卢孔杰
- 作品数：9 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划云南省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 树鼩CD4及IL-6分子的克隆及分析
- 2015年
- 目的克隆野生型中缅树鼩的CD4及IL-6分子,并分析其核苷酸、氨基酸序列的多态性及重要的功能位点。方法经野生型树鼩尾静脉采血,分离外周血单核淋巴细胞,经植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)刺激24 h后,提取细胞总RNA,以其为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物插入p MD-19T载体,提取阳性重组质粒,经双酶切鉴定及测序;采用Lasergene分析目的基因核苷酸及氨基酸序列,并构建进化树,分析野生型树鼩与已知中缅树鼩的亲缘关系。结果野生型树鼩CD4全长编码序列的开放阅读框长度为1 365 bp,编码454个氨基酸,IL-6全长编码序列的开放阅读框为627 bp,编码208个氨基酸,22只野生型树鼩成功克隆出CD4分子,23只野生型树鼩成功克隆出IL-6分子。不同野生型中缅树鼩的CD4及IL-6分子有不同程度的核苷酸和氨基酸位点的突变,但分别有35%和26.7%的碱基突变为同义突变,且发生非同义突变的位点对树鼩CD4和IL-6分子重要的功能位点无影响。由CD4核苷酸及氨基酸序列构建的系统进化树基本一致;由IL-6核苷酸及氨基酸序列构建的系统进化树中,23只野生树鼩分为2个分支。结论 CD4和IL-6分子具有重要功能的氨基酸位点是保守稳定的,为今后树鼩CD4和IL-6单克隆抗体的制备及树鼩实验动物模型的建立奠定了基础。
- 任芳芳徐婧雯张雪梅吴忠香马娜卢孔杰董少忠
- 关键词：树鼩CD4IL-6克隆系统进化树
- 抗树鼩CD4分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及一种抗树鼩CD4分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TS‑CD4‑38，保藏号为CCTCC NO:C20...
- 董少忠张雪梅徐靖雯吴忠香卢孔杰代解杰孙晓梅宋杰李慧巩蔚严丽蔚朱文兵
- 狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析被引量：3
- 2017年
- 表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。
- 严丽蔚巩蔚朱文兵张雪梅徐婧雯吴忠香卢孔杰孙明董少忠
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白流式细胞术
- 树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测被引量：1
- 2016年
- 目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（OH）3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）的比较结果为：弗氏佐剂组（GMT：97 420）＞Al（OH）3佐剂组（GMT：67 202）＞MF59佐剂组（GMT：55 128）;其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组（P＜0.001）;Al（OH）3组显著高于原蛋白组（P＜0.01）;而MF59组显著高于原蛋白组（P＜0.05）.结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.
- 卢孔杰徐婧雯张雪梅吴忠香任芳芳马娜巩蔚严丽蔚朱文兵董少忠
- 关键词：树鼩纯化多克隆抗体
- 抗树鼩干扰素γ单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及一种抗树鼩干扰素γ单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TS‑IFNγ‑13，保藏号为CCTCC...
- 董少忠张雪梅徐靖雯吴忠香卢孔杰代解杰孙晓梅宋杰李慧巩蔚严丽蔚朱文兵
- 文献传递
- 狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价被引量：2
- 2016年
- 目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85%,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1。结论成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础。
- 巩蔚严丽蔚朱文兵张雪梅徐婧雯吴忠香卢孔杰孙明董少忠
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白原核细胞酶联免疫吸附测定
- 抗树鼩干扰素γ单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及一种抗树鼩干扰素γ单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TS‑IFNγ‑13，保藏号为CCTCC...
- 董少忠张雪梅徐靖雯吴忠香卢孔杰代解杰孙晓梅宋杰李慧巩蔚严丽蔚朱文兵
- 抗树鼩CD4分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及一种抗树鼩CD4分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TS‑CD4‑38，保藏号为CCTCC NO:C20...
- 董少忠张雪梅徐靖雯吴忠香卢孔杰代解杰孙晓梅宋杰李慧巩蔚严丽蔚朱文兵
- 文献传递
- 树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测
- 树鼩是一种酷似松鼠，跟人类有较近的亲缘关系的哺乳纲攀鼩目动物。因其体型较小、容易驯养、且繁殖周期较短、饲养成本低等优势，树鼩慢慢地被人类用于多种感染性疾病模型的建立，如乙型肝炎病毒感染模型、肠道病毒EV71型感染模型等。...
- 卢孔杰
- 关键词：病毒感染多克隆抗体
