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组织蛋白酶G通过增加胶质瘤干细胞表面MHC-Ⅰ表达提高胶质瘤对T细胞治疗的敏感性被引量：4: 2020年; 目的探讨组织蛋白酶G(CatG)提高T细胞治疗胶质瘤效果的机制。方法(1)收集胶质瘤数据库中397例胶质瘤患者的临床资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Pearson相关性分析胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2微球蛋白(β2M)mRNA表达的相关性。(2)从胶质母细胞瘤中分离培养胶质瘤干细胞(GSC)387和GSC3565,分别分化培养获得胶质瘤分化细胞(DGC)387和DGC3565。取GSC387细胞,分为CatG组、CatG抑制物组,分别用0.1μg/μL重组人类白细胞抗原(HLA)-A^*02:01和HLA-B^*15:01与4 ng/μL CatG、1O μmol/L CatG抑制物共培养10 min,应用托马斯亮蓝染色检测细胞HLA-A^*02:01和HLA-B^*15:01的表达,应用Western blotting检测细胞主要组织相容性复合体(MHC)-I、MHC-DR蛋白的表达。(3)取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为4组(CatG组、CatG抑制组、空白抗体1组,空白抗体2组),分别加人4 ng/μL CatG,10μmol/L CatG抑制物、空白抗体1、空白抗体2处理24 h,采用流式细胞仪检测细胞HLA-ABC的表达。⑷取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为CatG组和CatG抑制组,釆用荧光素酶实验检测CatG对T、自然杀伤细胞杀伤作用的影响。结果(1)CTSG mRNA高表达组患者的生存率高于CTSG mRNA低表达组,β2M mRNA低表达组患者的生存率高于β2M mRNA高表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2MmRNA的表达呈负相关关系(r=-9.160,P=0.000),(2)托马斯亮蓝染色检测显示:与CatG抑制物组比较,CatG组细胞HLA-A^*02:01和HLA-B^*15:01的表达增加。Western blotting检测显示:与CatG抑制物组比较,CatG组细胞MHC-I的表达增加,MHC-DR的α和β链降低。(3)流式细胞仪检测显示:CatG组GSC387、GSC3565细胞HLA-ABC的表达高于CatG抑制物组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)荧光素酶实验显示:与CatG抑制物组比较,CatG组T细胞对GSC细胞的杀伤比例增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CatG可�; 李锡清赵尊兰孔存权赵黎明张玉薇韩双印; 关键词：神经胶质瘤

红色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立被引量：5: 2012年; 背景与目的:活体动物体内光学成像(optical in vivo imaging)主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶(luciferase,Luc)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记,利用一套非常灵敏的光学检测仪器,能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为,生物发光成像具有高的灵敏度和特异性,同时生物发光信号可用于精确定量,而荧光成像具有方便、便宜、直观、标记靶点多样和易于被大多数研究人员接受的优点。本研究基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和Luc双报告基因转基因小鼠(即RL转基因小鼠),将这两种技术融为一体。方法:制备携带RFP和Luc基因(简写RL基因)的慢病毒,然后将携带RL基因的慢病毒注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定,并获得RL转基因小鼠。结果:移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎125枚给6只假孕母鼠,其中4只假孕母鼠怀孕,共生仔鼠20只;利用小动物活体成像仪检测RFP和Luc表达,在蛋白水平证实20只F0代中,3只高表达RFP和Luc;DNA水平检测证实,3只RFP和Luc阳性的小鼠基因组中确实整合有外源转基因RL,预示基因型鉴定结果很好验证了小动物活体成像仪筛选和鉴定结果。此外,RL转基因首建鼠基因组中整合的RL转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达。RL转基因小鼠主要脏器均可见红色荧光和Luc信号,但不同脏器间荧光和Luc强度有差异。结论:成功制备RL双报告基因转基因小鼠,为后续研究干细胞在肿瘤发生、发展和转移中的作用和造血重构等提供双报告基因标记的各种移植用供体细胞,并对此供体细胞及其在体内衍生的细胞进行灵敏的非损伤、实时可视�; 张余琴林晓琳贾俊双谢饶英樊全荣赵尊兰杨升高飞姚开泰肖东; 关键词：红色荧光蛋白荧光素酶肿瘤干细胞转基因小鼠

携带Fluc和ZsGreen双报告基因小鼠iPS细胞系的建立被引量：2: 2013年; 背景与目的:诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)在修复受损组织器官和治疗人类疾病方面已展示了良好的应用前景,但iPS细胞具有形成畸胎瘤的作用,这是其安全应用于临床的巨大障碍之一。为此本研究拟利用慢病毒体外感染的方法,建立携带萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,ZsGreen)双报告基因的小鼠iPS细胞系,为活体动态监测畸胎瘤形成、定植和形成畸胎瘤所需最小细胞剂量等提供实验基础。方法:构建含Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。以pLH2BmRFP质粒为模板,PCR扩增获得Fluc基因片段,将其克隆至利用BamHⅠ酶切的pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen质粒中,挑选一个阳性克隆质粒进行测序,最终获得携带双报告基因的慢病毒载体pEF1a-Fluc-IRES-ZsGreen(pELZG)。采用脂质体介导的瞬时转染生产携带Fluc和ZsGreen基因的病毒,收集病毒上清,并感染iPS细胞,数天后荧光显微镜下观察是否有绿色荧光的iPS细胞克隆,不断挑取ZsGreen阳性的iPS细胞克隆以进一步纯化。将标记好的iPS细胞移植入裸鼠皮下,观察成瘤情况。结果:pELZG载体分别经XbaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ单酶切,得到的片段大小分别为10.005、3.282和6.723 kb,2.441、3.401和6.604 kb,预示成功构建了Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。利用其生产的病毒上清成功感染iPS细胞,经过不断的纯化,最终获得含稳定表达Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系。将标记好的iPS细胞植入裸鼠皮下后,观察到畸胎瘤的形成。结论:成功建立了携带Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系,为相关后续研究打下了良好的基础。标记后的iPS细胞对畸胎瘤的形成和发展具有很好的示踪作用。; 樊全荣史俊文贾俊双高飞张余琴赵尊兰姚开泰肖东; 关键词：萤火虫荧光素酶 293T细胞诱导性多潜能干细胞畸胎瘤

稳定过表达miR-26a肝癌细胞株的建立被引量：3: 2013年; 目的建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株。方法以CTE049质粒为模板,PCR扩增miR-26a序列418bp,片段两侧添加XbaⅠ和BamHⅠ酶切位点,In-Fusion克隆至pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen中,次日挑选单菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体命名为pLVT-miR26a。获得pLVT-miR26a后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒感染小鼠肝癌细胞(Hep1-6)、人肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、Sk-Hep-1、HepG2-luc),以建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞系;qRT-PCR检测所建立肝癌细胞系中miR26a的表达水平。结果测序和酶切证实成功构建了pLVT-miR26a,按标准程序生产的携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒上清成功感染小鼠及人肝癌细胞。结论成功建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株,为相关后续研究打下了良好基础。; 赵文淘赵尊兰史俊文王胜纯林晓琳李静姚开泰肖东; 关键词：慢病毒载体肝癌

HOTAIR通过E-cadherin对胶质瘤侵袭和转移的影响研究被引量：2: 2017年; 目的观察HOTAIR对胶质瘤细胞侵袭和转移能力的影响。方法使用q-PCR从临床标本中检测HOTAIR与E-cadherin的关系,体外常规培养SWO-38和U251细胞,过表达HOTAIR后使用划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测细胞中E-cadherin蛋白的表达。结果 q-PCR胶质瘤组织中HOTAIR高表达组中E-cadherin表达的均值较低,较HOTAIR低表达组低,差异有统计学意义(P<0.05);在SWO-38和U251细胞中过表达HOTAIR后Western blotting检测发现E-cadherin表达减少,划痕实验显示过表达HOTAIR后细胞迁移能力增强。结论 HOTAIR可增加胶质瘤的侵袭和转移,可能与其降低E-cadherin蛋白的表达有关。; 李锡清赵尊兰刘冬玲刘明月马宁李明周云; 关键词：胶质瘤

表皮生长因子对非小细胞肺癌A549及H23细胞生长和增殖的影响被引量：2: 2015年; 目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激非小细胞肺癌A549细胞和H23细胞后对细胞增殖产生的影响。方法非小细胞肺癌A549细胞和H23细胞,选择最佳EGF作用浓度和作用时间,并分为A549-EGF组、A549对照组和H23-EGF组、H23对照组,A549-EGF组和H23-EGF组细胞采用EGF进行处理,A549对照组和H23对照组细胞不进行处理,4组采用克隆形成实验观察细胞体外生长速率,采用细胞增殖实验观察细胞克隆数,并进行比较。结果 50μg/L EGF处理24h为最佳作用浓度和作用时间;A549-EGF组和H23-EGF组细胞体外增殖速率(0.48±0.07、0.39±0.04)和克隆形成数(182.1±18.5、228.8±15.7)明显高于A549对照组(0.21±0.02,61.2±3.5)和H23对照组(0.30±0.02,63.0±1.8)(P<0.05)。结论 EGF刺激可使A549和H23细胞的增殖能力和克隆形成能力增加,增加肿瘤细胞的恶性程度。; 李锡清赵尊兰刘明月马宁马宁杨兴龙; 关键词：非小细胞肺癌表皮生长因子 BETA-CATENIN NANOG 细胞增殖

探讨K1f4在鼻咽癌增殖、EMT和侵袭转移中的调控作用: 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）是我国南方和东南亚常见的恶性肿瘤之一,是指发生在鼻咽粘膜的恶性肿瘤。其发病与环境、饮食、遗传以及EBV（Epstein Barr Virus）感染等因素...; 赵尊兰; 关键词：NPC KLF4 细胞增殖 MET; 文献传递

恶病质对信迪利单抗免疫治疗非小细胞肺癌疗效的影响被引量：5: 2021年; 目的探讨恶病质对免疫检查点抑制剂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效的影响。方法回顾性分析2019—2021年河南省人民医院62例晚期NSCLC患者接受抗程序性死亡受体1(PD-1)治疗的疗效,分别于免疫治疗前、免疫治疗2个周期后评估患者恶病质情况。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank,多因素分析采用Cox回归模型,相关分析采用Spearman相关性分析。结果免疫治疗2个周期后,恶病质组和对照组患者的骨骼肌截面面积(PMMA)分别为(14.10±4.09)cm2和(11.66±3.22)cm2,差异有统计学意义(P=0.001)。前白蛋白水平和体重与恶病质有关(P<0.05)。全组62例患者6个月和1年生存率分别为58.6%和42.5%。对照组患者无进展生存时间(PFS)高于恶病质组(分别为7.6和3.8个月,P=0.006),高表达程序性死亡受体配体1(PD-L1)患者PFS(7.1个月)长于低表达PD-L1者(3.8个月,P=0.009);恶病质组患者总生存时间(OS)低于对照组(分别为6.3和18.2个月,P=0.006);PD-L1高表达患者OS(14.5个月)高于低表达者(1个月,P=0.038)。前白蛋白水平、PD-L1表达水平和PMMA变化率与患者的总生存有关(均P<0.05),前白蛋白水平和PMMA变化率为总生存的独立影响因素(均P<0.05)。PMMA和前白蛋白水平呈负相关(r=-0.0038,P<0.05)。结论在抗PD-1的免疫检测点抑制剂治疗中恶病质的发生对患者的预后有负面影响。; 李锡清赵尊兰候梦琳崔勇霞韩双印付芳芳; 关键词：免疫治疗恶病质

社区全科医生在晚期肿瘤患者舒缓治疗中的作用: 赵尊兰王留义

探讨Klf4在鼻咽癌增殖、EMT和侵袭转移中的调控作用: 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国南方和东南亚常见的恶性肿瘤之一，是指发生在鼻咽粘膜的恶性肿瘤。其发病与环境、饮食、遗传以及EBV(Epstein Barr Virus)感染等因素有...; 赵尊兰; 关键词：细胞增殖鼻咽癌动物模型; 文献传递

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