目的研究在大肠埃希菌（Escherichia coli，Ecoli）表达系统中表达和纯化7型庚型肝炎病毒（GBvirus C genotype 7，GBV．CG7）非结构蛋白NS3的149个氨基酸（NS3—149），并对其进行反应原性鉴定。方法将NS3．149基因克隆人原核表达载体pET-28a，并转化人BL21，利用异丙基．B．D．硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导其表达。用Ni。’柱对融合蛋白NS3．149进行纯化，最后经Western印迹检测其抗原特异性和反应原性。结果①成功构建了pET-28a-NS3-149重组质粒，该重组质粒转化入BL21后．融合蛋白NS3-149表达的最佳条件为在32℃条件下，A600nm等于0．8时，用1mmol／L的IPTG诱导6h后，融合蛋白表达量达到最高。经过SDS—PAGE分析，融合蛋白以包涵体的形式表达，其大小约27kD，与预期大小基本一致；②用感染GBV．C7型的人阳性血清经Western印迹鉴定，融合蛋白NS3-149具有较好的反应原性．另外，其与GBV-C容易发生共同感染的HIV或HCV阳性血清无非特异性交叉反应，说明了融合蛋白NS3-149具有较好的特异性。结论本实验在大肠埃希菌中表达并纯化并获得具有良好反应原性的GBV-C7型融合蛋白NS3-149，为进一步对GBV-C进行抗体检测的流行病学调查研究奠定了重要的前期工作基础。
