郑海军
- 作品数：5 被引量：39H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人白细胞介素-29的研究进展被引量：12
- 2012年
- 白细胞介素-29(Interleukin-29,IL-29)是近年发现的一种细胞因子,又称为干扰素λ1(Interferonλ1,IFNλ1),其与IL-28A和IL-28B同属IFNλ家族(IFNλs)。IL-29通过结合特殊的异二聚体受体复合物起始信号的转导和发挥生物学作用,其与Ⅰ型IFN共享相同的Jak-STAT信号传导途径,促进一组共同基因的表达。因此,IL-29表现出一些与Ⅰ型IFN相同的性质,如抗病毒、抗增殖、体内抗肿瘤以及免疫调节等生物学活性。IL-29的特异受体复合物是由特有的结合亚基IL-28R1和辅助亚基IL-10R2组成。表达IL-28R1的细胞谱系较少,因此,IL-29作用的靶细胞有限,主要包括外皮细胞和肝细胞。这些性质提示,IL-29作为药物的副作用可能比Ⅰ型IFN更小,有望成为临床疗效高且副作用小的新一代干扰素药物。本文就近年来有关IL-29生物学效应的研究进展作一综述。
- 郑海军陈伟
- 关键词：IL-29细胞因子生物学活性
- 人白细胞介素-29基因的克隆及真核表达被引量：6
- 2012年
- 目的克隆人白细胞介素-29(Interleukin-29,IL-29)基因并进行真核表达。方法提取人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,经逆转录合成cDNA,以其为模板,PCR扩增IL-29基因,插入真核表达载体pPIC9K,构建重组真核表达质粒pPIC9K-29,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果扩增的IL-29基因序列与GenBank中登录的序列(NM_172140)相同;重组表达质粒pPIC9K-29经双酶切及测序证实构建正确;表达产物经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量分别约30 000和27 000的特异蛋白条带,经Western blot分析,均可与羊抗人IL-29多抗发生特异性反应。结论已克隆并在毕赤酵母GS115中表达了人IL-29,为进一步研究其生物学活性及其应用奠定了基础。
- 陈伟于明磊郑海军郁心邬敏辰吴静
- 关键词：基因克隆真核细胞基因表达
- 天然N-末端人白细胞介素-29成熟肽在毕赤酵母中表达条件的优化被引量：4
- 2013年
- 目的优化天然N-末端人白细胞介素-29(Human interleukin-29,hIL-29)成熟肽在毕赤酵母中的表达条件,高效表达天然N-末端hIL-29成熟肽。方法采用单因素试验和L(934)正交试验,分析摇瓶发酵条件下甲醇添加量、起始pH值、诱导时间及诱导温度对毕赤酵母工程菌GS115/hIL-29发酵液A450值的影响;用5 L发酵罐初步探索工程菌株的高密度发酵策略。结果影响重组毕赤酵母摇瓶发酵液A450值的因素重要性依次为:诱导温度>起始pH值>甲醇添加量>诱导时间,最佳发酵条件为:起始pH值7.5、甲醇添加量1.5%、26℃诱导60 h,在此条件下,发酵液的A450值达1.72;高密度发酵策略为:pH 7.5,甲醇与溶氧反相偶联,26℃诱导12 h,在此条件下,目的蛋白的表达量明显高于摇瓶水平;高密度发酵12、24 h表达的蛋白与羊抗人IL-29多抗的反应强度明显高于摇瓶发酵表达的蛋白。结论优化了工程菌株GS115/hIL-29摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵条件,实现了重组天然N-末端hIL-29成熟肽在毕赤酵母GS115中的高效表达,为其进一步的中试放大工艺奠定了基础。
- 郑海军陆源陈伟蔡鲜徐望邬敏辰吴静
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵
- 刀额新对虾精氨酸激酶基因的克隆与真核表达被引量：5
- 2012年
- 目的克隆刀额新对虾精氨酸激酶的基因并进行真核表达。方法提取刀额新对虾总RNA,经逆转录获得精氨酸激酶的cDNA,插入质粒pPIC9K构建重组真核表达质粒,转化毕赤酵母进行诱导表达,用SDS-PAGE和斑点免疫分析鉴定重组表达产物。结果逆转录获得的精氨酸激酶cDNA全长1071bp,DNA序列分析结果与GenBank收录的序列(EU497674)比较,同源性为99.5%;重组表达质粒转化酵母的表达产物经SDS-PAGE分析,其相对分子质量约40kD;表达产物与虾过敏者血清呈较强反应性。结论克隆得到刀额新对虾的精氨酸激酶基因并获得其重组真核表达产物,为进一步研制虾类食物过敏症的相关检测试剂提供了试验依据。
- 陈伟尤春霞郑海军刘群英邬敏辰吴静
- 关键词：对虾精氨酸激酶基因真核表达
- 人白细胞介素-29的生物信息学分析被引量：24
- 2013年
- 目的利用生物信息学技术对人白细胞介素-29(Human nterleukin-29,IL-29)进行分析,为定点突变hIL-29,以提高其生物学活性奠定理论基础。方法利用生物信息学技术分析克隆得到的hIL-29基因,预测hIL-29基因编码蛋白的理化性质、结构、功能及可能影响其生物学活性的关键氨基酸位点;预测其三维结构,并与IFNλ3的晶体结构进行比对;对检索到的9个物种的IL-29基因同源序列进行比对,并构建系统进化树。结果 hIL-29基因编码蛋白含200个氨基酸残基,其N-末端19个氨基酸为信号肽,成熟肽的相对分子质量为20 018,理论等电点为9.08,肽链中含一个由胞内向胞外的跨膜结构域;hIL-29的空间构象由6个α螺旋(A～F)和无规则卷曲组成,螺旋A、B和F可能是hIL-29与特异性受体结合而发挥生物学效应的活性部位,A、F螺旋中有4个氨基酸残基可能是影响其生物学活性的关键氨基酸位点;系统进化分析显示,hIL-29与狗、猫、大熊猫、马、野猪、黑猩猩、长臂猿的IL-29具有较高的同源性,处于同一个大分枝,而人、黑猩猩、长臂猿的IL-29处于同一个小分枝,在系统进化树中的距离最近。结论关键位点氨基酸的差异可能对hIL-29的生物学活性影响较大,可作为对hIL-29进行分子改造的突变位点。本研究为后续进行hIL-29的定向改构及其构效关系等的深入研究奠定了理论基础。
- 郑海军朱荣葛春蕾蔡鲜徐望陈伟陆源
- 关键词：生物信息学突变
