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胡雪
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中国科学院武汉病毒研究所
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相关领域:
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合作作者
王云
中国科学院武汉病毒研究所
张晓
华中科技大学同济医学院
梁嘉前
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陈继征
中国科学院武汉病毒研究所
张雅婧
华中科技大学同济医学院
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I型内含子核酶介导靶向CEA双报告基因显像的体外研究
2015年
目的构建靶向CEA的以I型内含子核酶为载体核心介导的生物发光一核素双报告基因显像系统。方法采用基因工程技术构建靶向CEA的I型内含子核酶及核酶-荧光素酶-胸苷激酶(Rib53-Fluc-tk)报告质粒,采用细胞生物发光等方法检测核酶反式剪接产物的表达;以Iodogen固相氧化法合成131I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶(FIAU),行细胞摄取实验。采用两样本t检验、方差分析及最小显著差异(LSD)t检验进行统计分析。结果Rib53一Fluc—tk测序正确;乳腺癌细胞MCF-7的荧光素酶比值增高,可达O.64±0.10(n=4);MCF-7细胞转染Rib53-Fluc—tk后的反式剪接产物条带大小为520bp,测序结果正确;pCDNA3.1-CEA及Rib53-Fluc-tk共转人胚。肾细胞293T,可探测到生物发光信号。131I—FIAU的标记率为(64.02±4.79)%(n=3),放化纯为(95.96±1.07)%(n=3),标记产物在人血清中24h的稳定性高。293T单独转染Rib53-Fluc-tk,细胞摄取率仅为(0.31±0.01)%(n=4);293T共转染pCDNA3.1-CEA、Rib53-Fluc-tk质粒,细胞摄取率增加至(1.40±0.06)%(n=4),F=1007.29,t=136.34,P〈0.01。结论成功构建了I型内含子核酶为核心介导的靶向CEA的双报告基因系统,并对CEAmRNA进行了生物发光以及细胞摄取的检测,为改善传统报告基因显像的特异性奠定了体外实验的基础。
张雅婧
陈继征
高雪梅
胡雪
张晓
梁嘉前
高再荣
关键词:
癌胚抗原
生物发光成像
肿瘤细胞中杆状病毒蛋白Ac34对CRM1出核通路的抑制作用研究
2022年
目的:探讨Ac34蛋白在肿瘤细胞中对CRM1出核通路的抑制作用及其对肿瘤细胞生长的影响,为非供价结合的CRM1抑制剂的研发寻找新的方向。方法:选取多种CRM1在其中高表达的肿瘤细胞系:Hela细胞,Huh 7细胞和Hep G2细胞,通过瞬时共表达梯度浓度的Ac34质粒和携带有NES序列的荧光蛋白,激光共聚焦显微镜下观察荧光蛋白的细胞定位及检测Ac34对CRM1出核转运通路的抑制作用,并用WST-1 kit检测Ac34对肿瘤细胞增殖活力的影响。结果:Ac34可以使含有出核序列(NES)的荧光蛋白在Hela细胞的细胞核中发生聚集,且Ac34对肿瘤细胞增殖活力无影响。结论:Ac34在肿瘤细胞中可以抑制CRM1介导的蛋白质核输出,Ac34对肿瘤细胞增殖活性无影响。
李景琦
胡雪
王云
周缘
刘锦龙
白慧敏
关键词:
ACMNPV
抗肿瘤效应
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