程敏
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物科学技术学院农业部鸡遗传育种重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家肉鸡产业技术体系建设专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡miR-17-92基因簇上游区的克隆和分析
- 国内外对哺乳动物miR-17-92基因簇的研究已很深入。miR-17-92基因簇在细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期以及动物发育等过程中发挥重要作用;miR-17-92基因簇的异常将会导致发育异常和疾病的发生。miR-17-...
- 程敏王维世李玉茂李辉王宁
- 关键词：转录调控启动子
- 鸡miR-17-92基因簇上游调控区功能分析被引量：4
- 2016年
- miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因在于鸟类miR-17-92基因簇上游的基因组序列都存在一个gap,且该基因簇启动子的位置和序列也还不清楚。为此,本研究采用染色体步移的方法获得鸡miR-17-92基因簇上游gap区序列,并采用生物信息学分析和报告基因及截短突变技术开展该gap区的功能分析。染色体步移分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游gap区全长1704 bp,GC含量达80.11%。生物信息学分析显示,鸡miR-17-92基因簇上游gap区内1段200 bp的序列与人、牛、小鼠等9种动物miR-17-92基因簇上游序列保守性较高,且该区域为人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇宿主基因的核心启动子区。将克隆的gap区序列插入pGL3 basic荧光素酶报告基因载体,构建成启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。荧光素酶报告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)报告基因的活性是pGL3 basic空载体活性的417倍,证明所克隆的gap区片段是鸡miR-17-92基因簇宿主基因的启动子。为进一步分析该启动子的结构和功能,构建gap区片段的5'端缺失突变(缺失448 bp)和3'端缺失突变(缺失894 bp)的荧光素酶报告基因载体。与pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突变分别使启动子报告基因活性降低19.82%和60.14%。这些数据提示,鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的重要调控区位于-3400/-2506。本研究结果为进一步开展鸡miR-17-92基因簇的转录调控奠定了基础。
- 程敏张文建邢天宇闫晓红李玉茂李辉王宁
- 关键词：启动子转录调控
- 过表达HOPX基因对鸡脂肪生长发育重要基因表达的影响
- 2015年
- 为揭示HOPX基因在鸡脂肪生长发育中的作用,研究采用Real-time RT-PCR和启动子荧光素酶报告基因技术,分析过表达HOPX基因对鸡脂肪生长发育重要基因的表达及其启动子活性的影响。结果表明,与空载体对照组(p CMV-HA vector)相比,HOPX基因能够促进A-FABP和PPARγ基因表达及其启动子活性,抑制KLF 7基因表达及其启动子活性,但对FAS基因表达及其启动子活性没有影响。研究结果显示,过表达HOPX基因可能促进鸡前脂肪细胞分化。
- 王宁史洪岩程敏孙婴宁李辉
- 关键词：脂肪细胞分化发育
- 鸡FABPFABP2基因单倍型与生长和体组成性状的相关分析被引量：5
- 2016年
- 为探讨鸡FABP2基因多态性对肉鸡生长和体组成性状的影响,以东北农业大学F2资源群体为试验材料,对鸡FABP2基因3个多态性位点（c.601A＞T,c.1018C＞T和c.3267G＞A）利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）方法进行基因型分析,利用3个多态性位点基因型信息构建单倍型并分析单倍型与鸡生长和体组成性状的相关性.结果：FABP2基因3个多态性位点构建的单倍型对鸡2～12周龄体重、龙骨长和4周龄跖骨长有显著影响（P＜0.05）;对8和10周龄跖骨长、跖骨围、胸宽、腹脂率、胫骨长有一定的影响（P＜0.2）.由此推断：影响鸡体重和骨骼性状的QTL可能位于此单倍型区域内,ACG单倍型为提高体重和骨骼性状的有利单倍型.
- 徐松松安荣荣陈耀峰程敏李辉王守志
- 关键词：单倍型体重骨骼
- HOPX基因过表达对鸡前脂肪细胞增殖的影响被引量：5
- 2015年
- 【目的】构建鸡HOPX基因(homeodomain only protein X)全长编码区(coding region sequence,CDS)的真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,探讨HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计鸡HOPX基因CDS区上、下游引物,以AA肉鸡腹部脂肪组织的c DNA为模板,采用PCR扩增、克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并将其亚克隆至真核表达载体(p CMV-HA vector),获得HOPX基因的真核表达载体p CMV-HA-HOPX。采用双酶切鉴定、测序及Western blotting方法分析鉴定p CMV-HA-HOPX。采用胶原酶法分离培养12日龄AA商品肉仔鸡腹部脂肪组织原代前脂肪细胞,瞬时转染p CMV-HA-HOPX,转染6 h时后消化细胞,按照每孔50 000个细胞数接种12孔培养板,并在细胞贴壁0、24、48和72 h,分别采用显微镜观察和CCK-8细胞增殖检测试剂盒分析HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响;同时,利用TRIzol法提取组织和细胞总RNA,并反转录合成c DNA,采用Real-time RT-PCR方法分析细胞增殖标志基因Cyclin D1和PCNA的m RNA表达。【结果】测序结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区大小为222 bp,与NCBI发布的鸡HOPX基因m RNA序列(NM_204556)一致;利用HA标签抗体的Western blotting分析显示,真核表达载体p CMV-HA-HOPX能够表达出预期大小的蛋白分子(约9.5k D),表明鸡HOPX基因的真核表达载体p CMV-HA-HOPX构建成功。显微镜观察发现,转染p CMV-HA-HOPX载体的细胞(HOPX过表达组)在细胞贴壁后培养24和48 h的细胞数量低于转染p CMV-HA vector空载体(空载体对照组)的细胞数量;CCK-8检测分析发现,转染p CMV-HA-HOPX载体细胞的吸光度值(OD值)在细胞贴壁后培养24、48和72 h都极显著低于空载体对照组(P<0.01)。与细胞增殖检测结果相一致,细胞增殖标志基因表达检测分析发现,在细胞贴壁后培养24 h后,HOPX过表达组细胞Cyclin D1基因的m RNA表达量显著低于空载体对照组(P<0.05);在细胞�
- 史洪岩贺綦程敏孙婴宁李辉王宁
- 关键词：前脂肪细胞增殖
