单晓峰
- 作品数：2 被引量：29H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立被引量：23
- 2014年
- 【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和ic ELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备m Ab,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水m Ab,建立ic ELISA标准曲线,对ic ELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·m L-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;ic ELISA方法的包被原浓度为1μg·m L-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(Ga MIg G-HRP)1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性
- 李新朋姜金庆钱爱东王自良范国英单晓峰康元环李艺
- 关键词：环丙沙星氟喹诺酮类药物杂交瘤细胞株间接竞争ELISA
- 淡水鱼水霉病及防治的研究进展被引量：6
- 2016年
- 近年来,水霉病给世界淡水养殖业带来了破坏性影响。引起该病的病原菌主要是水霉菌,隶属于卵菌纲。水霉菌流行范围广、危害性强,在土壤、淡水环境中广泛分布。水霉菌细胞壁无几丁质,不同于真菌,其菌丝体发达,纤细而分支繁多,并可深入机体内吸收营养;具有无性生殖和有性生殖两种生殖方式,生活史相对简单,包括游动孢子、孢囊与孢子囊等阶段。抗生素等应用导致耐药性的产生,所以一些新型药物被开发出来。文章概述了水霉病的分类状况、病原菌、临床症状及防治等方面的进展,旨在为深入研究该病提供理论参考。
- 毕彦晖勾长龙朱世馨张宏伟王羽单晓峰高云航
- 关键词：淡水鱼水霉病卵菌中草药
