＣＤ＿（３４）抗原。人ＣＤ＿（３４）抗原基因的表达，为探讨ＣＤ＿（３４）抗原结构和功能以及研制ＣＤ＿（３４）单克隆抗体奠定了基础。
- 舒翠玲汲言山沈倍奋董家新孙英勋赖春宁孙启鸿于鸣胡美茹
- 关键词：CD34抗原基因表达
- sgp130 cDNA在痘苗病毒载体系统中的表达
- 1999年
- ｇｐ１３０是一种分子量为１３０ｋＤ的细胞膜糖蛋白，是ＩＬ－６等多种细胞因子共用的信号传递分子。本研究将含ｇｐ１３０胞外区全长的可溶性片段的基因（ｓｇｐ１３０ｃＤＮＡ）构建到痘苗病毒载体中，并与野生型痘苗病毒在ＴＫ－１４３细胞中发生同源重组，用ＢｕｄＲ和Ｘ－ｇａｌ双重选择，得到带有人ｓｇｐ１３０的重组痘苗病毒（Ｖｓｇｐ１３０）。采用ＩＤＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法证实：感染Ｖｓｇｐ１３０的ＴＫ－１４３细胞上清中有较强的ｓｇｐ１３０表达，表达产物分子量为１００ｋＤ左右。
- 李晓军董家新倪长源倪长源沈倍奋
- 关键词：GP130痘苗病毒基因表达CDNA
- 利用15肽随机肽库确定抗TNF单抗表位的研究被引量：12
- 1999年
- 利用抗ＴＮＦ的Ｔ５单抗作为筛选配基，对经ＤＮＡ碱基组成分析证明具有良好随机性的１５肽库进行亲和筛选．经过三轮筛选后，以硝酸纤维素膜斑点印迹法观察到良好的富集效果．由第三轮挑选出的３１个克隆进行ＤＮＡ测序，结果推出的优势克隆的短肽为ＣＹＲＲＰＡＧＧＬＰＧＩＣＳＡ等，竞争性ＥＬＩＳＡ实验证明带有以上短肽的噬菌体与ＴＮＦ能竞争性地与Ｔ５单抗结合．
- 杨子义董家新王鑫姚志建沈倍奋
- 关键词：噬菌体随机肽库单克隆抗体表位TNF
- 可溶性gp130和gp130反义核酸对IL-6诱导的靶基因启动子活性的影响被引量：1
- 1997年
- ｇｐ１３０是ＩＬ－６信号转导子，ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合物。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，在肝癌细胞ＨｅｐＧ２中建立了检测ＩＬ－６诱导基因表达强弱的方法，并观察了含胞外区全长（５９７个氨基酸）及氨基端３０４个氨基酸残基的ｇｐ１３０突变体，以及ｇｐ１３０反义核酸对ＩＬ－６生物学效应的影响。证明两个突变体和反义核酸均拮抗ＩＬ－６信号，为进一步研究ＩＬ－６受体拮抗剂奠定了基础。
- 倪长源沈倍奋黎燕董家新赖春宁任蕴芳
- 关键词：白细胞介素-6GP130
- 抗人gp130分子单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2000年
- 目的 gp130(亦称CD130)可与许多细胞因子受体(IL 6R,IL 11R,OSMR,LIFR,CNTFR和CT 1R)组成受体复合物,并在这类细胞因子的信号转导中起着重要的作用。方法以痘苗病毒为载体构建获得的可溶性CD130(sCD130)为免疫原 ,通过细胞融合的方法 ,得到4株稳定分泌抗CD130单克隆抗体(mAb) (L2,L4a,L4b和L5)的杂交瘤细胞株。结果本组mAb对靶细胞具有识别特异性 ,不但可识别相对分子质量 (Mr)为98000的sCD130分子,也可识别Mr为130000的膜表达型CD130分子(mCD130)。另外 ,mAb还可与CD130分子形成免疫复合物 ,用于免疫沉淀CD130分子 ,但这组抗体中仅mAbL2可部分组断IL 6对靶细胞的增殖作用。结论成功地研制了抗人gp130分子mAb。
- 黎燕李小军贺永怀赖春宁倪长源胡美茹董家新沈倍奋
- 关键词：单克隆抗体
- 可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果
- 1997年
- 目的 :构建可溶性白细胞介素 6受体 ( IL- 6R) β亚基 ( sgp130 )重组痘苗病毒 ,感染动物细胞使其表达 sgp130 ,用重组病毒免疫动物产生特异性抗 sgp130抗体。 方法 :将 sgp130基因导入痘苗病毒载体 p JSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在 TK-143细胞中发生同源重组 ,用 Bud R和 X- gal双重选择 ,得到带有人 sgp130的重组病毒 ( Vsgp130 )。 结果 :采用 IDA和 Western Blotting法证实 ,感染 Vsgp130的 TK-143细胞上清中有较强的 sgp130表达 ,表达产物分子量为 10 0 0 0 0左右。用重组病毒免疫家兔和 Balb/c小鼠 ,可刺激抗体产生。 结论 :sgp130在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗 sgp130多克隆抗体的产生为进一步研究 IL- 6等细胞因子信号传导机理及研制抗
- 李晓军董家新倪长源黎燕沈倍奋
- 关键词：GP130痘苗病毒
- 肿瘤细胞系IL-6Rα/IL-6Rβ基因表达的生物学效应被引量：7
- 1997年
- 应用非同位素原位杂交技术及反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ），检测了１１种肿瘤细胞系上ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６ＲβｍＲＮＡ的表达情况，同时应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测了ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６Ｒβ蛋白的表达。结果表明，１１种细胞系中有６种细胞系检测到ＩＬ－６ＲαｍＲＮＡ的表达，有５种细胞系有ＩＬ－６ＲβｍＲ－ＮＡ的表达，有两种细胞系中均没有表达，在蛋白检测中得到同样的结果。生物学活性检测发现，在细胞系中只有当ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６Ｒβ亚基同时在细胞中表达，而且表达量具有一定合适比例时，才能对一定浓度的ＩＬ－６刺激产生明显的生物学效应。
- 赖春宁黎燕倪长源董家新沈倍奋
- 关键词：肿瘤细胞系生物学效应
- 人白介素6受体基因在痘苗病毒载体系统中的表达被引量：6
- 1995年
- 人ＩＬ－６受体是一个在各种细胞上广泛表达的跨膜糖蛋白分子，是ＩＬ－６发挥细胞效应所必需的。本文通过将ＩＬ－６ＲｃＤＮＡ重组到痘苗病毒的ＴＫ基因中构建成重组痘苗病毒ＶＩＬ６Ｒ。细胞原位杂交和ＡＰＡＡＰ染色结果表明，感染ＶＩＬ６Ｒ后的Ｖｅｒｏ细胞中，ＩＬ－６Ｒ在ｍＲＮＡ和蛋白水平上均呈现较强的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析所表达的分子量为８０ｋＤ，表明所表达的产物是糖基化的。ＩＬ－６结合试验表明，表达的膜ＩＬ－６Ｒ能够结合ｒＩＬ－６，说明它是有功能的。利用ＶＩＬ６Ｒ免疫小鼠后，能够刺激较强的抗体产生。从而为进一步研究ＩＬ－６Ｒ的信号传导和构效关系提供了基础。
- 董家新沈倍奋任蕴芳朱诚阮力
- 关键词：白细胞介素6受体痘苗病毒基因表达
- E－选择素cDNA克隆和表达被引量：6
- 1996年
- 从内皮细胞总ＲＮＡ中用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出Ｅ－选择素ｃＤＮＡ全长编码区，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，构建了重组质粒ｐＵＣ１８／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ，对此质粒进行了酶切及ＤＮＡ序列分析鉴定。将Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎｃＤＮＡ插入到天坛株痘苗病毒载体ＳｍａＩ位点，构建了表达质粒ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ转染ＴＫ－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ的重组痘苗病毒。经活细胞荧光染色和ＡＰＡＭ检测，重组痘苗病毒能有效地表达人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ。
- 胡美茹汲言山舒翠玲马民慧董家新孙涛沈倍奋
- 关键词：E-选择素粘附分子痘苗病毒基因克隆CDNA
- 抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定被引量：5
- 1997年
- 利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗人ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６和１５１／Ｈ１２。两者分别识别ＩＬ－６Ｒ胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫印迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而都不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。
- 董家新孔英勋于鸣任蕴芳沈倍奋
- 关键词：白细胞介素6受体单克隆抗体
