钟良英
- 作品数：15 被引量：95H指数：6
- 供职机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广州地区23例Hb Westmead异常血红蛋白复合β-地中海贫血患者的血液学和基因型分析被引量：14
- 2016年
- 目的分析广州地区异常血红蛋白Westmead（hemoglobin Westmead，HbWS）复合β-地中海贫血患者的血液学与基因型特征，以指导临床诊断和遗传咨询。方法收集血液学分析、血红蛋白分析和基因检测确诊的HbWS复合B地中海贫血的患者23例，男9例，女14例，年龄1～53岁。用XE4000i血细胞分析仪进行血细胞分析，高效液相色谱法（high performance liqui dchromatography，HPLC）进行Hb、HbA2和HbF定量检测，用Gap—PCR技术检测缺失型α-地贫，并用反向斑点杂交技术检测伊地贫和非缺失型α-地贫基因。结果在23例患者中有12人有贫血，其中9例为轻度贫血，3例为中度贫血，血红蛋白最低68g／L，平均红细胞体积和平均红细胞血红蛋白含量均低于正常，血红蛋白分析HbA2均大于3．5％。检出基因型αwsα／αα，βivs-II-654/βN5例（21．7％），αwsα／αα，βCD41-42/4例（17．4％），αwsα／αα，βCD17／βN5例（21．7％），αwsα／αα，βCD28／βn4例（17．4％），αwsα／αα，βCD71-72/βN1例（4．3％），αwsα／αα，βcd71-72／βN1例（4．3％），αwsα／αα，βCD27-28／βN1例（4．3％）,αwsα／αα，βCD41-42/βCD171例（4．3％）-α3.7／αwsα，βCD17/βN1例（4．3％）。结论HbWS杂合子合并G地中海贫血突变时，不同的基因型组合有不同的表型。对这类复合地中海贫血仅用血红蛋白电泳容易误诊和漏诊，需通过基因型分析确诊。
- 颜绵生淦鑫刘敏黄彬钟良英
- 关键词：HBΒ-地中海贫血基因型
- 高频振荡通气联合骨髓间充质干细胞移植对急性呼吸窘迫综合征保护作用的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的 探讨高频振荡通气（HFOV）联合骨髓间充质干细胞（MSCs）对内毒素诱发急性呼吸窘迫综合征（ARDS）模型兔的保护作用.方法 家兔34只,2只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余32只随机分为四组：ARDS组、HFOV组、MSCs移植组和HFOV＋ MSCs移植组（每组各8只）.全骨髓培养法体外培养兔MSCs,传至第3代备用.通过向气管内滴注内毒素建立ARDS模型.分别在干预后2、6及24 h时间点,取动脉血行血气分析.24 h后处死动物,取左肺上叶称质量后,计算湿质量/干质量比值（W/D）；右肺用10 mL生理盐水灌洗,收集灌洗液,检测中性粒细胞数目及蛋白含量；左肺下叶取标本,行病理学检查.结果 HFOV＋ MSCs组PaO2在三个时间点均明显高于ARDS组（P＜0.05）,在24h时间点分别与MSCs组及HFOV组比较差异也均有统计学意义（P＜0.05）；HFOV＋ MSCs组PaCO2在24 h时间点明显低于其余三组（P＜0.05）.与其余三组分别比较,HFOV＋ MSCs组24 h时间点W/D、支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目及蛋白含量均明显降低（P＜0.05）.肺组织病理学提示,HFOV组及MSCs组的损伤程度明显减轻,HFOV＋ MSCs组损伤最轻.结论 HFOV联合MSCs能明显改善内毒素诱发ARDS模型兔的PaO2和PaCO2,明显减轻炎症反应及肺损伤,优于单一方法,具有协同作用.
- 彭珊珊淦鑫钟良英郭光华
- HKαα合并东南亚型缺失地中海贫血的基因型与血液学分析被引量：19
- 2018年
- 目的分析同时出现正常条带α2、右缺失（－α3.7）和东南亚缺失（－－SEA）患者基因型和血液学的关系，为临床诊断和遗传咨询提供指导。方法回顾性分析2011年8月至2016年8月来中山大学附属第一医院分子诊断室进行地贫基因检测的16 080例患者的临床资料，挑选出同时出现正常条带α2、右缺失（－α3.7）和东南亚缺失（－－SEA）的患者14例（男4例，女9例，胎儿1例）。用XE 4000i血细胞分析仪进行血细胞分析，采用高效液相色谱法（HPLC）定量检测血红蛋白A0（HbA0）、血红蛋白A2（HbA2）和血红蛋白F（HbF），用跨越断裂点多聚酶链反应（Gap－PCR）技术检测常见的3种缺失型α－地贫，并用反向斑点杂交技术检测17种常见的β－地贫和3种常见的非缺失型α－地贫基因。用两轮巢氏PCR检测HKαα型α－珠蛋白生成性贫血。结果16 080份样本中，共检测出HKαα合并东南亚型缺失14例（HKαα/－－SEA），检出率为0.087%，且存在1个HKαα/－－SEA家系，发现其中1例为罕见的HKαα/－－SEA合并βIVS－Ⅱ－654/βN胎儿病例。HKαα/－－SEA组的平均红细胞体积（MCV）为（69.54±5.92）fl，平均红细胞血红蛋白含量（MCH）为（22.11±2.22）pg,血红蛋白（Hb）为（117.64±18.14）g/L。与正常组相比，HKαα/－－SEA组的MCV、MCH、Hb明显降低（P〈0.05）；与α－地贫杂合子组（－－SEA/αα）相比，MCH、Hb值差异无统计学意义（P〉0.05）；与血红蛋白H（HbH）病（－α3.7/－－SEA）组比，HKαα/－－SEA组的MCV、MCH、Hb明显较高，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论两轮巢式PCR可鉴定HKαα/－－SEA，血液学主要表现为小细胞低色素性贫血，与－－SEA /αα表型类似，但比HbH病轻，能够给临床提供准确的产前诊断和遗传咨询策略。
- 钟良英汪芳陈培松谢英俊谭俊宇刘敏黄彬林文彬
- 关键词：Α地中海贫血等位基因基因型血液学
- HFOV联合MSCs移植对急性肺损伤炎症反应的影响
- 淦鑫彭珊珊钟良英郭光华
- HFOV 联合 MSCs 移植对急性肺损伤后肺纤维化的影响
- 2014年
- 目的：探讨高频振荡通气（HFOV）联合骨髓间充质干细胞（MSCs）对内毒素诱发急性肺损伤模型兔肺纤维化的影响。方法家兔34只，2只用于制备MSCs，剩余32只随机分为4组：肺损伤组、HFOV组、MSCs移植组和HFOV＋MSCs移植组，每组8只。全骨髓培养法体外培养兔MSCs，传至第3代备用。通过向气管内滴注内毒素建立急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征模型。分别在干预后2周时间点，采用酸解法测定肺组织羟脯氨酸含量；采用ELISA法检测各组血清和支气管肺泡灌洗液中转化生长因子-β（ TGF-β）及单核细胞趋化蛋白-1（ MCP-1）的表达；取右肺一叶标本，行病理学检查。结果 MSCs组中肺组织羟脯氨酸含量、血清及支气管肺泡灌洗液中TGF-β、MCP-1的表达水平，分别与肺损伤组比较差异有统计学意义（P＜0．05），而单一HFOV组与肺损伤组比较差异均无统计学意义（P＞0．05）；联合HFOV＋MSCs组中肺组织羟脯氨酸含量、血清及支气管肺泡灌洗液中 TGF -β、MCP -1的表达水平最低，分别与单一HFOV组和MSCs组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。肺组织病理学提示，MSCs组的纤维化程度减轻，HFOV＋MSCs组程度最轻。结论 HFOV联合MSCs可减少急性肺损伤兔肺组织羟脯氨酸含量，降低TGF-β、MCP-1的表达，减轻急性肺损伤后纤维化程度，优于单一方法，具有协同作用。
- 彭珊珊淦鑫钟良英郭光华
- 下一代测序法检测乙型肝炎病毒YMDD突变的方法学建立及性能评价被引量：1
- 2019年
- 目的建立乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法,并对此方法进行性能评价。方法采用离心柱法提取血清标本中的DNA,设计引物对乙型肝炎病毒P基因区扩增并靶向捕获,通过下一代测序技术对捕获的DNA进行检测,利用生物信息学分析软件系统对检测结果进行分析,得到基因突变结果,建立下一代测序用于乙型肝炎病毒YMDD突变的检测方法。收集慢性乙型肝炎患者血清样本共229例,采用下一代测序法和Sanger测序法同时检测YMDD基因突变,评价下一代测序法的检测性能。选取5例基因突变阳性的样本(包含不同基因突变型别)、2例基因突变阴性样本,采用下一代测序法对所选样本进行重复检测,评价该方法的重复性。结果建立了乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序检测方法。对229份临床样本的检测中,2种测序方法均检测到74例(74/229,32.31%)YMDD突变,其中下一代测序法检测到44例(44/229,19.21%)rtM204V突变,25例(25/229,10.92%)rtM204I突变,5例(5/229,2.18%)rtM204V/I混合突变。Sanger测序法检测到47例(47/229,20.52%)rtM204V突变、25例(25/229,10.92%)rtM204I突变和2例(2/229,0.87%)rtM204V/I混合突变。下一代测序法检测到3例Sanger测序法漏检的rtM204V/I混合突变。与Sanger测序法相比,下一代测序法的灵敏度、特异度和准确度均为100%,突变类别完全符合率为95.95%(71/74),部分符合率为4.05%(3/74)。2种方法的一致性(κ)为0.97(P<0.01)。经重复性试验检测,下一代测序法的检测结果均一致,重复性符合率为100%。结论本研究建立的乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法灵敏度高,特异性好,重复性好,准确性高,比Sanger测序法更灵敏,能检测到更多的混合突变,为乙型肝炎病毒耐药基因检测提供了新的手段。
- 余学高邓间开陈耀铭陈培松何小洪钟良英黄彬
- 关键词：YMDD
- 高频振荡通气联合骨髓间充质干细胞移植对急性肺损伤炎症反应的影响被引量：6
- 2015年
- 目的探讨高频振荡通气(HFOV)联合骨髓间充质干细胞(MSCs)对内毒素诱发急性肺损伤模型兔炎症反应的影响。方法家兔34只,2只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余32只随机分为4组:肺损伤组、HFOV组、MSCs移植组和HFOV+MSCs移植组,每组8只。全骨髓培养法体外培养兔MSC,传至第3代备用。通过向气管内滴注内毒素建立急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征模型。分别在干预后24 h时间点,采用ELISA法检测各组肺组织匀浆中IL-lβ、TNF-α和IL-10含量;采用RT-PCR法检测各组肺组织IL-lβ、TNF-α和IL-10m RNA的表达。结果 HFOV组和MSCs组,肺组织IL-1β与TNF-α水平及其m RNA表达降低,而IL-10水平及其m RNA表达升高,分别与肺损伤组相比,差异有统计学意义(P<0.05);联合HFOV+MSCs组中肺组织IL-1β与TNF-α水平及其m RNA表达最低,IL-10水平及其m RNA表达最高,分别与单一HFOV组和MSCs组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HFOV联合MSCs能显著降低ALI/ARDS体内促炎因子IL-1β和TNF-α的水平及其m RNA的表达,升高抗炎因子IL-10的水平及其m RNA的表达,对ALI/ARDS具有抗炎保护作用,优于单一方法,具有协同作用。
- 彭珊珊淦鑫钟良英郭光华
- 关键词：高频振荡通气骨髓间充质干细胞急性肺损伤炎症因子
- 广州地区1571例胎儿地中海贫血产前基因型与血液学特征分析被引量：21
- 2016年
- 目的：研究胎儿地中海贫血（地贫）的发生率及基因型分布，了解胎儿中、重型地贫的检出率，探讨地贫胎儿的血液学指标特点。方法：收集2011年8月到2015年8月在我院分子诊断室进行产前地贫基因检测的病例共1571例，其中根据孕周不同分为绒毛（9-11周）143例、羊水（16-20周）1064例和脐血（20-38周）364例。用XE4000i血细胞分析仪对脐血进行血液学指标（MCV、MCH、Hb）检测。用Gap—PCR技术检测缺失型α-地贫，反向斑点杂交技术（RDB—PCR）检测β-地贫和非缺失型地贫，可疑标本通过测序确定。结果：在1571例胎儿中，检测出正常胎儿621例（39．53％），异常胎儿950例（60．47％），其中α-地贫641例（40．80％），β-地贫258例（16．42％），α复合β地贫51例（3．25％）。检出中、重型α-地贫胎儿149例（9．48％），中、重型β-地贫胎儿44例（2．80％），总中、重型地贫的检出率高达12．29％。正常胎儿组的MCV为（113．25±9．20）fl，MCH为（37．71±2．70）Pg，Hb为（128．42±22．25）g／L，与正常胎儿组相比，α-地贫1纯合子组（-SEA／-SEA）、α-地贫1杂合子组（-SEA／αα）和HbH病的MCV、MCH、Hb明显降低（P〈0．05），静止型地贫组（-α3．7／αα、-α4．2／αα）和α复合β地贫的MCV、MCH明显降低（P〈0．05），非缺失型α-地贫组的MCH、Hb明显降低（P〈0．05），β-地贫各项血液学指标结果与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：α-地贫胎儿血液学指征变化明显，而β-地贫在胎儿期表现隐匿，因此对胎儿进行产前地贫基因检测是非常有必要的，尤其双方都是同型α-地贫或β-地贫夫妇，这样可有效地预防中、重型地贫胎儿的出生，控制地贫的发生率。不同基因型的胎儿血液学指标有不同特点，检测胎儿血象对于患病胎儿的产前筛查及产前诊断有一定的补充意�
- 赵芳何小洪程静淦鑫曹梓杰刘敏周焕娟钟良英
- 关键词：地中海贫血胎儿基因型
- 广东地区汉族产前人群δ地贫基因的突变谱与血液学分析被引量：3
- 2017年
- 目的研究中国广东地区汉族产前人群中δ地贫球蛋白基因（HBD）的突变类型以及各类型突变频率，并统计分析各类型突变的血液学变化，以丰富人群8．地贫基因突变图谱。方法收集2012年1月至2015年5月在我院进行产前地中海贫血筛查的样本7580例，筛选出符合条件的33例患者，男10例，女23例，年龄22—48岁。用XE4000i血细胞分析仪进行血细胞分析，高效液相色谱法（HPLC）进行血红蛋白（Hb）、血红蛋白A2（HbA2）和血红蛋白F（HbF）定量检测。提取基因组DNA后进行PCR扩增、基因测序方法检测目标样本基因突变。结果33例患者中检出21例存在8-地贫突变，突变率约为0．277％（21／7580）。检测出7种不同的突变类型。其中4种为已知的突变类型，包括12例基因型为-77（T〉C）[HBDc．-127（T〉C）]（57．14％），4例为-30（T〉C）[HBDc．-80（T〉C）]（19．05％），1例为eodon10（-G）（HBDc．31delG）（4．76％），1例为HBDc．244C〉T；另外新发现3种突变，1例为HBDc．22—24delGAG（4．76％），1例为HBDc．347C〉T（4．76％），1例为HBDc．349C〉G（4．76％）。结论8地贫基因突变类型多样，-77（T〉C）是广东地区汉族产前人群最常见的8球蛋白基因突变。本研究报道的3例新突变丰富了8球蛋白基因的突变谱，应重视产前人群的8球蛋白基因检测，对产前咨询和诊断有重要意义。
- 钟良英谢英俊陈培松冯一苇刘敏黄彬何小洪淦鑫
- 关键词：球蛋白类突变产前诊断
- pGL3-BMP2荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的扩增BMP2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统。方法在所设计的上下游引物的5’端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DNA中扩增BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列。首先将扩增的目标片段与PGEM-T载体连接,连接产物转化DH5α感受态细菌,经蓝白斑筛选出的阳性克隆通过电泳、酶切鉴定后进行测序验证是否为插入的目标序列,测序正确后提取重组质粒。利用限制性内切酶BamHⅠ同时酶切插入目标序列的质粒和pGL3-promoter载体,将酶切完全的目标序列与线性pGL3-promoter空质粒载体在Solution I快速连接酶的作用下进行连接反应,构建目标序列的真核表达载体。结果经过酶切和测序证实含有4.8kb长的目标序列的分子克隆和真核表达载体构建成功。结论实验成功克隆了BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列,并构建了pGL3-promoter-enhancer真核表达载体,为进一步验证该序列可能的调控功能奠定了基础。
- 钟良英丁红珂刘敏黄彬何小洪陈培松
