刘晔
- 作品数：8 被引量：24H指数：2
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 水痘-带状疱疹病毒Oka株和84-7株基因特征的分析被引量：1
- 2017年
- 目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株和84-7株的部分基因特征进行分析,为建立Oka株和84-7株的鉴别方法提供依据。方法利用PCR技术扩增相关基因,并运用生物信息学软件对水痘-带状疱疹病毒OKa株和84-7株的Pst I酶切位点、抗原蛋白基因序列(ORF14,ORF68)、高突变区域(ORF62)及84-7株复制起点进行序列比较和分析。结果 Oka株酶切位点特征为Pst I-Sma I^+Bss HII^+Nae I^+,84-7株的酶切位点特征为Pst I^+Sma I^-Bss HII^-Nae I^-;Oka株和84-7株ORF14编码的蛋白质同源性为99.8%,3个碱基的差异导致了3个氨基酸的变化,且这两株病毒株的R2可变区的串联重复单位拷贝数均为7;Oka株和84-7株ORF68编码的蛋白质同源性为100%,且存在2个低复杂性区域(LCR);ORF62编码区蛋白质的同源性为99.2%,具有14个低复杂性区域;84-7株复制起点区域包含一个13TA+19GA结构。结论 Oka株和84-7株的同源性很高,但在酶切位点方面存在差异,可用于Oka株和84-7株的鉴别,为今后确立水痘-带状疱疹病毒毒株的鉴别方法提供依据。
- 邹蔚然刘亚宇廖海棠麻广何云松刘晔
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒酶切位点基因特征同源性
- 水痘-带状疱疹病毒Oka株gC基因的克隆及序列分析
- 2017年
- 目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株gC基因进行克隆及序列分析。方法取第40代Oka VZV疫苗株,反复冻融3次后,收集上清,提取病毒DNA,根据NCBI登录的Dumas株VZV序列,设计引物,扩增gC基因,与pMD19-T Vector连接后,热转化至E.coli Competent Cells JM109中,挑选阳性菌落进行测序;将得到的序列与Gen Bank中登录的其他12株VZV毒株的gC基因序列,进行核苷酸序列和氨基酸水平分析。结果 13株VZV-gC基因开放阅读框(ORF)的核苷酸长度为1 557~1 776 bp,编码的蛋白由519~592个氨基酸组成。核苷酸序列同源性在94.8%~100%之间,氨基酸序列同源性在93.9%~100%之间。R2重复拷贝数为7,Dumas、SVETA和Ellen重复拷贝数为6,LAX1为4。结论 VZV Oka株gC蛋白具有高度的保守性,与其功能的发挥密切相关。
- 何云松文崇艳麻广邹蔚然刘亚宇李立刘晔
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒GC基因
- 水痘-带状疱疹病毒(VZV84-7株)在人二倍体细胞(2BS株)中感染复数的分析被引量：1
- 2014年
- 目的探讨水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）在人二倍体细胞（2BS株）上的感染活性,确定感染复数（MOI）。方法使用100 ml小方瓶培养人二倍体细胞（2BS株）,待长成致密单层后,接种病毒滴度为5.5 lgPFU/ml的水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）,每瓶接种量分别为0.02、0.1、0.3、0.5、0.8、1、1.5和2 ml,于显微镜下连续观察细胞病变情况及病变比例,并连续记录收获时间;采用蚀斑法测定病毒滴度。结果当病毒接种量为0.02 ml时,细胞大部分生长正常,呈极性排列,无形态典型、广泛的病变,通过延长收获时间也无法获得形态典型、广泛的病变;当病毒接种量不低于0.1 ml时,呈典型、广泛的病变,随着病毒接种量的增加,收获时间逐渐缩短;仅病毒接种量为0.02 ml组细胞的病毒滴度低于3.7 lgPFU/ml;确定MOI在0.004 0~0.019 9之间,均可制备出质量稳定、符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求的毒种。结论确定了水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）感染人二倍体细胞（2BS株）合适的MOI,为水痘疫苗生产工艺的优化提供了参考依据。
- 侯良玉麻广丁秀红黄林牟鑫尧李立刘亚宇李永忠刘晔
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒
- 水痘-带状疱疹病毒84-7株基因特征分析被引量：2
- 2016年
- 目的分析水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)84-7株的基因特征。方法利用PCR法分别扩增VZV84-7株ORF38(PstⅠ)、ORF54(BglⅠ)、ORF62(SmaⅠ、Bss HⅡ、NaeⅠ)共5个酶切位点片段,运用生物信息学软件对5个酶切位点进行分析;PCR扩增病毒复制起点,分析VZV84-7株复制起点特征;PCR扩增VZV84-7株g E基因,对该基因进行序列分析。结果 VZV84-7株的酶切位点特征为:PstⅠ^+BglⅠ^+SmaⅠ^-Bss HⅡ^-NaeⅠ^-;复制起点区域包含1个13TA+19GA结构;g E基因序列与Oka株相比,在第1 170位存在1个碱基差异,为C→A,属于无义突变,但编码区氨基酸序列同源性为100%。结论 VZV84-7株的酶切位点和复制起点均有特异性,同时VZV84-7株与Oka株的g E基因仅有1个碱基突变,氨基酸序列同源性为100%。
- 邹蔚然刘亚宇何云松刘晔麻广廖海棠李永忠
- 关键词：水痘带状疱疹病毒基因聚合酶链式反应酶切位点
- 减毒活疫苗的应用及其研究进展被引量：12
- 2018年
- 减毒活疫苗可引发机体免疫反应,刺激机体产生特异性的记忆B和T细胞,获得长期或终生保护作用,与灭活疫苗比较,减毒活疫苗具有免疫力强及作用时间长的优点。减毒活疫苗在疫苗史的初期就发挥了关键作用,如通过接种牛痘预防天花;后续开发的麻风腮减毒活疫苗、乙脑减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗、轮状病毒减毒活疫苗、登革热减毒活疫苗及卡介苗等均具有良好的免疫效果;新开发减毒活疫苗还可用于预防和治疗肿瘤、糖尿病、肺炎及新结核病等疾病,具有广泛的应用前景。本文就减毒活疫苗在传染性疾病、肿瘤及其他疾病中的应用及研究进展作一综述。
- 李征刘晔李春阳
- 关键词：减毒活疫苗病毒细菌
- 不同生产工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的比较被引量：2
- 2015年
- 目的采用细胞工厂替代传统转瓶工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)。方法分别用细胞工厂和3 L转瓶培养2BS细胞,制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)各6批,采用Countstar全自动细胞计数仪进行细胞计数,并以计数结果中的单位面积细胞数、成活率及消化后细胞的平均直径为指标,考察细胞质量,同时采用蚀斑法检测原液、成品及成品37℃放置7 d后(热稳定性)的病毒滴度。结果采用细胞工厂连续制备的6批2BS细胞的平均单位面积细胞数、细胞平均成活率均略优于3 L转瓶培养工艺,平均直径变动范围小于3 L转瓶;细胞工厂制备的6批疫苗,平均原液滴度为5.58 lg PFU/ml,平均成品滴度为4.78 lg PFU/0.5ml,37℃放置7 d后的平均病毒滴度为4.13 lg PFU/0.5ml,优于3 L转瓶。结论利用细胞工厂制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株),可获得更高滴度病毒液,降低疫苗生产过程中的劳动强度及污染风险,并提高了疫苗产量及质量的稳定性,适合于水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的规模化生产。
- 李立侯良玉麻广丁秀红李永忠哈秀杰曾昊李毅邹蔚然林崇建单玉杰刘晔黄林
- 关键词：细胞工厂水痘减毒活疫苗
- 人二倍体细胞(2BS株)细胞库的建立及生物学特性鉴定被引量：6
- 2014年
- 目的建立人二倍体细胞（2BS株）主细胞库和工作细胞库。方法将人二倍体细胞（2BS株）扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验。将全面检定合格的工作细胞库细胞分别接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂,观察细胞形态;将水痘病毒分别按0.010 5、0.012 8、0.018 8 MOI接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂上的单层细胞,收获病毒原液,检测病毒滴度。结果主细胞库细胞活力为94.1%,工作细胞库细胞活力为94.4%;1 000个处于分裂相时期的细胞的核型分析结果均在《中国药典》三部（2010版）人二倍体细胞染色体分析标准的规定范围内;细胞上清液和裂解液中人外源病毒因子检测结果均为阴性,符合《中国药典》三部（2010版）规程要求;细胞均贴壁,成纤维细胞形态,种属鉴别为人细胞B型;细胞库未被细菌、真菌、病毒及支原体污染,也未出现致瘤性。建立的细胞库在3种培养器皿中均可在工艺要求时间内生长为单层,单位面积活细胞浓度在（2.01~2.59）×105个/cm2之间,收获的病毒滴度在5.0~5.25 lg PFU/ml之间,符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求。结论建立了人二倍体细胞（2BS株）主细胞库和工作细胞库,为2BS细胞应用于水痘减毒活疫苗的研发和生产提供细胞资源和理论依据。
- 梁本王佳凤侯良玉麻广李永忠李立哈秀杰李开军单玉杰林崇健刘晔黄林
- 关键词：细胞库生物学特性
