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大鼠CD86基因RNAi慢病毒载体的构建与功能鉴定: 2009年; 目的构建大鼠CD86基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠原代培养树突状细胞（DC）上鉴定其基因沉默效率。方法将筛选获得的大鼠CD86基因特异性siRNA靶点，合成短发卡结构shRNA序列并退火成双链DNA，与pGCL—GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体，利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒，随后将其感染原代培养的大鼠DC细胞，采用real-time PCR和Western blot的方法检测靶基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确，shRNA慢病毒颗粒感染大鼠DC细胞后CD86基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了90．6％；蛋白表达显著抑制。结论成功构建了大鼠CD86基因的shRNA慢病毒表达载体，能够在大鼠DC细胞上有效沉默靶基因。; 孙梅李金东姜睿高南王荣有金成彦张兴义; 关键词：RNAI 慢病毒载体树突状细胞

大鼠CD80基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定: 2009年; 目的:构建大鼠CD80基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠NRK和IEC6细胞上鉴定其沉默效率。方法:将筛选获得的大鼠CD80基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA并退火成双链DNA,与pGCSIL-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠NRK细胞、IEC6细胞和大鼠DC细胞(树突状细胞,Dentritic cell),分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测靶基因在mRNA和蛋白质水平的沉默效率。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到4×108TU/ml。shRNA慢病毒颗粒感染NRK和IEC6细胞后CD80基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了66.9%和63.5%。结论:成功构建了大鼠CD80基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因。; 孙梅李金东姜睿高楠金成彦罗树立王荣有张兴义; 关键词：RNAI 慢病毒

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姜睿