张伟
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- c-Jun在胆红素脑病幼鼠海马神经细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨c－Jun在胆红素脑病幼鼠海马神经细胞凋亡中的作用。方法选取7日龄新生SD大鼠，经小脑延髓池注射胆红素溶液（10 g/L），注射后6 h、12 h断头取脑，重氮反应法检测海马胆红素水平，Nissl染色观察海马神经元的病理变化；Western blot和免疫荧光染色检测c－Jun氨基末端激酶（JNK）、c－Jun及p－c－Jun的表达；ELISA实验和荧光分光光度法测定凋亡相关因子Caspase－3和Caspase－6。结果小脑延髓池注射胆红素后幼鼠出现不同程度的异常行为学表现，6 h和12 h后海马胆红素水平较对照组显著升高[（44.00±13.00）%（P〈0.05）和（96.86±9.00）%（P〈0.01）]，24 h后海马神经元脱失，Nissl染色浅淡。随着海马胆红素水平增高，JNK蛋白表达水平（2.41±0.15）较对照组（1.00±0.09）增加1.4倍（P〈0.05），其下游靶分子c－Jun和p－c－Jun表达水平（1.43±0.16，2.16±0.23）也分别较对照组（1.00±0.13，1.00±0.11）上升0.43倍和1.16倍（P均〈0.05）。免疫荧光染色结果显示，胆红素注射6 h后海马及大脑皮质c－Jun和p－c－Jun阳性细胞增多。凋亡相关分子Caspase－3和Caspase－6活性在注射胆红素12 h后开始上升，24 h后分别较对照组增加2.08倍和0.28倍（P均〈0.05）。
结论c－Jun蛋白磷酸化在促进胆红素诱发的幼鼠海马神经细胞凋亡中发挥重要作用。
- 杨生汝张伟赵云鹤高雁萍陆利刘雪芹
- 关键词：C-JUN氨基末端激酶C-JUN胆红素脑病CASPASE-6
- 20S蛋白酶体β5亚单位基因沉默对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响被引量：4
- 2015年
- 目的：应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位（PSMB5）对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点.方法：构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白（GFP）对照组和shRNA组.倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1（cyclin D1）及其激酶CDK4的表达变化.结果：慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95％以上细胞表达绿色荧光蛋白.shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31％＆#177;0.59％和56.83％＆#177;13.31％,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47％＆#177;0.41％.此外,shRNA组BrdU阳性率26.14％＆#177;8.13％较对照组49.53％＆#177;11.18％显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55％＆#177;7.76％和63.26％＆#177;15.76％.结论：PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能.
- 张伟刘雪芹苗苗宋慧芳杨桂姣陆利
- 关键词：人骨髓间充质干细胞基因沉默增殖
