目的观察染矽尘大鼠肺泡上皮细胞(AEC)能否诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为AEC。方法随机取6只无特定病原体级健康雄性SD大鼠,以全骨髓贴壁法培养BMMSCs。随机取同批大鼠6只,其中3只以1.0 m L质量浓度为40 g/L的矽尘混悬液一次性气管内注入制作染矽尘模型,另3只注入0.9%氯化钠溶液1.0 m L,上述2种大鼠均采用免疫粘附纯化法培养AEC。设置实验组(BMMSCs与染矽尘大鼠AEC共培养)、对照A组(BMMSCs和正常大鼠AEC共培养)和对照B组(BMMSCs单独培养),于共培养第4和8天,以倒置显微镜观察各组BMMSCs形态变化,对BMMSCs进行水通道蛋白5(AQP5)和表面活性蛋白C(SP-C)免疫荧光双重染色,分别采用倒置荧光显微镜(IFM)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其荧光表达,采用Image-pro plus 6.0图像分析软件分析2种蛋白的荧光积分光密度(IOD)。结果细胞共培养后,实验组和对照A组的BMMSCs逐渐从长梭形向立方形和多边形转化,第8天时变化较第4天更明显,对照A组BMMSCs形态变化无实验组明显,对照B组BMMSCs的形态无明显变化。IFM和LSCM下,在共培养第4和8天,实验组、对照A组BMMSCs均可见呈绿色荧光的AQP5和红色荧光的SP-C表达,对照B组BMMSCs均可见少量AQP5绿色荧光表达,均无SP-C红色荧光表达。2种显微镜下均观察到,于共培养第4和8天,实验组BMMSCs的2种蛋白荧光IOD值均较同时间点对照A组和对照B组增强(P<0.01),对照A组BMMSCs的2种蛋白荧光IOD值均较同时间点对照B组增强(P<0.01);实验组和对照A组BMMSCs在共培养第8天时间点2种蛋白的荧光IOD值均较同组第4天时间点增强(P<0.01)。结论染矽尘大鼠AEC能有效诱导BMMSCs分化成AEC。
目的比较骨髓间充质干细胞(BMMSCs)经静脉和经气管2种移植方式对染矽尘大鼠的肺损伤修复作用。方法取14只无特定病原体级健康雄性SD大鼠培养BMMSCs,另取48只同类大鼠随机分为对照组、染尘组、静脉组和气管组,每组12只。对照组大鼠气管内注入无菌生理氯化钠溶液1.0 m L,另3组大鼠均气管内注入质量浓度为40 g/L的无菌矽尘混悬液1.0 m L,静脉组、气管组再分别经鼠尾静脉和气管内注入细胞密度为5×109个/L的BMMSCs 0.5 m L。第28天放血处死大鼠,检测肺脏脏器系数;观察肺组织病理学改变情况,进行肺泡炎症和肺间质纤维化评分;检测肺组织羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以及周围血血常规和血生化指标。结果染尘组、静脉组和气管组大鼠肺脏脏器系数均高于对照组(P<0.05),静脉组和气管组大鼠肺脏脏器系数均低于染尘组(P<0.05),但静脉组和气管组大鼠肺脏脏器系数差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织病理学观察显示:对照组大鼠肺组织结构正常;染尘组肺部炎症最严重,并可见大量矽结节和胶原纤维沉积;静脉组和气管组炎症、矽结节数量以及胶原纤维增生均较染尘组有改善。染尘组、静脉组和气管组大鼠的肺泡炎、肺间质纤维化评分以及肺组织TGF-β1、TNF-α水平均高于对照组(P<0.05),静脉组和气管组大鼠上述4个指标均低于染尘组(P<0.05),但静脉组和气管组大鼠上述4个指标差异均无统计学意义(P>0.05)。染尘组大鼠肺组织HYP水平高于其余3组(P<0.05);但静脉组、气管组和对照组HYP水平分别两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。染尘组、静脉组和气管组大鼠周围血白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积均分别高于对照组(P<0.05)。气管组大鼠血清尿素氮水平高于静脉组(P<0.05),染尘组大鼠血清铜蓝蛋白水平高于其余3组(P<0.
