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沉默PPARg2对BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响及机制研究: 目的：过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorsγ,PPARγ)一直被认为是促进成脂分化的关键转录因子,并具有抑制成骨的作用。但研究发现骨形态发...; 张然熙王星刘洋李浩陈亮汪洋尹良军邓忠良

冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制被引量：2: 2016年; 目的研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制。方法以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化。结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P<0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P<0.05)。结论ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关。; 邹翔王星张然熙皮昌军田冬冬吴念何百成邓忠良; 关键词：冬凌草甲素骨肉瘤增殖凋亡 WNT/Β-CATENIN

神经生长因子增强骨形态蛋白-9诱导鼠胚胎成纤维细胞成骨分化的作用被引量：5: 2016年; 目的研究神经生长因子（NGF）对骨形态发生蛋白-9（BMP-9）诱导鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）成骨分化的影响。方法构建重组腺病毒转染MEFs，分为NGF组、BMP-9组及NGF联合BMP-9组（联合组），以绿色荧光蛋白（GFP）处理为对照组。采用细胞化学染色以及读数检测各组第3，5天碱性磷酸酶（ATP）活性变化，RT—PCR检测第9天骨桥素（OPN）mRNA表达水平，Westernblot、免疫细胞化学检测各组第9天OPN蛋白表达水平；茜素红染色检测各组第14天钙盐沉积水平。结果BMP-9组ALP活性升高，但NGF组ALP活性无明显变化，联合组ALP活性明显强于NGF组或BMP-9组。对照组、BMP-9组、NGF组及联合组OPNmRNA表达水平分别为0．92±0．03，1．28±0．04，0．94±0．03，1．62±0．04（F=214．60，P〈0．01）．与BMP-9组比较，联合组OPNmRNA相对表达水平明显升高（t=10．569，P〈0．05）。Westernblot检测结果显示，对照组、BMP-9组、NGF组及联合组OPN蛋白相对表达水平分别0．604-0．05，0．844-0．03，0．55±0．05，1．274-0．05（F：162．50，P〈0．01），与BMP-9组比较，联合组OPN蛋白相对表达水平明显升高（t=11．778，P〈0．05）。免疫组织化学染色结果显示，对照组、BMP-9组、NGF组及联合组OPN蛋白相对表达水平相对密度分别为3．63±0．17，6．27±0．30，3．86±0．18，10．16±0．18（F=602．60，P〈0．01），与BMP-9组比较，联合组OPN蛋白相对表达水平明显升高（t=22．280，P〈0．05）。联合组钙盐沉积水平明显高于BMP-9组或NGF组。结论NGF能协同增强BMP-9诱导MEFs的成骨分化作用。; 皮昌军邹翔张然熙吴念何百成邓忠良陈亮; 关键词：神经生长因子骨形态发生蛋白类骨生成间充质干细胞

橄榄苦苷对破骨细胞的分化以及骨吸收功能的影响被引量：2: 2017年; 目的探讨橄榄苦苷(oleuropein)对破骨细胞分化成熟以及骨吸收功能的影响及其可能机制。方法把不同浓度的橄榄苦苷(12.5、25、50μmol/L)分别加入由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的体外破骨细胞培养体系中,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resist ant acid phosphatase,TRAP)染色方法观察呈TRAP阳性的多核细胞;RAW264.7细胞也用RANKL诱导,用流式细胞仪分析橄榄苦苷对破骨细胞凋亡的影响;在扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)下观察骨吸收陷窝,并用图像分析软件统计其面积。采用Western blot法检测橄榄苦苷对破骨细胞特异性蛋白组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、激活T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATC1)及相关信号通路蛋白表达的影响。结果 TRAP染色结果显示,橄榄苦苷能显著抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成,且呈浓度依赖性(P<0.05);橄榄苦苷能下调破骨细胞特异性蛋白CTSK的蛋白表达水平(P<0.05);橄榄苦苷对破骨细胞的凋亡无明显影响(P>0.05);橄榄苦苷能显著减少骨吸收陷窝的面积(P<0.05);橄榄苦苷能够下调NFATC1及磷酸化p38(p-p38)的表达(P<0.05)。结论橄榄苦苷可以抑制由RANKL诱导的破骨细胞分化以及破骨细胞的骨吸收功能,可能和橄榄苦苷能够下调p38/MAPK信号通路有关。; 陈侯磬汪洋刘扬田冬冬袁威张然熙邓忠良; 关键词：橄榄苦苷 RAW264.7细胞破骨细胞分化骨吸收

ATRA与BMP9对人骨肉瘤细胞增殖及分化作用的研究被引量：1: 2017年; 目的研究全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)与骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人骨肉瘤细胞增殖及分化的影响。方法利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分析细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹实验(Western blot)检测细胞增殖和成骨相关指标;半定量PCR及Western blot分析ATRA和ATRA与BMP9联用处理143B细胞株后对BMP9表达水平的影响。结果在人骨肉瘤143B细胞株中,与对照组相比,ATRA能明显抑制细胞增殖(P<0.05),并促使细胞周期阻滞在G1期(P<0.05),下调PCNA的蛋白水平,并呈浓度依赖性;ATRA能呈浓度依赖性增加晚期成骨指标OCN和OPN的蛋白水平(P<0.05);ATRA能上调BMP9的m RNA及蛋白水平,并呈浓度依赖性(P<0.05);单用BMP9并不能上调OCN和OPN表达,并促进其增殖(P<0.05),但与ATRA联用时,能够增强ATRA诱导的相关成骨指标表达和抗增殖作用(P<0.05)。结论ATRA对143B细胞的增殖具有抑制作用并诱导其成骨分化,并可能恢复BMP9的成骨诱导能力。; 吴念张平田冬冬张然熙陈前昭何百成尹良军; 关键词：骨肉瘤全反式维甲酸增殖成骨分化

p38MAPK在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用被引量：1: 2015年; 目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用。方法:提取小鼠骨髓细胞,接种于24孔板后分为3组:1空白对照组;2核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)组:每孔加入50 ng/ml RANKL;3钛颗粒+RANKL组:每孔加入0.01%钛颗粒悬液(0.1 mg/ml)及RANKL 50 ng/ml,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定和计数破骨细胞。Western blot检测p38、磷酸化p38的表达水平,通过腺病毒介导的p38 siRNA沉默p38的表达后,观察破骨细胞数目及相关蛋白RANK的变化情况。结果:各组破骨细胞计数结果分别为:空白对照组2.0±0.8,RANKL组62.8±5.6,钛颗粒+RANKL组93.0±8.8(F=235.193,P=0.000)。RANKL组高于空白对照组(P=0.000),钛颗粒+RANKL组明显高于RANKL组(P=0.000)。Western blot结果显示钛颗粒能明显提高p38的磷酸化水平(p-p38/p38相对值:空白对照组0.29±0.05,RANKL组0.64±0.05,钛颗粒+RANKL组0.87±0.05,F=106.491,P=0.000,钛颗粒+RANKL组高于空白对照组和RANKL组P1=0.000,P2=0.001)。转染腺病毒介导的p38 siRNA后,Ad-sip38干扰组RANK蛋白的表达水平低于对照组和Ad-RFP组,破骨细胞数目也明显低于对照组和Ad-RFP组(破骨细胞计数:对照组99.8±13.5,Ad-RFP组95.8±7.1,Ad-sip38组3.8±2.5,F=148.654,P=0.000,对照组与Ad-RFP组无明显差异P=0.541,Ad-sip38处理组与对照组和空白病毒组比较均P=0.000)。结论:p38 MAPK在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中起重要的作用。; 李浩汪洋张然熙刘扬邓忠良; 关键词：钛颗粒 P38丝裂原活化蛋白激酶破骨细胞 SIRNA

沉默PPARγ2对BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响及机制研究: 邓忠良张然熙李浩汪洋王星刘洋陈亮

Wnt/β-catenin信号对骨形态发生蛋白9诱导前脂肪细胞3T3-L1成骨和成脂分化的影响: 目的：研究和确认Wnt/β-catenin信号在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导前脂肪细胞成骨和成脂分化中的作用。方法：用绿色荧光蛋白(GFP)或BMP9编码序列的重组腺毒感染3T3-L1前脂肪细胞，利用RT-PCR和W...; 刘洋邓忠良王星张然熙陈亮; 关键词：前脂肪细胞成骨分化成脂分化

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张然熙

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