李俊
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain,FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性。方法:采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达,通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化,并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性。结果:优化后的FOXO1基因在21℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达,通过两步纯化即可获得95%以上纯度的FOXO1-DBD蛋白,纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性。结论:建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法,验证了FOXO1蛋白在识别DNA上的复杂性。
- 哈依努尔李俊陈永恒陈林陈主初
- 关键词：FOXO1DNA结合域表达纯化
- 5-羟色胺2B受体Nanodisc及其配体结合活性研究自组装
- 2017年
- 目的探索生物纳米盘（Nanodisc）在G蛋白偶联受体（GPCR）体外功能和药物筛选研究方面的应用。方法将重组表达获得的5-羟色胺2B受体（5-HT2BR）组装到Nanodisc中；利用蛋白质凝胶电泳和凝胶排阻层析对组装结果进行评估；通过表面等离子共振（SPR）对组装后的受体活性进行验证。结果5-HT2BR成功的进行了高效的Nanodisc自组装，且组装过后，5-HT2BR仍保持了与其拮抗剂SB204741的结合活性。结论为开发靶向5-HT2BR的特异性药物筛选提供了新的研究思路，同时也为运用Nanodisc技术在GPCR的结构、功能及药物筛选方面的研究奠定了基础。
- 代书炎彭芳李俊瞿灵芝蒋龙英陈小娟郭明邵美英陈永恒
- 关键词：受体药物评价临床前
- NR4A1 DNA结合域的表达纯化被引量：1
- 2015年
- 目的:寻求一种核受体家族蛋白NR4A1 DNA结合域(NR4A1 DNA binding domain,NR4A1-DBD)表达纯化的方法。方法:构建融合蛋白PET28a-NR4A1-DBD表达载体,分别通过镍亲和层析、阳离子交换层析及凝胶过滤的方法对目的蛋白进行纯化。结果:PET28a-NR4A1-DBD蛋白在低温诱导(24℃)时多以可溶性形式存在,通过此纯化,可达到每升培养基产生2~3 mg蛋白,纯度高达95%以上。结论:镍亲和层析是一种可靠、实用的蛋白表达纯化方法,后续使用阳离子交换层析及凝胶过滤可以进一步提高蛋白纯度。
- 闫宁宁李俊陈小娟陈永恒陈林陈主初
- 关键词：层析阳离子交换纯化
