范启明
- 作品数：8 被引量：23H指数：2
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省职业病防治重点实验室国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程理学更多>>
- 水通道蛋白4在1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿中表达研究被引量：13
- 2016年
- 目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)亚急性吸入所致中毒性脑水肿发生中的作用。方法无特定病原体级健康成年雌性SD大鼠,随机分为对照组(8只)、低剂量组(12只)和高剂量组(12只)。采用口鼻式动式吸入法染毒,3组大鼠1,2-DCE染毒剂量分别为0、600和1 800 mg/m3,连续7 d,8.0 h/d。染毒结束后,取大脑皮质行病理组织学检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测大脑皮质组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)、AQP4的mRNA相对表达水平,采用免疫印迹法检测大脑皮质组织中AQP4蛋白相对表达水平。结果病理组织学检查结果显示,低剂量组大鼠可见大脑皮质血管周围组织疏松,血管组织间隙扩大;高剂量组大鼠可见较明显的大脑皮质或血管周围组织疏松和空泡,程度较低剂量组严重。分别与对照组及低剂量组比较,高剂量组大鼠大脑皮质MMP2 mRNA相对表达水平均升高[(1.07±0.41)vs(1.56±0.55),(1.21±0.59)vs(1.56±0.55),P<0.05],AQP4 mRNA相对表达水平均下降[(1.03±0.25)vs(0.81±0.12),(1.00±0.20)vs(0.81±0.12),P<0.05];3组大鼠大脑皮质NKCC1 mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义[(1.03±0.31)vs(1.14±0.43)vs(1.36±0.50),P>0.05]。高剂量组大鼠大脑皮质AQP4蛋白相对表达水平低于对照组[(0.80±0.25)vs(1.19±0.42),P<0.05]。结论 1,2-DCE亚急性吸入所致大鼠脑水肿是以血管源性为主的混合型脑水肿,其发病机制与AQP4的表达量改变有关。
- 贾肖辉程浩徐丹丹范启明殷霄戎伟丰郑杰蔚黄曼琪曾丽海陆丰荣李国樑高洪彬王庆胡前胜黄振烈
- 关键词：1,2-二氯乙烷脑水肿水通道蛋白4基质金属蛋白酶2血管源性
- 短期低剂量AFB1染毒对Fisher 344大鼠肝脏miRNA表达谱的影响
- 目的：探究microRNAs在黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)致肝癌早期过程中的功能作用.方法：1.以剂量0.2mg·Kg-1(LD50的1/20)的AFB1对F344雄性大鼠进行腹腔注射,...
- 余浩辉张岩徐丹丹范启明王婷郭涛王庆
- 利用CRISPR/Cas9技术构建CYP2E1基因敲除的HEK293FT细胞系被引量：1
- 2017年
- 目的:利用CRISPR/Cas9系统在HEK293FT细胞系中敲除CYP2E1基因并探讨其在检测化学物毒性中的应用。方法:设计3对分别靶向CYP2E1基因第2、第3和第7外显子的sg RNA序列并构建PX461表达载体;将携带靶向CYP2E1的sg RNA表达载体转染至HEK293FT细胞中,通过SURVEYOR检测分析sg RNA的切割效率;利用有限稀释法获得CYP2E1敲除细胞株,通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测细胞株中CYP2E1的敲除效果;并检测其对N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性效应的影响。结果:SURVEYOR检测分析靶向CYP2E1基因第3外显子的sg RNA的切割效率为23%;成功构建了2株CYP2E1基因敲除的细胞株,实时荧光定量PCR结果显示CYP2E1 m RNA表达下降,蛋白印迹结果显示CYP2E1蛋白无表达;CYP2E1基因敲除会显著降低N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性。结论:通过CRISPR/Cas9构建出CYP2E1稳定敲除的肾细胞系,为研究CYP2E1的功能和作用机制提供了有效的工具。
- 范启明李若碧王飞郭涛王婷李道传邢秀梅陈丽萍陈雯王庆
- 关键词：CYP2E1基因敲除
- 一种用于敲除人CYP2E1基因的sgRNA序列、CYP2E1基因缺失细胞株的构建方法及其应用
- 本发明提供了一种用于敲除人CYP2E1基因的sgRNA序列，所述sgRNA的靶DNA序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示序列中的至少一条。本发明还提供了一种敲除人胚胎肾脏细胞CYP2E1基因的方法，为...
- 王庆范启明郭涛黄振烈王婷
- 文献传递
- CYP3A4基因启动子受AFB1调控位点的鉴定
- 2015年
- 目的构建不同长度人CYP3A4基因启动子荧光素酶报告质粒并予鉴定,检测L02细胞中各荧光素酶报告质粒相对荧光素酶活性,并分析AFB1处理对其影响,找出AFB1调控人CYP3A4基因可能的启动子区域。方法采用PCR技术扩增不同长度人CYP3A4基因启动子片段,将其插入荧光素酶报告质粒p GL3-basic中荧光素酶编码序列之前,构建含不同长度CYP3A4启动子的报告质粒p GL3-basic-CYP3A4-1~7,将报告质粒转染L02细胞,检测其荧光素酶活性来表示CYP3A4对应启动子片段的转录活性。检测各报告质粒在AFB1处理下与DMSO对照相比荧光素酶活性上升的比例,找出AFB1上调CYP3A4启动子转录活性的作用区域。结果报告质粒测序结果证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将报告质粒转染L02细胞,AFB1和DMSO处理后检测结果表明p GL3-basic-CYP3A4-1~6和p GL3-basic-CYP3A4-7相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异有统计学意义（P〈0.05）,p GL3-basic-CYP3A4-1至p GL3-basic-CYP3A4-6这6个报告质粒相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论成功构建了人CYP3A4基因不同长度启动子片段的荧光素酶报告质粒,并初步确定AFB1可以通过调控CYP3A4启动子-200~0 nt的结合位点来上调CYP3A4的转录活性。
- 张岩徐丹丹范启明陈雯王庆
- 关键词：黄曲霉毒素B1CYP3A4启动子
- 1,2-二氯乙烷对SD大鼠亚急性吸入毒性研究被引量：11
- 2015年
- 目的确定1,2-二氯乙烷（1,2-DCE）亚急性吸入的毒性作用和靶器官。方法无特定病原体级健康成年SD大鼠64只,雌雄各半,随机分为对照组、低剂量组和高剂量组。采用口鼻式动式吸入染毒法,低和高剂量组予质量浓度为600和1 800 mg/m3的1,2-DCE染毒8 h/d,连续7 d;对照组吸入新鲜空气。染毒期间称量大鼠体质量,观察其活动状况。实验结束后,检测大鼠血常规和血清血生化指标;解剖、分离主要脏器计算脏器系数,并进行组织病理学检查。结果染毒后第4~7天,高剂量组雌性和雄性大鼠体质量均分别低于同性别对照组（P〈0.05）,并从染毒后第3天开始出现不同程度的体质量负增长（P〈0.05）。雌性高剂量组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰基转移酶、乳酸脱氢酶的活力和甘油三酯、尿素氮、肌酐的水平均高于雌性对照组（P〈0.05）。高剂量组大鼠脑、肝脏、肺脏的脏器系数均分别高于对照组（P〈0.05）;与雌性对照组比较,雌性高剂量组大鼠心脏、肾脏和肾上腺的脏器系数均升高（P〈0.05）,脾脏脏器系数下降（P〈0.05）;雄性高剂量组大鼠肾脏和肾上腺的脏器系数均高于雄性对照组（P〈0.05）。肉眼可见大鼠脑、肝脏和肾脏大体形态学改变。组织病理学检查结果显示,高剂量组部分大鼠出现大脑皮质和血管周围空泡化,小脑颗粒细胞坏死等脑水肿病变;部分大鼠肝脏可见肝细胞水肿;部分大鼠肾脏可见肾小管蛋白沉积、肾小管上皮细胞水肿、肾小管扩张等病理改变,并可见肾小管上皮细胞异型性。各组大鼠血常规指标未出现有生物学意义的改变;低剂量组大鼠血清血生化指标基本未出现有生物学意义的改变。结论 1,2-DCE亚急性吸入可引起大鼠脑水肿、肝脏和肾脏损害;大脑、小脑、肝脏和肾脏是1,2-DCE亚急性吸入毒性作用的靶器官;1,2-DCE毒作用存在性别差异。
- 殷霄贾肖辉程浩徐丹丹范启明戎伟丰郑杰蔚黄曼琪陈铿铿曾丽海陆丰荣赖关朝黄振烈
- 关键词：脏器系数靶器官肾脏
- 1,2-二氯乙烷吸入染毒对SD大鼠肝脏遗传损伤效应及代谢酶表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)吸入染毒对SD大鼠肝脏的遗传损伤作用及代谢酶表达的影响。方法SPF级健康成年SD雄性大鼠30只,按体重随机分为对照组(n=8)、低剂量组(n=11)和高剂量组(n=11)。采用口鼻式动式吸入染毒法,低、高剂量组分别给予质量浓度为600和1 800 mg/m^3的1,2-DCE染毒8h/d,连续7d;对照组采取相同处理方式吸入正常空气。实验结束后,利用实时荧光定量PCR技术检测代谢酶及遗传损伤相关指标p53的m RNA表达改变。结果实时荧光定量PCR结果显示,1,2-DCE染毒后高剂量组大鼠肝脏中Ⅰ相代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)、乙醇脱氢酶1(ADH1)、乙醛脱氢酶3α1(ALDH3α1)、Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽S-转移酶A1(GSTA1)、谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)、谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)以及遗传损伤相关基因p53 m RNA表达均被诱导升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CYP2E1、ADH1、ALDH3α1、GSTA1、GSTM1和GSTA3是1,2-DCE的主要代谢酶,其表达量可以被1,2-DCE染毒诱导而发生改变,p53信号通路所介导的遗传损伤应激可能参与了1,2-DCE诱导大鼠肝细胞坏死或凋亡的过程。
- 徐丹丹范启明贾肖辉王婷郭涛曾妮王飞殷宵黄曼琪黄振烈王庆
- 关键词：1,2-二氯乙烷代谢酶
- 一种用于敲除人CYP2E1基因的sgRNA序列、CYP2E1基因缺失细胞株的构建方法及其应用
- 本发明提供了一种用于敲除人CYP2E1基因的sgRNA序列，所述sgRNA的靶DNA序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示序列中的至少一条。本发明还提供了一种敲除人胚胎肾脏细胞CYP2E1基因的方法，为...
- 王庆范启明郭涛黄振烈王婷
- 文献传递
