刘立明
- 作品数：162 被引量：530H指数：13
- 供职机构：江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学环境科学与工程更多>>
- 酶法生产L-高苯丙氨酸的研究进展
- 2023年
- L-高苯丙氨酸(L-homophenylalanine,L-HPA)作为一种重要的非天然氨基酸,是合成治疗高血压的普利类药物等的关键中间体,具有广阔的市场前景。目前L-高苯丙氨酸的合成主要依赖于化学法,但化学合成L-高苯丙氨酸具有原料昂贵、步骤繁琐和污染严重等缺点,限制了广泛应用。因此,国内外研究者对L-高苯丙氨酸的酶法生产进行了深入的研究。本文就目前酶法合成L-高苯丙氨酸的工艺,包括脱氢酶法、转氨酶法、海因酶法和脱羧酶法的研究进展进行了综述,为酶法合成L-高苯丙氨酸提供一定的借鉴,为最终实现L-高苯丙氨酸的酶法工业化生产奠定基础。
- 高登科宋伟魏婉清黄康平吴静刘立明
- 关键词：生物催化
- 基于文献挖掘的巨大芽胞杆菌代谢网络模型的构建与分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】通过挖掘实验性文献,建立巨大芽胞杆菌事实型代谢网络模型,以详尽解析生理特性,优化其生理功能。【方法】从PubMed、Derwent Innovations Index、中国知网等公共文献(专利)数据库中获取与巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)相关的实验性文献建立本地文献数据库。采用文献挖掘工具获取功能基因、酶、代谢物和生化反应等信息,以其为基础构建代谢网络粗模型,进一步借助KEGG等数据库修正以及Matlab程序的模拟得到精细模型(系统生物学标记语言的形式)。【结果】最终的精细模型共有292个生化反应、378个代谢物、220个酶和217个基因。以1.62 mmol/g cell/h的葡萄糖底物吸收速率为限制性条件,模拟的菌体比生长速率为0.089 h-1,略低于实验值0.11 h-1。此外,嘧啶代谢途径的单基因敲除模拟结果表明,准确率为90%。【结论】该代谢网络模型涵盖了中心代谢途径、维生素B12合成途径和氨基酸代谢途径,并在一定程度上反映了营养底物与基因对巨大芽胞杆菌生长性能的影响。
- 周冒达邹伟刘立明陈坚
- 关键词：巨大芽胞杆菌
- 高产3-羟基丁酮解淀粉芽孢杆菌的选育及发酵优化被引量：4
- 2018年
- 3-羟基丁酮(Acetoin)作为一种重要的食用香料和平台化合物被广泛应用于医药、食品等领域。为改善解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens的3-羟基丁酮生产能力,采用常压室温等离子体(ARTP)和^(60)Coγ射线进行复合诱变,以3-羟基丁酮产量为分析指标,筛选获得最优突变株B.amyloliquefaciens H-5,3-羟基丁酮产量为68.2 g/L。为进一步实现3-羟基丁酮的高效生产,对此突变株进行5 L发酵罐水平的培养条件优化,并于30 L发酵罐上进行放大培养,最终3-羟基丁酮产量达85.2 g/L,较出发菌株B.amyloliquefaciens FMME088提高了26.8%。上述研究结果表明,ARTP和^(60)Coγ射线复合诱变能够有效获得高产菌株,该突变株具有较高的工业化微生物发酵生产3-羟基丁酮的潜能。
- 王诗卉罗秋玲刘佳刘佳陈修来
- 关键词：解淀粉芽孢杆菌3-羟基丁酮发酵条件优化
- 一种可促进重组蛋白表达量和稳定性的多功能纯化标签的开发与利用被引量：1
- 2019年
- 自组装双亲短肽(Self-assembling amphipathic peptides,SAPs)是一类亲疏水氨基酸按一定规律分布、具有自聚合效应的短肽,融合在酶蛋白N端时,具有促进表达和稳定化的功能。根据前期研究结论,设计一条全新的基于SAPs (S1vw,HNANARARHNANARARHNANARARHNARARAR)的可促进融合蛋白表达和稳定性,并可用于镍柱亲和层析的多功能短肽标签,在大肠杆菌表达系统中,将S1vw以PT-linker(PTPPTTPTPPTTPTP)融合在碱性果胶酶(Alkaline polygalacturonate lyase,PGL)、脂肪氧合酶(Lipoxygenase,LOX)及绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的N末端时,与对应的野生型相比,PGL及LOX的粗酶活分别提高了3.1倍和1.89倍,GFP的荧光强度提高了16.22倍。S1vw的3种融合酶均可用镍柱进行亲和纯化,并具有较高的回收率。PGL及LOX在对应的热处理条件下,与野生型相比,半衰期分别提高了2.16倍和3.2倍。将GFP-S1vw在枯草芽孢杆菌及毕赤酵母表达系统中表达,发现在枯草芽孢杆菌中融合蛋白表达量提高明显,但在毕赤酵母中表达量几乎没有改变。说明在原核表达体系中,S1vw可作为一种新型的促表达、稳定化及可纯化的多功能标签。
- 赵伟欣刘松刘立明陈坚堵国成
- 关键词：融合蛋白表达量
- 细菌Dietzia sp.DQ12-45-1b中两种长链烷烃羟化酶基因的鉴定被引量：2
- 2015年
- 细菌Dietzia sp.DQ12-45-1b是一株高效石油降解菌,从中已经鉴定了编码膜整合烷烃羟化酶(Alk B)和细胞色素P450类CYP153烷烃羟化酶的基因alk W1和CYP153,该菌能产生不同的表面活性剂以降解不同碳链长度的烷烃,但在不同时期对不同碳源进行降解的机制仍不清楚.通过以二十八烷(C28)为单一碳源培养alk W1缺陷的突变株M 5-5,发现alk W1缺陷降低了菌株对C28的降解能力,但仍具有降解C28的能力.通过对DQ12-45-1b菌株全基因组信息分析,并运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术,鉴定了两种长链烷烃羟化酶基因,其中G1的氨基酸序列与Acinetobacter sp.DSM17874 alm A的相似性是50%,G2的氨基酸序列与Geobacillus thermodenitrifi cans NG80-2 lad A的相似性是48%.同时,发现Dietzia sp.E1存在基因G1的同源基因(G1α)和G2的同源基因(G2α和G2β),其中基因G1α与G1的相似性是71%,基因G2α、G2β与G2的相似性分别是34%、87%.Real-time PCR分析表明,在Dietzia sp.DQ12-45-1b及突变株M 5-5中,基因G1和G2的转录水平均因C28的诱导而显著上调.上述对alm A和lad A同源基因的鉴定表明,Dietzia sp.DQ12-45-1b具有独特的烷烃降解多酶体系,是目前报道的烷烃羟化酶最多的细菌之一.
- 马冬玲聂勇吴晓磊刘立明
- 关键词：长链烷烃LADA生物降解
- 氧化胁迫对Alkalibacterium sp.F26防御酶和辅因子的影响(英文)被引量：1
- 2008年
- 将一株能够高产过氧化氢酶的低度嗜盐嗜碱菌Alkalibacterium sp.F26作为模式微生物,采用高效液相色谱技术测定胞内代谢物浓度,研究氧化胁迫对其防御酶活性和辅因子的影响。研究结果表明:相比低浓度H2O2(<1mmol/L)胁迫,此菌株在高浓度H2O2(>1mmol/L)胁迫下的应答表现更为明显:经3mmol/LH2O2胁迫后胞内CAT酶活为106.54U/mgprotein,是对照产量的1.76倍;ATP浓度则从对照浓度20.55μmol/L下降到17.80μmol/L;NAD+浓度自对照样品的69.89μmol/L减少至31.77μmol/L。由于ATP和NAD+浓度的减少,相比未经过H2O2胁迫菌体,细胞能荷值EC从0.77降低至0.68,NADH/NAD+则从0.08增加至0.41。然而,这种应答机制在细胞受到低浓度H2O2的胁迫后并不明显:除发现100μmol/LH2O2能够导致细胞防御机制的激活而使胞内ATP浓度相比对照有所增加的情况外,经50μmol/L和500μmol/LH2O2胁迫后胞内ATP水平从对照的22.69μmol/L只下降到22.38μmol/L和13.70μmol/L;并且此种胁迫条件下NADH浓度变化也不显著。
- 段菁菁刘立明华兆哲陈坚
- 关键词：NADHNAD^+
- 微生物生产3-羟基丁酮研究进展被引量：9
- 2011年
- 3-羟基丁酮是一种重要的化学合成中间体和多功能材料,广泛应用于食品、制药、化工等领域。相比化学合成法和生物酶转化法,微生物发酵法具有低成本、高纯度、高产率等特点。本文在详细总结微生物发酵生产3-羟基丁酮在菌种选育、代谢机制以及高产策略等方面研究进展的基础上,展望了微生物发酵法生产3-羟基丁酮的优势和发展方向。
- 李树波高翔刘立明陈坚
- 关键词：发酵3-羟基丁酮代谢机制
- 酶法转化生产α-酮酸的研究进展
- 2019年
- α-酮酸是一种同时含有羧基和酮基的双官能团有机化合物,广泛应用于食品、药品和化妆品等行业。为了满足环境友好、安全高效和可持续发展的社会要求,利用酶转化法生产α-酮酸受到人们的广泛关注。文中从酶的筛选、酶的改造以及酶的转化条件优化3个方面介绍丙酮酸、α-酮戊二酸、酮亮氨酸、酮缬氨酸、苯丙酮酸和酮蛋氨酸酶法合成的研究状况,并展望了α-酮酸进一步高效生产的发展方向。
- 张权宋伟张灿裴杉杉陈修来刘佳罗秋玲刘立明
- 关键词：Α-酮酸酶转化蛋白质工程
- 基于系统生物学研究维生素C工业生产菌株
- ＜正＞维生素C是我国重要的大宗发酵产品之一,产量约占全球的80%以上。二步发酵法是我国主要的维生素C生产方法,其生产过程的核心在于运用一个混菌发酵系统将山梨糖转化为维生素C前体物质2-酮基古龙酸（2-keto-L-gul...
- 邹伟刘立明陈坚
- 文献传递
- 异养微生物固定CO_(2)的合成生物学研究进展被引量：3
- 2022年
- 人类活动造成大气二氧化碳(CO_(2))浓度不断升高,使当今世界面临着气候变化的重大危机。微生物CO_(2)固定为实现地球“碳中和”提供了一条有前景的绿色发展路线。与自养微生物相比,异养微生物具有更快的生长速度和更先进的遗传工具,但是其固定CO_(2)的能力还很有限。近年来,基于合成生物学技术强化异养微生物CO_(2)固定受到诸多关注,主要包括优化能量供给、改造羧化途径以及基于异养微生物间接固定CO_(2)。本综述将围绕上述3个方面重点讨论异养微生物CO_(2)固定的研究进展,为将来更好地利用微生物CO_(2)固定技术实现“碳达峰、碳中和”提供参考。
- 胡贵鹏宋伟高聪郭亮陈修来刘立明
- 关键词：合成生物学代谢工程
