钟树怀
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 猪囊尾蚴膜联蛋白基因的原核表达和免疫学分析被引量：2
- 2015年
- 目的对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫学分析。方法通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5＇端有NdeⅠ内切酶位点,3＇端有XhoⅠ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中,经测序、PCR及双酶切鉴定后,将其转入到宿主菌E.coli BL21（DE3）中,用IPTG诱导表达,表达产物采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯化的重组蛋白用Western blot进行免疫学分析。结果该基因全长为1 250bp,编码区为2~1 042bp,编码346个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39ku和6.80。经DNA测序、PCR及双酶切鉴定,pET28a（＋）-AF239799-1重组质粒构建成功。重组质粒在E.coli BL21（DE3）主要以包涵体形式表达,Western blot显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别。结论猪囊尾蚴AF239799-1基因可在原核表达系统中高效表达,表达产物具有免疫反应性。
- 钟树怀方文
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达免疫反应性
