目的建立多重实时定量PCR（MRQ—PCR）同时快速检测血中大肠杆菌与白念珠菌DNA的方法，以评估肠屏障损伤可能导致的移位微生物的种类和程度并提供针对性用药的建议。方法选择大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因作为检测大肠杆菌的靶基因设计引物和探针，选择白念珠菌ITS2基因设计引物和探针。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒提取大肠杆菌与白念珠菌基因组DNA；建立25μlTaqMan探针MRQ-PCR反应体系；对18份模拟血标本及10份外科发热患者临床标本进行MRQ—PCR检测。结果引物和探针特异性好，大肠杆菌与白念珠菌标准曲线相关系数分别在0．994—0．999和0．994～0．998，扩增效率分别为0．894～1．022和0．905～1．028。标准样品检测限分别为大肠杆菌13．9拷贝／μl和白念珠菌0．8cfu／μl，两种菌的检测灵敏度分别为100％和99．69％，特异度分别为100％和94．73％，标准品中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为（101．89±5．69）％和（103．74±4．64）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（13．14±10．27）％和（19．18±8．54）％，批间变异系数分别为（14．35±9．34）％和（18．31±10．25）％。全血标本中大肠杆菌与白念珠菌特异基因的检出限分别为12455．2拷贝／ml和800．3cfu／ml，平均回收率分别为（111．60±11．06）％和（99．96±6．16）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（11．02±5．65）％和（8．14±7．29）％，平均批间变异系数分别为（12．88±7．59）％和（18．62±9．14）％。结论多重实时定量PCR可以同时快速、灵敏、特异地定量检测人全血标本中大肠杆菌与白念珠菌基因，准确度高、重复性好、节省血标本用量及检测成本、总检测时间缩短，在临床全血标本的真菌与细菌快速鉴别检测、抗微生物药物的针对性应用及疗效评估、肠屏障�
目的建立实时定量PCR（RQ-PCR）快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用。方法基于烟曲霉多拷贝基因ITSl-5．8S基因设计引物和TaqMan探针，用QIAamp^DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA，建立20μlRQ-PCR反应体系，对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果检测限为10^-1基因组／μl上机待测液（即约78CFU／ml全血）；检测特异度和灵敏度分别为94．25％和99．04％，阳性预告值和阴性预告值分别为97．63％和97．62％；测定结果的平均相对误差为（3．67±13．19）％；批内及批间平均重复性变异系数分别为（12．38±1．53）％和（16．27±2．72）％；人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为（107．81±25．92）％，回收率平均变异系数为（26．24±5．62）％。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。结论RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量，且有着较好的准确度与精密度。本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组。
