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陈慧芳

作品数：4 被引量：5H指数：2
供职机构：西南大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划博士科研启动基金更多>>
相关领域：生物学农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 3篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 3篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 4篇家蚕
  • 2篇荧光
  • 2篇免疫
  • 2篇免疫荧光
  • 2篇免疫荧光定位
  • 2篇基因
  • 2篇ATP酶
  • 1篇蛋白
  • 1篇亚基
  • 1篇原核表达
  • 1篇丝腺
  • 1篇特异性表达
  • 1篇泡型
  • 1篇皮蛋
  • 1篇组织特异性
  • 1篇组织特异性表...
  • 1篇网型
  • 1篇纤维
  • 1篇纤维性能
  • 1篇酶活

机构

  • 4篇西南大学

作者

  • 4篇陈慧芳
  • 3篇李懿
  • 3篇谢康
  • 3篇赵萍
  • 3篇王鑫
  • 1篇宋倩茹
  • 1篇周小英

传媒

  • 3篇生物工程学报

年份

  • 3篇2016
  • 1篇2015
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
家蚕V型ATP酶B亚基的克隆及表达特征被引量：2
2016年
V型ATP酶(Vacuolar-type ATPase)是一种定位于细胞膜和细胞器膜上的氢离子转运酶。它利用ATP水解的能量将氢离子转运到液泡、囊泡或者胞外,从而维持细胞内正常的酸碱环境。V型ATP酶B亚基(V-ATPase B)作为ATP的催化位点,也有着非常重要的作用。为了探讨家蚕V-ATPase B(Bm V-ATPase B)的功能,首先从家蚕五龄幼虫的中肠c DNA中克隆了Bm V-ATPase B基因并构建原核表达载体进行原核表达,获得了重组蛋白,经质谱鉴定正确后,通过镍柱亲和层析的方法纯化了该蛋白并制备了多克隆抗体;最后分析了该蛋白在家蚕丝腺中的表达特征并利用免疫荧光对其在丝腺中的表达位置进行了定位。结果显示Bm V-ATPase B基因序列全长1 473 bp,预测蛋白分子量55 k Da,预测等电点5.3。通过Western blotting对家蚕5龄第3天和上蔟第1天幼虫丝腺的不同区段进行Bm V-ATPase B蛋白的表达特征分析,发现在两个时期该蛋白均在前部丝腺高量表达,而在中部丝腺和后部丝腺表达量相对较低。进一步对两个时期丝腺的不同区段进行免疫荧光定位,发现该蛋白在两个时期的前部丝腺、中部丝腺和后部丝腺均定位于细胞层。利用激光共聚焦显微镜对该蛋白进行进一步的定位,发现该蛋白主要在丝腺的细胞膜表达。研究结果明确了该蛋白在丝腺中的表达模式,为深入研究该蛋白在蚕丝纤维形成中的作用奠定了基础。
陈慧芳王鑫谢康李懿赵萍
关键词：家蚕WESTERNBLOTTING免疫荧光定位
家蚕前部丝腺特异表皮蛋白Bm11721的鉴定及表达被引量：2
2016年
家蚕的丝腺是其丝蛋白合成和分泌的器官,根据其形态和功能的不同分为前部、中部和后部丝腺,前部丝腺不具有合成丝蛋白的能力,是丝蛋白构象发生转变的场所。剪切力在丝蛋白构象转变中起到重要的作用,其在家蚕前部丝腺主要由前部丝腺逐渐变细的管腔结构和富含几丁质及表皮蛋白的坚硬的内壁提供。鉴定家蚕前部丝腺新的几丁质结合蛋白,并调查其在家蚕幼虫不同组织的表达特征。通过几丁质亲和层析的方法在前部丝腺筛选并鉴定到一个新的具有几丁质结合功能的表皮蛋白Bm11721,其编码基因编号为BGIBMGA011721(Gen Bank Accession No.NM-001173285.1)。利用原核表达系统成功表达了该蛋白,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了Bm11721的重组蛋白并制备了多克隆抗体。组织表达分析发现无论是转录水平还是蛋白水平Bm11721均只在前部丝腺特异表达,且Bm11721蛋白在5龄期的前部丝腺中恒定表达。免疫荧光定位结果显示Bm11721蛋白定位在前部丝腺的内膜中,推测其可能与前部丝腺的机械硬度有关,为丝蛋白的构象转变提供剪切力。
谢康王鑫陈慧芳李懿宋倩茹赵萍
关键词：家蚕组织特异性表达免疫荧光定位
家蚕V型ATP酶基因的克隆、表达特征及功能研究
家蚕是一种重要的经过人工驯化的经济昆虫，目前被认为是理想的研究鳞翅目昆虫的模式生物。蚕丝产业作为我国具有五千多年悠久历史的传统产业，从古至今在社会经济文化生活中占有重要地位。同时蚕丝作为一种具有优良力学性能和稳定生物包容...
陈慧芳
关键词：家蚕基因克隆原核表达纤维性能
利用家蚕杆状病毒表达家蚕肌质网型钙离子ATP酶蛋白被引量：1
2015年
肌质网型钙离子ATP酶(Sacro/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,Serca)负责将细胞中多余的Ca2+转运并存储于内质网中,从而维持细胞内适宜的Ca2+环境。家蚕Serca创造的细胞内及细胞外Ca2+平衡对家蚕正常生命活动的维持具有重要作用。由于Serca分子量较大并具有10次跨膜结构,很难在大肠杆菌表达系统中表达。为了获得具有生物学活性的重组Serca蛋白,利用p Fast Bac Dual载体构建了用于表达egfp和serca的双元杆状病毒表达载体,转染细胞后获得重组病毒,将重组病毒感染细胞后,成功地在细胞中表达了EGFP和Serca。通过荧光观察及Western blotting分析表明,感染后细胞中Serca和EGFP表达模式一致,从感染后48 h开始表达,在感染后96 h表达量最大。对获得的重组蛋白进行酶活分析,发现感染后48 h至120 h的细胞Serca酶活显著提高。表明具有生物学活性的Serca在此系统中成功获得表达,为深入研究Serca蛋白的功能奠定了基础。
王鑫李懿陈慧芳周小英谢康赵萍
关键词：家蚕杆状病毒基因表达酶活
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