费蕾
- 作品数：21 被引量：82H指数：5
- 供职机构：第三军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人BclGL基因慢病毒表达载体构建及其对T淋巴细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础。方法RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGFP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GFP),将融合基因克隆于慢病毒载体FUGW并转染293FT细胞包装浓缩慢病毒颗粒。将浓缩慢病毒感染Jurkat细胞,同时设立PBS对照及FUGW病毒阴性对照组,流式细胞术及荧光定量PCR鉴定BclGL在Jurkat细胞中的表达,Annexin V-APC/PI双染检测细胞凋亡变化。结果酶切及测序证实人BclGL慢病毒表达载体构建成功,转染Jurkat细胞72h后Jurkat细胞凋亡明显增加。结论成功构建了高效稳定表达人BclGL的重组慢病毒转染系统,并证实其对Jurkat淋巴细胞的促凋亡效应,为进一步探讨BclGL的生物学功能奠定了基础。
- 罗娜吴毅费蕾郭晟杨承英吴胜昔陈永文吴玉章郝飞
- 关键词：慢病毒表达载体JURKAT细胞凋亡
- PD-1/PD-L共抑制信号研究进展被引量：2
- 2010年
- PD-1是主要表达在活化T细胞上的抑制性受体,与其配体PD-L(PD-L1,PD-L2)结合,可显著抑制T细胞的活化和增殖,并调节细胞因子的表达和分泌.简述PD-1/PD-L在免疫耐受、微生物感染及肿瘤免疫逃逸中的作用.
- 吴胜昔陈永文苟冬梅杨承英郭晟费蕾吴玉章
- 关键词：免疫耐受微生物感染肿瘤免疫逃逸
- B7-H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测被引量：3
- 2014年
- 目的构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体,转染肝癌Hep G2细胞进行活性检测。方法 PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段,并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染Hep G2细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶表达活性。结果成功地构建了6种不同长度的PGL3-B7-H1-Luc荧光素酶表达质粒,分别命名为P88、P175、P203、P398、P723和P960。瞬时转染Hep G2后经报告基因检测,P175、P203、P398、P723和P960所含5段启动子均具有转录活性,IFN-γ作用后启动子活性明显增强,而P88转染组IFN-γ作用后,荧光素酶活性无显著变化。结论成功构建了B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体。
- 吴胜昔陈永文朱广倍费蕾吴玉章
- 关键词：B7-H1启动子活性测定
- 补体C5b-9复合物促进树突状细胞成熟被引量：1
- 2007年
- 探讨补体C5b-9复合物对树突状细胞成熟及免疫学功能的影响。rhGM-CSF+rhIL-4体外诱导单核细胞分化为不成熟树突状细胞,体外于不成熟树突状细胞表面用补体蛋白纯品组装CSb-9,37℃,5%CO_2温育96 h,流式分析细胞表型及抗原捕获能力;与同种异体CD4^+和CD8^+T细胞共培养检测其免疫刺激功能;ELISA检测细胞因子分泌。结果显示,亚溶解型C5b-9处理DC表面标志CD83、HLA、CD80、CD86、B7-H1、B7-H3、B7-H4以及BTLA等表达上调;DC分泌IL-12及TNF-α上调,抗原捕获能力降低;C5b-9处理DC刺激CD4^+T细胞活化及分泌IFN-γ、IL-2能力增强。结论:补体C5b-9复合物可以促进树突状细胞成熟,衔接天然免疫和特异性免疫。
- 杨承英陈永文傅晓岚费蕾靳廼斯谢谆怡汤玉渝吴玉章
- 关键词：树突状细胞
- 鼠源轮状病毒vp7基因的表达载体构建及转基因植物的研究被引量：15
- 2003年
- 目的 构建表达鼠源轮状病毒抗原基因vp7的植物表达载体及植物转化研究。方法 抗原基因vp7经PCR扩增后直接克隆到PUC T载体 ,双酶切目的片断和植物表达载体 ,以T4连接酶将目的片断与载体相连接 ,电转化方式将重组质粒转入农杆菌。结果 以重组农杆菌为介导将靶基因转入到马铃薯外植体。成功地将目的基因定向克隆到表达载体 ,并转入到农杆菌中 ;以农杆菌为介导获得抗性转基因马铃薯植株。结论 通过PCR检测 ,初步确定轮状病毒外壳蛋白基因vp7已成功地整合到马铃薯植株中。
- 费蕾李晋涛吴玉章
- 关键词：转基因植物轮状病毒VP7基因基因工程婴幼儿腹泻
- 乙型肝炎病毒x基因转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选被引量：2
- 2014年
- 目的建立稳定表达HBx蛋白的HepG2细胞系,利用基因芯片技术分析HBx转染肝癌细胞株引起的表达谱变化。方法首先PCR扩增HBx基因片段,与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组子,脂质体转染HepG2细胞经抗生素G418筛选后获得稳定表达HBx蛋白的HepG2细胞系,采用流式细胞术、Western blot鉴定HBx蛋白在细胞中的表达。利用基因芯片技术分析HBx转染肝癌细胞株引起的表达谱变化。结果经HindⅢ和XbaⅠ内切酶酶切和测序鉴定表明成功构建了HBx基因真核表达载体,流式细胞术、Western blot均证实HBx蛋白在HepG2细胞高效表达,基因芯片结果显示在检测的35 000个基因中有98个基因转录显著上调,24个基因转录显著下调。结论成功构建了稳定、高效表达HBx的HepG2细胞,HBx转染HepG2细胞可导致部分基因显著差异表达,差异表达的基因可能参与了肝癌的发生发展。
- 吴胜昔陈永文朱广倍费蕾吴玉章
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因转染HEPG2细胞基因芯片
- 人源轮状病毒的小型猪腹泻模型建立被引量：3
- 2006年
- 目的建立人源轮状病毒的小型猪腹泻模型，为人源轮状病毒感染的免疫保护机制、致病机制及疫苗的研制奠定基础。方法ELISA与RT-PCR相结合分离鉴定野生型人源轮状病毒；用野生型人源轮状病毒G1与G3血清型口服接种不同日龄的小型猪，观察粪便排泄等临床症状，ELISA及免疫荧光分别检测粪便与小肠上皮组织中的轮状病毒抗原，光镜及透射电镜观察小肠上皮组织的病理变化与病毒样颗粒。结果3～5日龄小型猪均出现了典型的临床腹泻症状；粪便中轮状病毒抗原排泄可平均持续5～7d；小肠组织可见明显的病理变化，同时用免疫荧光检测方法可在小肠组织中检测到特异性轮状病毒抗原；透射电镜进行观察，在小肠组织的超薄切片中可见到大量的轮状病毒颗粒。30～35日龄小型猪可出现明显腹泻临床症状，粪便中轮状病毒抗原排泄可持续4～7d；56～60日龄小型猪接种野生型人源轮状病毒G1血清型后，均未出现典型的腹泻症状，但可持续排毒2～3d。结论小型猪可作为人源轮状病毒的理想腹泻动物模型。
- 李晋涛魏静牟芝蓉张蓓王靖雪唐艳何海洋费蕾吴玉章
- 关键词：小型猪腹泻模型
- 小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ频率年龄依赖性初探被引量：1
- 2006年
- 目的通过检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率,初步探讨小型猪免疫细胞功能的发育时限。方法分别取3日龄、2月龄、6月龄、1周岁及2周岁小型猪的外周血,提取单个核细胞,进行胞内细胞因子IFN-γ染色,流式细胞仪检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率。结果3日龄、2月龄、6月龄1、周岁及2周岁小型猪的外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率分别为2.73%、3.80%、10.00%、38.09%及41.03%。结论小型猪免疫细胞功能具有明显的发育时限。1周岁以上小型猪的免疫细胞功能发育基本成熟。
- 魏静李晋涛张蓓王靖雪唐艳何海洋费蕾吴玉章
- 关键词：小型猪单个核细胞IFN-Γ
- 基因芯片筛选HepG2与HepG2.2.15细胞中的差异表达基因被引量：2
- 2008年
- 目的探讨HepG2细胞及HepG2.2.15细胞中差异表达的基因并对其基因表达谱进行生物学信息分析。方法用Trizol一步法提取HepG2细胞及HepG2.2.15细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cD-NA探针,与基因芯片杂交;采用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,最后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因。结果在54614个基因表达谱的筛选中,发现有4462个基因表达水平显著上调,2592个基因表达水平显著下调。结论HBV基因组及其表达产物对于肝细胞基因表达谱有显著影响,可能参与了肝癌的发生发展。
- 汤玉瑜陈永文费蕾吴玉章
- 关键词：基因芯片HEPG2细胞HEPG2.2.15细胞
- 轮状病毒不同毒株感染宿主细胞的感染效力研究被引量：4
- 2007年
- 目的比较轮状病毒Wa株和SA11株对MA104细胞的感染及复制能力,研究不同毒株对宿主细胞的感染效力。方法差速离心浓缩病毒颗粒,FFA法检测病毒滴度,流式细胞术检测病毒对MA104细胞的感染效率,ELISA检测不同病毒颗粒浓度,并比较2毒株间异同。结果Wa株感染效率随病毒量的变化明显快于SA11株,极限感染效率也较SA11高;2毒株病毒产量均随感染病毒用量增加而明显升高,而感染了SA11细胞的平均病毒生成能力显著高于感染Wa株的细胞。结论轮状病毒Wa株与SA11株感染细胞效力差异显著(P<0.05),为进一步研究轮状病毒感染宿主细胞及与之相互作用特点提供了实验依据。
- 何海洋李晋涛费蕾姜曼牟芝蓉付晓兰唐艳段召军吴玉章
- 关键词：轮状病毒病毒感染率流式细胞术
