李鑫娜
- 作品数：10 被引量：39H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因被引量：6
- 2015年
- 建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。
- 关丽聂凯张丹李鑫娜王延群谭文杰马学军
- 探针导向重组酶介导等温扩增法检测MTB rpoB基因突变的应用价值
- 2020年
- 目的建立可快速检测MTB rpoB基因516位点突变的探针导向重组酶介导等温扩增法(probedirected recombinase amplification,PDRA)。方法设计4条探针[1条野生型探针(P-W)及3条突变型探针(P-GGC、P-GTC、P-TAC)]和1条共同的下游引物,分别构建TB-516-W、TB-516-GGC、TB-516-GTC和TB-516-TAC4种检测体系,在39℃条件下恒温扩增40 min。通过阳性阈值时间判定MTB rpoB基因516位点是否发生突变及其突变类型;通过同一探针检测对应的重组质粒确定该检测体系的敏感度;通过不同探针检测某一种重组质粒,根据阳性阈值时间确定该检测体系的特异度。应用建立的PDRA方法检测6株利福平耐药MTB菌株和35份MTB培养阳性的痰标本,并与一代测序结果进行比较。结果 4种检测体系检测对应重组质粒的敏感度为1000拷贝/μl。4种检测体系的特异度良好,探针与靶序列完全匹配时,阳性阈值时间早;探针与靶序列不完全匹配时,阳性阈值时间晚,具有稳定的阳性阈值时间差值,体系TB-516 W,TB-516-GGC,TB-516-GTC和TB-516-TAC的阳性阈值时间差值分别为7.0、5.8、10.0、7.0 min。PDRA检测6株MTB利福平耐药菌株和35份MTB培养阳性痰标本的结果与测序结果一致。结论本研究初步建立了可应用于MTB利福平耐药rpoB基因516位点突变检测的PDRA方法,该方法检测敏感度高,特异度好,具有一定的实验室应用价值。
- 李鑫娜申辛欣王瑞白段素霞张瑞卿王瑞欢白雪丁凡国豪王金荣高源陈子巍马学军
- 关键词：核酸扩增技术重组酶
- 3型腺病毒免提取核酸重组酶介导的等温扩增实时荧光检测方法的建立及应用被引量：5
- 2019年
- 目的 建立3型腺病毒(human adenovirus 3,HAdV-3)免提取核酸的重组酶介导的等温扩增(recmbinase acid amplification,RAA)实时荧光检测方法。方法 根据HAdV-3基因保守序列分别设计1对引物和1条探针,通过对免提核酸的条件摸索和优化,建立1种免提取核酸,重组酶介导的等温扩增实时荧光检测方法;通过对培养的毒株进行系列稀释,免提取核酸分析该方法的灵敏度;通过检测其他呼吸道病毒的原始样本,评价该方法的特异性;并检测HAdV-3临床样本,与传统的提核酸实时荧光定量PCR方法进行比较。结果 本研究建立的免提取核酸实时荧光RAA方法对10倍系列稀释的HAdV-3毒株进行检测,和实时荧光定量PCR方法相比,灵敏度相当,对应的最低浓度稀释样本的Ct值为36.87,对常见其他型别的呼吸道病毒检测无交叉反应。两种方法对56例HAdV-3阳性临床样本同时检测,结果完全一致。结论 本文首次报道了免提取核酸的实时荧光RAA检测HAdV-3的方法,该方法具有较高的灵敏度和特异性,适合应用于临床实验室及基层单位快速检测HAdV-3。
- 王瑞欢王瑞欢张益向星宇湛志飞李鑫娜申辛欣张瑞卿白雪丁段青霞凡国豪张红马学军
- 关键词：腺病毒3型
- 一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法
- 本发明提供了一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法，属于等温核酸扩增技术领域。本发明首先通过对呼吸道合胞病毒(RSV)基因测序和比对，设计了用于检测RSV的特异性引物对和探针，并设计了内参探针，其核苷酸序...
- 马学军申辛欣王智宏应清界李鑫娜齐菊菊
- 文献传递
- 2017年5月至12月河北省儿童病毒性脑炎病原学研究被引量：10
- 2019年
- 目的了解河北省儿童病毒性炎病原学特点。方法随机收集2017年5月2017年12月河北省儿童医院神经内科住院诊断为病毒性脑炎患儿的脑脊液样本399例,采用结合自动化工作站的实时荧光定量PCR方法和Sanger测序方法检测脑脊液中的病毒核酸。运用SPSS21. 0统计分析软件结合临床资料进行分析。不同月份EV引起的脑炎的感染率比较,采用行x列表卡方检验法进行分析。不同病毒引起的脑炎患者的MRI和脑电图阳性率比较采用Fisher确切概率检验法进行分析。不同病毒合并感染阳性率的比较采用Fisher确切概率进行分析。结果399例样本中80例阳性,检出阳性率20.05%,包括肠道病毒(Entervirus, EV ) 22例,甲型流感病毒(Influenza A virus, FluA )4 例,腮腺炎病毒(Mumps virus, MuV )3 例,单纯疱疹 1 型(Herpes simplex virus 1,HSV1)2 例,单纯疱疹 2 型(Herpes simplex virus 2, HSV2) 1 例,EB 病毒(Epstein - Barr virus, EBV ) 4 例,巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV) 7 例,带状疱疹病毒(Varicella-zoster Virus, VZV) 7 例,腺病毒(Adenovirus,AdV)8例,人疱疹病毒6型(Human herpesvirus 6,HHV6)14例。阳性样本中8例为合并感染,分别为EV 合并 HHV6 3 例,EV 合并乙性脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV, HHV2 合并 AdV 1 例,FluA合并HHV6 1例,MuV合并HHV6 1例,HSV1合并VZV 1例。河北省儿童EV病毒性脑炎高发于5月、6月(P = 0.016)。 HHV6病毒脑炎较非HHV6病毒脑炎易合并感染(P = 0.016);不同病毒引起的脑炎患者的MRI和脑电图阳性率均无统计学差异(P>0.05)。结论 EV是河北省儿童病毒性脑炎最常见的病原。FluA引起的脑炎在临床不容被忽视。
- 樊涛韩彦洁张瑞卿于盼辉赵莉齐菊菊李鑫娜王瑞欢孙一硕赵剑胡川泽王佶孙素真马学军
- 关键词：病毒性脑炎病原谱实时荧光定量PCR
- 环介导等温扩增技术诊断乙型肝炎病毒感染的Meta分析被引量：6
- 2017年
- 目的 通过Meta分析评价环介导等温扩增（LAMP）技术诊断乙型肝炎病毒（HBV）感染的效能.方法 检索数据库包括美国国立医学图书馆PubMed数据库、荷兰医学文EMBASE数据库、Cochrane临床试验数据库、万方知识服务平台、中国学术期刊全文数据库（CNKI）.时间限定为2000年1月至2016年10月,语种限为中文和英文.英文检索词包括：LAMP、Loop-mediated isothermal amplification、HBV、hepatitis B virus;中文检索词包括：环介导等温扩增技术、乙型肝炎病毒、乙肝病毒.采用主题词和自由词相结合的方法进行文献检索,同时对检索文献中提到的参考文献进行二次检索.最终纳入文献12篇.使用Stata 12.0软件进行发表偏倚检测;计算合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比（DOR）、综合受试者工作特征（SROC）曲线下面积和Q指数.结果 本研究最终纳入文献共12篇,共有1494份样本.采用随机效应模型计算合并效应量,分析结果显示,LAMP诊断HBV感染的合并灵敏度为0.922（95%CI：0.905~0.937）,合并特异度为0.860（95%CI：0.818~0.896）,合并阴性似然比为0.093（95%CI：0.048~0.182）,合并阳性似然比为15.400（95%CI：2.003~118.380）,DOR为311.090（95%CI：95.841~1009.800）;SROC曲线下面积为0.986（95%CI：0.974~0.998）,Q指数为0.949（95%CI：0.922~0.976）.Deek＆#39;s漏斗图检验结果提示无明显的发表偏倚（P=0.140）.结论 LAMP对诊断HBV感染的综合诊断能力较高.
- 周航宇陈晨李鑫娜马学军
- 关键词：核酸扩增技术META分析
- 埃博拉病毒扎伊尔亚型多引物自配引发等温扩增方法的建立被引量：8
- 2016年
- 鉴于目前埃博拉疫情在西非流行和输入国内的潜在风险,开发快速准确易普及的检测埃博拉病毒的方法对埃博拉防控具有重大意义。本文拟建立一种基于颜色判定简单、快速和灵敏的方法,即多引物自配引发等温扩增技术(isothermal multiple self-matching initiated amplification,IMSA)应用于埃博拉病毒扎伊尔亚型的检测。该技术设计了分别对应于埃博拉病毒扎伊尔型核蛋白(nuclear protein,NP)基因的7个区段的6条特异引物,在等温(63℃)条件下进行核酸扩增反应1小时,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色变化作为结果判定的标准。文中利用这种技术与RT-qPCR分别对含有目的片段的假病毒的系列稀释物以及模拟临床样本进行灵敏度分析,同时对30例健康人血浆以及登革病毒、日本脑炎病毒样本进行特异性分析。在塞拉利昂完成了81例埃博拉疑似病例血液样本的检测。结果显示RT-IMSA方法检测灵敏度与RT-qPCR方法的灵敏度相当,30例健康人血浆样本检测均为阴性,并且与登革病毒及日本脑炎病毒无交叉反应。与获得批准的荧光定量PCR试剂盒比较,RT-IMSA检测81例临床样本的结果为53例阳性,23例阴性,5例假阴性。灵敏度和特异性分别为91.4%和100%。因此,相较于RT-qPCR的高成本和复杂操作,RT-IMSA方法具有快速、简单的检测优势。
- 李鑫娜聂凯王佶张丹关丽刘军柯跃华周航宇马学军
- 关键词：假病毒
- 一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法
- 本发明提供了一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法，属于等温核酸扩增技术领域。本发明首先通过对呼吸道合胞病毒(RSV)基因测序和比对，设计了用于检测RSV的特异性引物对和探针，并设计了内参探针，其核苷酸序...
- 马学军申辛欣王智宏应清界李鑫娜齐菊菊
- 文献传递
- 实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增技术检测寨卡病毒方法的建立被引量：1
- 2020年
- 目的建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)技术检测寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的方法,以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法通过基因组序列比对,选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针,并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性,通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果建立的RT-RAA方法可在39℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增,检测系列稀释的ZIKV重组质粒,其95%检测限可达到15拷贝/反应,特异性强,与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应,且重复性好。结论本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法,具有反应迅速,无需精密仪器,操作简单等优点,适合于应急快速检测。
- 段青霞李鑫娜何小周申辛欣张瑞卿白雪丁凡国豪高源王金荣陈子巍张金艳马学军
- 基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测柯萨奇病毒A6型被引量：3
- 2015年
- 目的建立基于羟基萘酚蓝（hydroxynaphtholblue，HNB）颜色变化的简单、灵敏和快速的环介导逆转录等温扩增技术（RT—LAMP）检测方法，应用于柯萨奇病毒A6型（coxsackievirusA6，CV-A6）的检测。方法针对CV-A6的VPl基因设计6条特异引物，在等温条件下（63℃）进行50min扩增反应。扩增前在反应体系中加入HNB，通过观察颜色变化进行检测结果判定。使用多种肠道病毒进行特异性验证，使用梯度稀释的体外转录CV-A6全VP1基因RNA进行灵敏度分析，同时与实时荧光定量逆转录PCR（rRT—PCR）检测结果进行比较，并对92份手足口病患者临床标本进行检测。结果本研究建立的RT-LAMP方法对除CV-A6外的23种肠道病毒的检测结果均为阴性，灵敏度为100拷贝／反应，与rRT—PCR方法相当。在对92份手足口病临床标本的检测中，检测结果与rRT-PCR方法相符，Kappa值为1，灵敏度和特异性均为100％。结论本研究建立的针对CV-A6的LAMP检测方法，特异度高，灵敏度与rRT—PCR相当，有望应用于CV—A6感染的快速筛选，具有在基层医疗卫生机构和现场推广与应用的潜力。
- 关丽许松涛聂凯张丹李鑫娜许文波马学军
- 关键词：聚合酶链反应柯萨奇病毒感染
