侯凤艳
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划军队“十二五”重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 活性氧与细胞核共染影响因素的实验研究
- 2016年
- 目的利用二氯荧光黄二乙酸酯(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针和4',6'-二脒基-2-苯基吲哚(4',6'-diamidino-2-phenylindole,DAPI)探讨影响活性氧(reactive oxidative species,ROS)和细胞核共染的因素,以优化最佳的研究方案。方法以RAW 264.7细胞株为研究对象,首先采用不同浓度的多聚甲醛分别固定10、30 min,1、2、4 h,进行ROS和DAPI检测;再用不同的固定试剂分别在ROS检测前和后固定,检测ROS荧光强弱;将DAPI在DCFH-DA探针加入前12、4、2、1 h,20 min加入和两者同时加入,检测DAPI染色情况;最后,DAPI在ROS检测前12 h加入,以不加DAPI组为对照,分别用LPS和H_2O_2刺激产生ROS并检测,计算其荧光数和平均荧光强度,利用SPSS18.0软件进行t检验分析。结果不同固定浓度、固定试剂、固定顺序的结果均表明,固定虽然会增强DAPI的染色,但同时会减弱ROS的荧光强度;活细胞DAPI染色时,随着染色时间的延长,核着色强度和均匀度都更好;DAPI染色12 h后检测ROS,对ROS的荧光数和平均荧光强度都没有统计学影响(P>0.05)。结论 DCFH-DA探针法检测ROS荧光时不能与细胞固定连用;DAPI在DCFH-DA探针孵育前12 h加入,并不影响ROS荧光的产生和检测,该研究方案可有效实现ROS与DAPI的共染。
- 罗莉侯凤艳严军梁华平
- 关键词：活性氧细胞核影响因素
- 胍丁胺对酵母多糖诱导急性腹膜炎性损伤及中性粒细胞浸润的影响
- 目的 观察胍丁胺(AGM)对酵母多糖(ZYM)诱导的腹膜炎症反应及中性粒细胞浸润的影响.方法 将48只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组[12只,腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)1 mg/mL]、模型组...
- 邓佳范霞陈浩侯凤艳梁华平
- 胍丁胺对创伤小鼠过度炎症反应及脾细胞增殖的影响被引量：7
- 2015年
- 目的 探讨胍丁胺对创伤小鼠炎症反应及脾细胞免疫功能的影响。方法 将48只成年雄性C57BId6小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组（双后肢骨折＋失血35％）和胍丁胺组（创伤／失血＋胍丁胺200mg／kg），每组16只。各组分别于制模后3h、24h处死8只小鼠，采集血、脾脏及肝脏。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和肝组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-6、IL-1β）含量，用全自动生化分析仪测定血清天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）及乳酸脱氢酶（LOI~）水平，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测刀豆蛋白A（ConA）刺激的脾细胞增殖反应，用ELISA法检测ConA刺激脾细胞分泌γ-干扰素（IFN-γ）与IL-2的能力。结果 与对照组比较，模型组创伤后3h血清TNF—α、IL-6、IL-1β水平均显著升高[TNF—α（ng／L）：145．38±31．50比23．06±11．14；IL-6（ng/L）：496．94±50．76比47．13±17．47；IL-18（ng／L）：321．31±43．02比29．25±16．24；均P〈O．01]，胍丁胺治疗能明显抑制创伤诱导的血清炎症因子TNF-α（ng／L：111．56±25．47比145．38±31．50）、IL-6（ng／L：412．56±44．33比496．94±50．76）、IL-1β（ng/L：273．38±45．25比321．31±43．02）的升高（P〈0．05或P〈0．01）；创伤后24h，模型组和胍丁胺组血清炎症因子均恢复至对照组水平。创伤后3h，各组肝组织TNF—α、IL-6水平无明显差异；创伤后24h，模型组肝组织TNF-β、IL-6水平均较对照组显著升高[TNF-α（ng／mg）：32．93±4．90比26．58±2．33；IL-6（ng／mg）：11．20±1．66比8．38±0．89；均P〈0．01]，胍丁胺治疗能抑制创伤引起的肝组织TNF—α（ng／mg：28．92±3．16比32．93±4．90）、IL-6（ng／mg：9．03±1．28比11．20±1．66）水平升高（P〈0．05和P〈O．01）。创伤后24h，模型组和胍丁胺组血清AST、ALT、LDH均较
- 刘政侯凤艳靳贺肖雅范霞杨雪严军梁华平
- 关键词：胍丁胺创伤炎症反应免疫调节
- 胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制。方法 RAW264.7细胞经LPS(10μg/m L)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预。分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组。药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达。结果与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P<0.05)。AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化。结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤。
- 侯凤艳罗莉朱俊宇康文渊范霞柴鉴深卢中秋梁华平
- 关键词：胍丁胺RAW264.7细胞氧化应激NRF2
- 三种大鼠急性肺损伤模型的比较被引量：11
- 2016年
- 目的比较腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、气管滴注LPS和盲肠结扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)诱导的3种急性肺损伤模型的差异。方法 70只成年SD大鼠随机分为7组:正常组、腹腔注射LPS组(10mg/kg,LPS-IP组)及其假手术组(SHAM-1);气管滴注LPS组(5mg/kg,LPS-IT组)及其假手术组(SHAM-2);盲肠结扎穿刺组(CLP)及其假手术组(SHAM-3)。于造模后24h,收集各组大鼠的动脉血用于血气分析,并通过二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白测定法、血细胞计数板以及瑞氏-姬姆萨染色分别对肺泡灌洗液中的蛋白含量、细胞总数和类别进行统计,同时利用湿干比和苏木精-伊红(HE)染色法来评价肺组织的损伤程度。结果 LPS-IT组和LPS-IP组的肺灌洗液总蛋白浓度、总细胞数均高于正常组和假手术组(P<0.05),湿干比明显增高(P<0.05),PaO2低于正常组及相应的假手术组(P<0.05);LPS-IT组和LPS-IP组肺组织有明显病理变化,包括肺水肿和肺泡壁增厚,炎性细胞浸润。CLP组未见明显改变。结论在急性肺损伤的3种大鼠模型中,LPS-IT组和LPS-IP组肺损伤较为严重,CLP组未见明显肺损伤。提示腹腔注射LPS及气管给予LPS更适用于建立急性肺损伤模型以及后续应用药物的动物实验。
- 王婷梁华平柴鉴深蔡康兴侯凤艳范霞李羿
- 关键词：急性肺损伤腹腔注射气管滴注
- 胍丁胺对酵母多糖诱导急性腹膜炎性损伤及中性粒细胞浸润的影响
- 目的观察胍丁胺(AGM)对酵母多糖(ZYM)诱导的腹膜炎症反应及中性粒细胞浸润的影响。方法将48只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组[12只,腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)1 me/mL]、模型组[1...
- 邓佳范霞陈浩侯凤艳梁华平
- 文献传递
- 胍丁胺对酵母多糖诱导急性腹膜炎炎症损伤及中性粒细胞浸润的影响被引量：3
- 2016年
- 目的：观察胍丁胺（AGM）治疗对酵母多糖（ZYM）诱导的小鼠腹膜炎炎症反应及中性粒细胞（PMN）浸润的影响。方法将36只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、AGM治疗组。采用腹腔注射1mg/mLZYM溶液（0.5mL）制备急性腹膜炎小鼠模型，Sham组腹腔注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）；AGM治疗组同时腹腔注射AGM200mg/kg。各组分别于制模后2h和6h各处死6只小鼠，采集眼眶血及腹腔灌洗液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和腹腔灌洗液中角化细胞来源趋化因子（KC）、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量，用血细胞计数板计数腹腔灌洗液中白细胞总数，流式细胞仪分析腹腔灌洗液PMN数量。结果制模后2h，模型组血清和腹腔灌洗液中KC、MIP-2、TNF-α、IL-6含量均明显高于Sham组；AGM治疗后血清和腹腔灌洗液中上述各指标均较模型组显著降低〔血清KC（ng/L）：990.7±137.9比2053.2±262.7，MIP-2（ng/L）：642.2±124.4比1369.7±146.5，TNF-α（ng/L）：608.6±38.1比1044.7±101.0，IL-6（ng/L）：1058.2±129.1比1443.3±190.1；腹腔灌洗液KC（ng/L）：7462.3±839.6比12723.5±1515.7，MIP-2（ng/L）：1570.8±193.4比3471.4±384.7， TNF-α（ng/L）：1115.8±156.7比1499.2±231.2，IL-6（ng/L）：2646.5±223.2比3126.7±291.4；均P＜0.05〕；与2h比较，模型组、AGM治疗组6h时血清和腹腔灌洗液中KC、MIP-2、TNF-α明显下降，IL-6进一步升高，其中模型组和AGM治疗组血清及腹腔灌洗液中KC、MIP-2均已降至Sham组水平。制模后6h，模型组腹腔炎性细胞总数与PMN计数均显著高于Sham组，AGM治疗可显著减少腹腔中炎性细胞总数与PMN计数〔炎性细胞总数（×109/L）：14.7±1.1比2.0±0.4、10.1±1.2比14.7±1.1，PMN计数（×109/L）：11.37±1.22比0.18±0.05、7.69±0.57比11.37±1.22，均P＜0.05〕。结�
- 邓佳田李星马晓媛范霞侯凤艳梁华平罗艳
- 关键词：胍丁胺酵母多糖中性粒细胞
- 胍丁胺对LPS诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及机制研究
- 目的: 建立脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞氧化应激损伤的模型，探讨胍丁胺(AGM)干预后对氧化应激损伤的保护作用及机制研究。 方法: 1.常规培养RAW264.7细胞，使用不同浓度AGM(5...
- 侯凤艳
- 关键词：胍丁胺RAW264.7细胞核转录因子
- 文献传递
- 胍丁胺对严重创伤所致肝损伤的保护作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察胍丁胺对肝脏库普弗细胞分泌炎性因子的影响，探讨其对严重创伤所致肝损伤的保护作用及其机制。方法将42只雄性BALB／c小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、胍丁胺干预组，每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血35％的方法制备小鼠创伤失血模型；Sham组仅麻醉小鼠不进行其他处理。胍丁胺干预组于制模后1h液体复苏时腹腔注射胍丁胺200mg／kg；模型组给予等量生理盐水。各组于制模后12h、24h分别处死7只小鼠取血和肝脏，并分离肝脏库普弗细胞。用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及乳酸脱氢酶（LDH）水平；苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织病理学变化；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清、肝组织及肝脏库普弗细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量；用实时荧光定量反转录一聚合酶链反应（RT-qPCR）检测库普弗细胞中TNF-α和IL-6的mRNA表达。结果①Sham组小鼠肝组织结构正常；模型组小鼠翩模后24h可见中性粒细胞浸润，肝细胞肿胀、充血、坏死，且肝功能指标明显异常；而胍丁胺能明显改善上述病理学变化，改善肝功能。②制模后12h3组血清和肝组织TNF—α、IL-6水平均无明显差异，24h模型组较12h时升高，且均显著高于Sham组[血清TNF-α（ng／L）：80．8±4．7比34．7±4．7，IL-6（ng／L）：104．0±9．0比55．4±3．3；肝组织TNF-α（ng／mg）：405．2±19．6比57．2±10．0，IL-6（ng／mg）：58．4±7．7比14．3±2．1，均P〈0.01]；胍丁胺能有效降低创伤小鼠血清和肝组织TNF—α、IL-6水平[血清TNF-α（ng／L）：58．2±3．1比80．8±4．7，IL-6（ng／L）：74．1±6．6比104．0±9．0；肝组织TNF-α（ng／mg）：248．7±22．5比405．2±19．6，IL-6（ng／mg）：22．5±3．1比58．4±7�
- 何川侯凤艳王婷杨霞范霞梁华平龚建平
- 关键词：胍丁胺创伤肝脏库普弗细胞炎性因子
