陆胜利
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 海洋放线菌Salinispora areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活测定被引量：2
- 2014年
- [目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的酶动力学参数为:Km=(0.040 33±0.003 67)mmol/L,Vmax=(2.135 05±0.029 43)μmol/(min·L),kcat=(14.233 6±0.196 2)min;Phe为底物时:Km=(0.027 65±0.001 51)mmol/L,Vmax=(1.558 06±0.009 7)μmol/(min·L),kcat=(10.387 1±0.064 6)min。[结论]丰富洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS腺苷化结构域的底物特异性和密码子领域的研究,为组合生物学和体外酶系合成NRPs提供依据。
- 陆胜利祁超
- 关键词：海洋放线菌底物特异性
- 胞外基质材料木糖葡聚糖对HepG2细胞的黏附及相关功能的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:研究胞外基质(ECM)材料木糖葡聚糖(XG)对人肝癌细胞系HepG2细胞在细胞培养板上的贴壁性及对微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率、NH_4^+清除速率、细胞增殖速率和间隙连接蛋白(Cx32)、细胞黏附分子(E-cadherin)表达的影响。方法:将HepG2细胞接种于不同浓度XG(0,0.5,1,4,6mg/ml)包被的细胞培养板上,孵育4h后收集贴壁细胞,BCA法测贴壁细胞总蛋白量进而测定细胞贴壁率;利用自制装置制备包被HepG细胞的海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸(APA)微囊并在培养微囊第6,10,14天以Human Serum Albumin Elisa Kit、Ammonia Assay Kit分别测定培养液中人血清白蛋白(HSA)和处理溶液中NH_4^+的浓度,检测微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率和NH_4^+清除速率;微囊培养1,2,3d后裂解微囊收集HepG2细胞并以RT-PCR方法检测细胞内Cx32和E-cadherin的表达情况。结果:HepG2细胞在XG包被的细胞培养板上的贴壁率随XG浓度增大呈递增趋势,同时微囊内细胞数随XG浓度增大、培养时间延长而增加,说明XG可促进细胞/基质间相互作用,促进细胞生长增殖;微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率与NH_4^+清除速率在XG浓度为1 mg/ml时达到最大且较空白组高,说明XG对细胞合成及代谢功能有一定促进作用;加入XG的微囊内细胞表达Cx32、E-cadherin的时间较空白组提前,说明XG的存在促进了HepG2细胞肝脏特有功能的维持和体现。结论:XG对微囊化HepG2细胞的增殖及肝脏特有功能的体现都具有一定促进作用。
- 陆胜利祁超
- 关键词：肝组织工程海藻酸微囊化
- 海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域研究进展被引量：2
- 2015年
- 概述了海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域的研究进展.
- 陆胜利祁超
- 关键词：海洋放线菌代谢产物
- 海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因的克隆、表达和纯化被引量：3
- 2014年
- 海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和表达及蛋白纯化.分别构建了pET-28a-sare 0357和pGEX-KG-sare 0357重组质粒,并转化E.coli BL21(DE3)进行不同诱导条件的诱导表达,sare 0357基因均以包涵体的形式表达.收集Sare0357重组蛋白包涵体,选取6mol/L的盐酸胍对其进行变性并将变性后的重组蛋白进行镍柱纯化.得到了可溶性的Sare0357融合蛋白.
- 陆胜利祁超
- 关键词：海洋放线菌
- 人参皂苷通过促进自噬改善地塞米松降低C2C12细胞葡萄糖摄取的作用及机制研究
- 2019年
- 目的探讨人参皂苷促进地塞米松(dexamethasone,DEX)导致的小鼠骨骼肌细胞(C2C12)葡萄糖摄取降低的作用及机制。方法利用DEX作用于分化成熟的C2C12细胞,通过MTT法检测细胞存活率、紫外分光光度法检测细胞葡萄糖摄取,建立葡萄糖摄取损伤模型;加入人参皂苷后,检测人参皂苷对DEX引起的细胞存活率和葡萄糖摄取降低的作用,Western blot法检测葡萄糖摄取通路相关蛋白AMPK的磷酸化和GLUT4的表达,通过转染建立LC3高表达的C2C12稳定转染细胞株,并通过观察自噬小体数量的变化和自噬相关蛋白的表达检测其自噬水平。结果DEX可降低C2C12的细胞存活率、葡萄糖摄取和自噬水平。人参皂苷能改善DEX降低过的C2C12细胞存活率,通过激活AMPK/GLUT4通路恢复C2C12细胞的葡萄糖摄取并提高其自噬水平。结论人参皂苷可通过促进自噬改善DEX降低的C2C12细胞的葡萄糖摄取。
- 陆胜利
- 关键词：人参皂苷自噬葡萄糖摄取C2C12
